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一. 體外生物發(fā)光檢測
1)用無菌蒸餾水溶解D-熒光素鉀鹽,配制成30mg/mL的儲存液 (100-200×) ,混勻。立即使用,或分裝于-20℃避光保存,避免反復(fù)凍融。
2)用預(yù)熱好的組織培養(yǎng)基將儲存液稀釋至0.15-0.3mg/mL的工作液濃度。
3)去除細(xì)胞培養(yǎng)基。
4)待圖像分析前,向細(xì)胞內(nèi)添加熒光素工作液,37℃孵育5-10 min,然后進(jìn)行圖像分析。
二. 體內(nèi)活體成像分析
1)用無菌的DPBS (w/o Mg2+、Ca2+) 配制15 mg/mL的熒光素的儲存液,混勻。
2)用0.2 µm濾膜過濾除菌。立即使用,或分裝于-20℃避光保存,避免反復(fù)凍融。
3)腹腔注射(i.p.),按照150 mg/kg的熒光素/體重濃度進(jìn)行注射,以小鼠為例,每只小鼠體重假定20g,每只小鼠用量3mg;
4)注射入體內(nèi)10-15 min(待光信號達(dá)到強(qiáng)穩(wěn)定平臺期)后進(jìn)行成像分析。
注:建議對每只動物模型都需要建立熒光素酶動力學(xué)曲線,從而確定最高信號檢測時間和信號平臺期。
三,逐典D-螢光素鉀鹽優(yōu)勢
1.高純度(HPLC驗(yàn)證純度≥99%)
2.優(yōu)異的生物發(fā)光性能
3.高溶解度(>40mg/ml)
四,應(yīng)用場景
D-熒光素鉀鹽在不同領(lǐng)域具有多種應(yīng)用場景。其中包括蛋白表達(dá)研究、抗腫瘤或抗病物研究以及mRNA疫苗開發(fā)等。
蛋白表達(dá)研究:將Luc基因插入需要研究的蛋白中,可用于定量目標(biāo)蛋白在實(shí)驗(yàn)動物體內(nèi)的表達(dá)情況。
抗腫瘤或抗病物:在腫瘤細(xì)胞或病毒中導(dǎo)入Luc基因,建立腫瘤或病毒感染小鼠模型,注射藥物后,通過活體成像技術(shù)觀測腫瘤大小或病毒感染的變化。
mRNA疫苗開發(fā):在mRNA中插入Luc基因,脂質(zhì)體包裹后注射實(shí)驗(yàn)動物后,可通過活體成像技術(shù)可觀測疫苗的免疫效果。
五,應(yīng)用案例分享