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一,藥物研發(fā)關(guān)鍵點(diǎn)
二,理想的藥物靶標(biāo)篩選模型
1)高靈敏度
2)寬的線性范圍
3)穩(wěn)定且可重復(fù)
4)操作簡(jiǎn)單
5)可進(jìn)行高通量篩選
三,高靈敏度發(fā)光檢測(cè)技術(shù):螢光素酶檢測(cè)技術(shù)
熒光與化學(xué)發(fā)光的比較
由于熒光需要光激發(fā)后才能發(fā)出光,因此必須有一種方法可以區(qū)分輸入光和輸出光,需要濾光片將某些波長(zhǎng)的光過(guò)濾掉,只讓發(fā)射光的波長(zhǎng)通過(guò)。然而,沒(méi)有任何濾光片是的,總有一定量的激發(fā)光會(huì)透過(guò)濾光片,因此就增加了背景噪聲。
生物化學(xué)發(fā)光過(guò)程不需要外部光源,均從發(fā)光過(guò)程中產(chǎn)生。這意味著沒(méi)有背景光。因此,產(chǎn)生的光與測(cè)得的光之間存在很強(qiáng)的線性相關(guān)性,其線性范圍遠(yuǎn)大于熒光:發(fā)光過(guò)程為7~8個(gè)數(shù)量級(jí),而熒光過(guò)程僅為3~4個(gè)數(shù)量級(jí)。
螢光素酶:是自然界中能夠產(chǎn)生生物發(fā)光的酶的統(tǒng)稱。
1. 具有酶活性(信號(hào)放大能力)
2. 蛋白小
3. 沒(méi)有內(nèi)源性表達(dá),背景低
4. 易于定量
5. 高靈敏度、線性范圍寬
6. 反應(yīng)迅速
7. 可實(shí)現(xiàn)雙螢光素酶報(bào)告基因檢測(cè)
四,螢光素酶技術(shù)應(yīng)用于藥物靶標(biāo)篩選
基于螢光素酶的應(yīng)用,開(kāi)發(fā)藥物靶標(biāo)篩選產(chǎn)品:
1)檢測(cè)螢光素酶水平的變化;
2)檢測(cè)ATP,例如:
• RealTime-GloTM Extracellular ATP 檢測(cè)
• GTPase-GloTM檢測(cè)
• ENLITEN® ATP 檢測(cè)
• 激酶活性檢測(cè)
• 細(xì)胞/細(xì)菌活力檢測(cè)
• cAMP
• Pgp糖蛋白檢測(cè)
3)檢測(cè)修飾的螢光素底物,例如:
• Caspase 3/7活性檢測(cè)
逐典螢光素酶報(bào)告基因檢測(cè)試劑盒
逐典螢光素酶報(bào)告基因檢測(cè)試劑盒旨在準(zhǔn)確、靈敏、高效地測(cè)定螢火蟲(chóng)螢光素酶活性,應(yīng)用高通量藥物篩選、藥物活性檢測(cè)、大規(guī)模啟動(dòng)子功能測(cè)定、信號(hào)通路等研究。
目前,最常使用的螢光素酶主要包括 Firefly luciferase 和 Renilla luciferase,針對(duì)報(bào)告基因檢測(cè)不同的側(cè)重需求,逐典推出了3種檢測(cè)系統(tǒng)。