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做過DNA回收的小伙伴都知道,DNA片段回收方法大致包含以下步驟:DNA片段在適當(dāng)濃度的瓊脂糖凝膠中,通上一定電壓進(jìn)行電泳,不同大小的DNA分子由于遷移率的不同而分離開。切下帶有所需DNA片段的凝膠,用凍融法、玻璃奶回收法或商品化膠回收試劑盒將目的片段回收純化。
傳統(tǒng)膠回收大致會(huì)用到以下一些工具儀器:
← 依次為水平電泳槽、電泳槽配套電源、凝膠紫外燈、成像儀 →
此外還需要一些試劑耗材比如:TAE或者TBE (電泳緩沖液)、凝膠染液 (如: 溴化乙錠, SYBR Gold)、瓊脂糖......
傳統(tǒng)膠回收法要把整個(gè)目的片段所在位置的膠全部回收。所以為了減少膠的體積,我們通常會(huì)用相對(duì)比較薄的膠來跑電泳,或者采用薄而寬的梳子來跑膠。但是當(dāng)DNA濃度不夠時(shí),想要膠小點(diǎn)就無法實(shí)現(xiàn)。
紫外燈下切膠時(shí),易引入外源DNA的污染;
操作人員需要做好紫外光的防護(hù)工作。
若回收時(shí)膠塊未溶解、凝膠放置太久而失水干燥、電泳pH偏高或偏低、電泳緩沖液的濃度過高或陳舊,均可導(dǎo)致DNA回收效率低或者未回收到目的片段。
鑒于傳統(tǒng)膠回收法的種種不便和潛在“深坑",Lonza向大家提供了一個(gè)便捷的選擇:FlashGel System閃膠系統(tǒng)——一個(gè)超快的、釋放雙手的DNA/RNA分離和DNA回收設(shè)備。
FlashGel System全家福
(相機(jī)、系統(tǒng)電源、含電泳液的預(yù)制凝膠、電泳槽、系統(tǒng)配套Kit、護(hù)目鏡)
系統(tǒng)搭配:小巧便攜組件,全套Kit可供選擇。
特點(diǎn):無需配制凝膠,無需配緩沖液,非紫外光拍照,實(shí)時(shí)分離情況可視化,軟件支持下載圖像到筆記本電腦/手機(jī)上。
FlashGel™系統(tǒng)可以為您做些什么
1、5分鐘內(nèi)DNA分離。
2、10分鐘內(nèi)直接從盒中回收或純化DNA樣本,無需條帶切除
3、30分鐘內(nèi)分離RNA,沒有危險(xiǎn)試劑或RNases 污染。
應(yīng)用一:用于DNA分離(具有預(yù)制凝膠盒,用于分離從 50 bp到 4 kb的核酸)
優(yōu)點(diǎn)
1) 5分鐘內(nèi)DNA分離,實(shí)時(shí)可視條帶遷移
2) 在工作臺(tái)上拍攝凝膠,無紫外線,圖像可實(shí)時(shí)記錄
3) 可檢測(cè)<0.1 ng DNA,具有優(yōu)異的靈敏度和分辨率,靈敏度是溴化乙啶的20倍
(核酸電泳實(shí)時(shí)觀看)
應(yīng)用二:用于DNA回收(簡(jiǎn)單的DNA回收,不需要條帶切除)
優(yōu)點(diǎn)
1) 在10分鐘內(nèi)分離和回收DNA
2) 直接從盒中回收DNA樣本,不進(jìn)行條帶切除或純化
3) 在沒有紫外線的情況下可視化DNA回收,獲得80%-100%的效率
(預(yù)制雙排孔凝膠,內(nèi)含電泳液,靈活實(shí)現(xiàn)一排上樣一排回收,無需切膠)
應(yīng)用三:用于RNA分離(快速和方便的定性檢查的RNA分離)
優(yōu)點(diǎn)
1) 在工作臺(tái)上不到30分鐘內(nèi)分離RNA
2) 檢測(cè)每個(gè)條帶的<10 ng RNA,具有優(yōu)異的靈敏度和分辨率
3) 沒有危險(xiǎn)試劑或RNases污染
FlashGel亮點(diǎn)總結(jié)
1、操作簡(jiǎn)單:無需配制凝膠、無需配制緩沖液,提供預(yù)制膠盒【分離、回收】,只需將膠盒放入電泳槽中,混合樣品和loading dye進(jìn)行上樣,即可開始跑膠
2、高效快捷:特制電泳槽采用275V高電壓,只需 2-7min 即可完成50bp-4kb DNA的分離,10-20min 即可完成RNA的分離,5-10min 即可完成片段回收。最多可同時(shí)分離34個(gè)樣品
3、高靈敏度:與EB (溴化乙錠) 相比,F(xiàn)lashGel染料靈敏度提高5-20倍,可檢測(cè)0.1ng的DNA,或10ng的RNA,分析時(shí)可降低核酸濃度,減少上樣體積,節(jié)省珍貴樣品
4、無需紫外光下操作:依靠Dark Reader技術(shù),無需紫外光照射,核酸發(fā)光安全,可裸眼實(shí)時(shí)觀察跑膠情況,可方便地操作片段回收
5、圖像采集:無需暗房和紫外線,F(xiàn)lashGel Camera 系統(tǒng)通過一個(gè)封閉罩內(nèi)的相機(jī),可USB連接電腦,可通過屏幕觀察DNA遷移,并5min內(nèi)完成凝膠圖像采集
FlashGel閃膠系統(tǒng)很大程度的解放了科研小伙伴的雙手,讓核酸回收變得簡(jiǎn)易且高效,小東已經(jīng)看到大家的雙腳在向高分文章邁進(jìn)了!