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一,什么是病毒
具有感染性,能夠?qū)е录膊〉奈⑿〉姆羌毎蜕铩?/p>
各種形態(tài)和大小的病毒
雖然形態(tài)不一樣,但是大部分的病毒在分子水平上的組成上有一定的相似性
二,病毒顆粒的共有元件:
1. 由DNA或RNA組成的基因組(遺傳物質(zhì))
2. 包裹著病毒基因組的蛋白質(zhì)衣殼(capsid)
3. 某些病毒具有脂質(zhì)包膜(envelope)
4. 介導(dǎo)進入宿主細胞的蛋白
三,病毒的生命周期
病毒的侵入階段(virus entry)是開發(fā)抗病du藥物和疫苗的重要靶點
1. 粘附(Attachment)
2. 穿入(Penetration)
3. 脫衣殼(Uncoating)
4. 生物合成(Biosynthesis)
5. 組裝(Assembly)
6. 釋放(Release)
四,報告基因檢測已廣泛應(yīng)用于病毒研究中
應(yīng)用報告基因技術(shù)的好處:
• 可以消除或減少操作傳染性病毒的需要
• 可以在更低級別的生物安全實驗室中進行研究
• 可以加速高風(fēng)險病毒的研究
五,借助假病毒顆粒和螢光素酶報告基因定量檢測病毒侵入
假病毒顆粒( Pseudotyped Viral Particles,PVPs)
• 病毒衣殼蛋白或包膜蛋白包裹攜帶有報告基因的異源核酸
• 不具備復(fù)制形成病毒全部核酸序列的能力,僅有一輪感染能力
• 可更安全的用于中和抗體及抗病du藥物檢測
• 利用表達載體和包裝質(zhì)粒共轉(zhuǎn)染細胞,在細胞內(nèi)組裝形成
我們可以通過收集培養(yǎng)基上清,裂解細胞獲得假病毒顆粒,獲得假病毒顆粒后,用它來感染帶有相應(yīng)受體的細胞,72h后經(jīng)過粘附,穿入和脫衣殼,病毒攜帶的報告基因會在細胞內(nèi)表達,通過檢測報告基因的表達水平,就可以判斷病毒侵入的水平。 這里的報告基因是螢光素酶,螢光素酶更適用于定量檢測的報告基因。當(dāng)我們要研究中和抗體實驗的時候可以在病毒最初的粘附階段進行相應(yīng)的處理,檢測其對病毒侵入是否有抑制作用。
假病毒顆粒,其衣殼蛋白或包膜蛋白會包裹攜帶有報告基因的異源核酸,并且這種假病毒顆粒不具備復(fù)制形成病毒全部核酸序列的能力,僅有一輪感染能力。所以可以更安全的用于中和抗體及抗病du藥物檢測。
逐典螢光素酶報告基因
針對報告基因檢測不同的側(cè)重需求,逐典推出了3種檢測系統(tǒng)。
逐典螢光素酶報告基因特點:
1. 檢測靈敏度高,信號穩(wěn)定性好
HEK293-NFK B-LUC細胞加入梯度稀釋的TNF 在37C、5%CO條件下刺激6小時后,分別用增強型、超敏型、穩(wěn)定型檢測試劑進行信號檢測。
2. 操作方便
僅需將底物和螢光素酶檢測緩沖液混合后直接加入到細胞即可。
3. 穩(wěn)定性好
同時在10次反復(fù)凍融實驗中,逐典全系列報告基因檢測試劑盒顯示出較強的穩(wěn)定性。