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蛋白純化是利用蛋白質(zhì)之間在物理和化學(xué)性質(zhì)上的差異,如分子量大小、電荷、溶解度、疏水性、親和性等,通過逐步進(jìn)行層析、沉淀、電泳等步驟,最終實現(xiàn)對目標(biāo)蛋白的純化。
主要有:
體積排除色譜;
親和層析法;
離子交換層析法;
電泳法等。
在實際操作中,通常需要根據(jù)目標(biāo)蛋白的性質(zhì)和實驗需求,靈活選擇并組合使用不同的分離純化方法,以形成分步分離純化的策略,以達(dá)到更高的純度和產(chǎn)量。
在實驗生產(chǎn)中,經(jīng)常需要同時處理多個蛋白樣品。如在藥物研發(fā)過程中,需要大量制備高純度、高活性的藥物蛋白。這些蛋白可能是藥物本身,也可能是藥物研發(fā)的重要靶標(biāo)或工具。通過高通量純化,可以加速藥物候選物的篩選和驗證過程,提高藥物研發(fā)的成功率。在生物治療領(lǐng)域,如基因治療、細(xì)胞治療等,需要制備高質(zhì)量的生物制劑。這些制劑需要高純度和高活性,以確保治療的安全性和有效性。高通量純化技術(shù)能夠滿足這些要求,為生物治療提供有力支持。但是使用手動操作進(jìn)行高通量純化實驗不僅費時費力,且容易引入人為誤差,在手動實驗過程中,交叉污染也是一個需要重點關(guān)注的問題。
瑞孚迪(Revvity)的自動化移液工作站能夠并行處理多個樣品,大幅提高純化效率,同時還可以解決手動進(jìn)行高通量蛋白純化所遇到的所有難點。工作站通過精確編程和傳感器控制,可以實現(xiàn)高精度的移液操作,減少體積誤差,這對于需要嚴(yán)格,控制反應(yīng)物比例的純化步驟尤為重要;通過程序控制操作過程,減少了人為因素帶來的誤差;通過一次性吸頭、自動清洗等功能,降低了交叉污染的風(fēng)險。
圖1
在實際實驗生產(chǎn)過程中,我們可以根據(jù)所需純化的樣品體積與樣品數(shù)量來選擇自動化方案。圖1所描述的多種自動化純化方案均可在瑞孚迪自動化移液工作站中實現(xiàn)。
Janus G3平臺
Fontus平臺
在完成高通量蛋白純化后,還可使用Labchip GXII進(jìn)行蛋白分析。
LabChip GXII Touch 24:低通量(1-24個樣本/run)
LabChip GXII Touch HT:高通量(1-96或384個樣本/run)
基于微流控毛細(xì)管 Lab-on-Chip 技術(shù)
上樣、分離、染色脫色、檢測、清洗、分析自動化
速度快:28-80s/sample
基于微流控毛細(xì)管 Lab-on-Chip 技術(shù)
生物大分子藥物研發(fā)和生產(chǎn)過程的篩選與質(zhì)控
抗體及其他生物類似物的濃度、純度、糖基化、聚合等指標(biāo)分析
蛋白質(zhì)大小及定量
蛋白表達(dá)和優(yōu)化
單克隆抗體生產(chǎn)
重組蛋白定量
糖譜分析