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高鹽病毒制備難題:如何高效去除宿主細胞核酸?

2024-5-7  閱讀(73)

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核酸酶能夠有效去除各種形式的DNA和RNA,是去除宿主細胞核酸(HostCell DNA,HCD)的理想手段。但來自粘質(zhì)沙雷氏菌的全能核酸酶(如Pannarase、Benzonase等產(chǎn)品)最適Na+/ K+鹽濃度在0-20mM,有效范圍在0-150mM。多應用于中低鹽濃度的HCD去除。

如果在病毒制備中遇到高鹽條件,怎么更好的去除宿主細胞核酸?

在高鹽環(huán)境下,不僅可以抑制病毒載體聚集、提升產(chǎn)量。因此,在有的病毒制備工藝中,常采用高鹽方法進行細胞裂解來代替凍融裂解,釋放的病毒載滴度上會有提升。另外,高鹽環(huán)境下,核酸酶去除HCD在工藝上比一步層析或一部超濾更具效率,核酸酶做到更好的特異性,產(chǎn)品回收率更高,且避免了層析和超濾裝置的污染。

如果在下游純化中遇到高鹽條件,怎么更好的去除宿主細胞核酸?

在下游純化環(huán)節(jié),如果遇到高鹽洗脫的層析樣品中的HCD含量偏高,需要采取相應措施,通常是在層析后再利用核酸酶去除一次HCD。然而市面上的大多數(shù)全能核酸酶并不耐鹽,高鹽環(huán)境下就會失活,酶切效果大大降低。因此,選擇耐高鹽全能核酸酶是一個比較機智的方法。

逐典Pannarase耐高鹽全能核酸酶

Pannarase耐高鹽全能核酸酶是一種非特異性核酸內(nèi)切酶,可以將任何形式的DNA和RNA(線性、環(huán)形、超螺旋)降解成3’-單核苷酸及二核苷酸,并可在寬泛的鹽濃度和偏堿性pH操作條件下保持高效性。

所謂“工欲善其事,必先利其器",逐典Pannarase耐高鹽全能核酸酶符合GMP要求,專門為高鹽狀態(tài)下樣品的HCD去除設計,降低工藝難度,提升生產(chǎn)效率。

逐典Pannarase耐高鹽全能核酸酶優(yōu)勢

1,無動物源性,無氨芐青霉素、嚴格的內(nèi)毒控制

2,先進的生產(chǎn)工藝,非傳統(tǒng)His標簽純化、排除,引入金屬離子風險位

3,嚴格的質(zhì)控標準,確保單位酶活的、準確性以及批次間穩(wěn)定性

4,更高的鹽耐受性(0-500mMNaCI)、寬泛的pH范圍(7.0-11.0)

Pannarase在150 mM Na+濃度條件下酶活性最高




圖1.Pannarase耐高鹽全能核酸酶耐鹽曲線




圖2.Pannarase耐高鹽全能核酸酶酶切數(shù)據(jù)

實驗數(shù)據(jù):




非還原及還原的SDS-PAGE顯示蛋白分子量約16kDa,未見雜蛋白




尺寸排陽色譜顯示高純度,無聚焦體產(chǎn)牛


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