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電荷變異體分析 

電荷異構(gòu)體分析是生物治療蛋白質(zhì)藥物的一項(xiàng)監(jiān)管要求。這些大的異質(zhì)分子在生產(chǎn)過程中歷經(jīng)多種酶促翻譯后修飾，例如糖基化 和 Fc 段賴氨酸切除。此外，在純化和儲存過程中可發(fā)生多種化學(xué)修飾，例如氧化和脫酰胺。蛋白質(zhì)電荷的均一性對蛋白藥物結(jié) 構(gòu)、穩(wěn)定性、親和力和療效有著非常重要的影響。離子交換電荷異構(gòu)體分析是一種高分辨率技術(shù)，在分析這些異構(gòu)體時(shí)非常有用。 ICH Q6B 等法規(guī)中規(guī)定使用蛋白質(zhì)電荷異構(gòu)體圖譜分析法。

基于 Orbitrap Fusion Lumos 平臺的簡單快速抗體藥物天冬氨酸異構(gòu)化解析 與小分子藥物相比，單抗藥物更易在生產(chǎn)、運(yùn)輸和儲存的過程中，發(fā)生各種翻譯后修飾的變化，影響藥物分子的穩(wěn)定性，同時(shí)影 響蛋白的結(jié)構(gòu)和功能。 由于異構(gòu)化本身不會引起分子量和電荷的變化，因此大大增加分析的難度。在完整蛋白的水平上，可以使用離子交換和親和色譜 進(jìn)行天冬氨酸異構(gòu)化分析，不過對于低豐度的異構(gòu)化水平就無法準(zhǔn)確確定。本方法使用 Thermofisher 納升級液相和最新的三合 一超高分辨質(zhì)譜儀 Orbitrap Fusion Lumos，采用 ETD 碎裂方式，建立了天冬氨酸異構(gòu)化質(zhì)譜解析方法，可以廣泛的應(yīng)用到常規(guī) 抗體藥物肽段的精細(xì)解析中。 通過設(shè)置脫酰胺化后修飾和查找包含天冬氨酸異構(gòu)化的特征碎片離子，在該抗體的酶解肽段中，最終準(zhǔn)確鑒定到發(fā)生天冬氨酸異 構(gòu)化的肽段有兩條，第一條發(fā)生天冬氨酸異構(gòu)化的肽段為 VVSVLTVLHQDWLNGK，其中第 14 位的 N 發(fā)生了脫酰胺化，并且在 該過程中，產(chǎn)生了異構(gòu)化的天冬氨酸；第二條包含異構(gòu)化位點(diǎn)的肽段為 GFYPSDIAVEWESNGQPENNYK，其中第 14 和第 19 位 的 N 發(fā)生了脫酰胺化，并且在該過程中，第 14 位的天冬酰胺發(fā)生了異構(gòu)化。