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隨著生物醫(yī)藥技術(shù)的迅猛進(jìn)步，哺乳動(dòng)物細(xì)胞系因其連續(xù)傳代的特性，在疫苗和治療性生物制品的生產(chǎn)中發(fā)揮著日益重要的作用。然而，這種生產(chǎn)過(guò)程中不可避免地會(huì)涉及宿主細(xì)胞和病毒殘余DNA的傳遞問(wèn)題，進(jìn)而可能給受種者帶來(lái)癌基因激活和病毒感染的風(fēng)險(xiǎn)。因此，核酸殘留問(wèn)題成為了藥品監(jiān)管部門(mén)關(guān)注的焦點(diǎn)，特別是關(guān)于其安全性評(píng)價(jià)。
殘留DNA（rDNA）的潛在危害不容忽視。其中，感染性rDNA指的是那些能夠整合到染色體外或存在于其中的DNA病毒，以及反轉(zhuǎn)錄病毒中的潛在前病毒基因組。這些感染性成分可能直接對(duì)受種者的健康構(gòu)成威脅。此外，rDNA還可能具有致瘤性，這主要是通過(guò)兩種機(jī)制實(shí)現(xiàn)的：一是引入顯性致癌基因，如myc和ras等，導(dǎo)致正常細(xì)胞分化異常，進(jìn)而可能產(chǎn)生致瘤性；二是rDNA的插入可能引起正常細(xì)胞的基因突變。盡管由于DNA整合頻率相對(duì)較低，這種致癌現(xiàn)象并不常見(jiàn)，但一旦發(fā)生，后果可能是嚴(yán)重的。
除了感染性和致瘤性，rDNA還可能引發(fā)免疫原性反應(yīng)。這種免疫原性往往來(lái)自于細(xì)菌DNA中富含的CpG序列。當(dāng)這些序列進(jìn)入人體后，可能觸發(fā)免疫系統(tǒng)的反應(yīng)，導(dǎo)致不必要的健康風(fēng)險(xiǎn)。
鑒于rDNA的這些潛在危害，生物制品生產(chǎn)過(guò)程中對(duì)殘留核酸的檢測(cè)和去除顯得尤為重要。世界衛(wèi)生組織（WHO）及各國(guó)藥物監(jiān)管機(jī)構(gòu)均對(duì)此有明確規(guī)定，要求用于治療用途的重組生物制品中的核酸污染應(yīng)嚴(yán)格控制在一定范圍內(nèi)。一般來(lái)說(shuō)，每劑最終產(chǎn)品中的核酸污染應(yīng)限制在100 pg以下，特殊情況下也不得超過(guò)10 ng。
為了實(shí)現(xiàn)這一目標(biāo)，生物制品生產(chǎn)企業(yè)需要采取一系列措施，包括優(yōu)化生產(chǎn)工藝、加強(qiáng)原材料的質(zhì)量控制、采用高效的核酸去除技術(shù)等。同時(shí)，監(jiān)管部門(mén)也應(yīng)加強(qiáng)監(jiān)管力度，確保企業(yè)嚴(yán)格按照規(guī)定進(jìn)行生產(chǎn)，以保障公眾用藥安全。
綜上所述，生物醫(yī)藥技術(shù)的發(fā)展為疫苗和治療性生物制品的生產(chǎn)提供了更多可能性，但同時(shí)也帶來(lái)了新的挑戰(zhàn)。對(duì)于rDNA等核酸殘留問(wèn)題，我們需要從多個(gè)方面入手，加強(qiáng)研究和監(jiān)管，確保生物制品的安全性和有效性。
表1：我國(guó)部分疫苗及治療用生物制品殘余DNA標(biāo)準(zhǔn)
鑒于rDNA去除過(guò)程中遇到的聚集、包裹以及沉淀等挑戰(zhàn)，傳統(tǒng)的去除方法效率確實(shí)不盡如人意，而酶解法盡管有效，但操作復(fù)雜且條件難以穩(wěn)定。因此，尋找一種高效且易于操作的核酸去除方法顯得尤為重要。
逐典Pannarase全能核酸酶作為一種非特異性核酸內(nèi)切酶，展現(xiàn)出了優(yōu)勢(shì)。其來(lái)源于Serratia marcescens，能夠在多種條件下高效降解各種形式的DNA和RNA，生成特定大小的寡核苷酸殘基片段。這種酶對(duì)核酸堿基序列沒(méi)有特異性要求，意味著它可以在核酸鏈內(nèi)的任意位置進(jìn)行切割，從而大大提高了去除殘留核酸的效率。
逐典Pannarase全能核酸酶優(yōu)勢(shì)：
1.無(wú)動(dòng)物源性、無(wú)氨芐青霉素
2.杰出單位比酶活、更高效的核酸降解能力
3.先進(jìn)的生產(chǎn)工藝，非傳統(tǒng)His標(biāo)簽純化、排除引入金屬離子風(fēng)險(xiǎn)
4.嚴(yán)格的質(zhì)控標(biāo)準(zhǔn)，內(nèi)毒水平低，確保單位酶活的準(zhǔn)確性以及批次間穩(wěn)定性
全能核酸酶應(yīng)用條件：
全能核酸酶的酶活會(huì)受到多種因素的影響（例如溫度、pH、離子強(qiáng)度等），故用量范圍也會(huì)從0.1 U/mL-250 U/mL不等。因此，不同的操作環(huán)境下酶的最佳濃度不同，需要通過(guò)實(shí)驗(yàn)設(shè)置梯度進(jìn)行最佳條件的摸索。
應(yīng)用實(shí)例：
1.樣品：狂犬病毒濃縮液
處理?xiàng)l件:核酸酶濃度50~90U/ml ,
37 ℃處理 2 h,轉(zhuǎn)入18 ~ 26 ℃處理 6h
2.樣品：狂犬病病毒濃縮液
處理?xiàng)l件：25、50和100 U/ml，37℃
3.樣品：流感病毒濃縮液
處理?xiàng)l件：10 U/mL，37℃
