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Q1:在使用溫度低于最適溫度37℃時,如何保證全能核酸酶的應(yīng)用效果?
由于逐典全能核酸酶在0-45°C溫度范圍下都具有活力,全能核酸酶對核酸的消化效果取決于酶的添加量、消化溫度和反應(yīng)時間,當(dāng)反應(yīng)溫度較低時,可以適當(dāng)延長反應(yīng)時間;不能依賴增加全能核酸酶添加量保證消化效果,避免添加量過大導(dǎo)致全能核酸酶殘留的問題。
Q2：消化體系中的什么物質(zhì)會影響全能核酸酶的酶活和消化效果?
消化體系中若含有高濃度的鈉鹽、鉀鹽,超過200mM時會受到明顯抑制,其余高于100mM磷酸鹽,100mM硫酸銨等均會抑制酶活。特別是消化體系中如含有EDTA金屬離子絡(luò)合劑,級全能核酸酶所必需的Mg2+蝥合掉,會使全能核酸酶損失超過90%的酶活力,此時可通過增加Mg2+濃度使全能核酸酶活力得到恢復(fù)。
Q3:在病毒疫苗生產(chǎn)過程中使用了全能核酸酶,后續(xù)如何去除以保證疫苗符合核酸酶殘留標準?
可根據(jù)病毒疫苗的分子量選取超過全能核酸酶分子量2倍的切向流膜包,當(dāng)然若目標產(chǎn)物分子量較大,選取的切向流膜包(推薦300kDa切向超濾膜包孔徑越大去除效果越好,病毒疫苗均為大分子,所以目標產(chǎn)物可以有效被截留,而全能核酸酶可以被除去;以濃縮病毒疫苗為例,超濾置換完成5個體積,全能核酸酶的清除率即可達到99.5%。
Q4:生物制品中全能核酸酶的殘留量是衡量生物制品質(zhì)量的重要指標之一,如何判斷使用過程中最終產(chǎn)品的全能核酸酶殘留量?
全能核酸酶屬于重組蛋白表達產(chǎn)品,在生物制品中同樣不能有殘留,所以在生物制品生產(chǎn)過程中使用全能核酸酶去除核酸后,還需要對全能核酸酶進行清除,并且進行檢測,確保產(chǎn)品符合質(zhì)量標準要求。逐典可提供基于ELISA研發(fā)的全能核酸酶殘留檢測試劑盒,檢測限可達到0.2ng/mL。
