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D-Luciferin potassium salt中文名為D-螢光素鉀鹽，是受歡迎和通用的生物發(fā)光底物。螢光素酶/螢光素生物發(fā)光系統(tǒng)在螢火蟲(Photinus pyralis)和其他幾種甲蟲中被發(fā)現(xiàn)。熒光素酶通過二氧酮中間體氧化ATP活化的熒光素。螢火蟲熒光素酶通過ATP依賴的氧化熒光素產(chǎn)生光。該反應(yīng)產(chǎn)生的 560nm 化學(xué)發(fā)光在幾秒鐘內(nèi)達(dá)到峰值，當(dāng)熒光素和ATP過量時(shí)，光輸出與熒光素酶活性成正比。螢火蟲熒光素酶長(zhǎng)期以來一直被偶聯(lián)到抗體和使用熒光素作為檢測(cè)底物的免疫分析標(biāo)簽。與辣根過氧化物酶和堿性磷酸酶相比，熒光素酶對(duì)化學(xué)修飾的耐受性較差。在科研領(lǐng)域，D-Luciferin廣泛應(yīng)用于基于螢火蟲螢光素酶的報(bào)告基因檢測(cè)和動(dòng)物的活體成像實(shí)驗(yàn)。此外，熒光素酶的另一個(gè)重要用途是衛(wèi)生監(jiān)測(cè)領(lǐng)域。熒光素酶/熒光素系統(tǒng)可用于檢測(cè)污染，因?yàn)樗猩矬w中都存在ATP來產(chǎn)生發(fā)光。這種類型的ATP生物發(fā)光的主要應(yīng)用是通過測(cè)試食品加工廠的表面來確定設(shè)備或產(chǎn)品是否受到污染來保證質(zhì)量。
體外實(shí)驗(yàn)方法
1.100×螢火蟲熒光素酶底物收到后，若需要多次實(shí)驗(yàn)請(qǐng)分裝，避光保存在-20℃，避免反復(fù)凍融；
2.準(zhǔn)備過程：在預(yù)熱過的培養(yǎng)基中制備0.5-1 mM的D-熒光素工作溶液；
3.細(xì)胞實(shí)驗(yàn)：正常培養(yǎng)的細(xì)胞棄去培養(yǎng)基，加入熒光素工作溶液，37°C下孵育細(xì)胞5-10分鐘進(jìn)行成像實(shí)驗(yàn)。
體內(nèi)成像實(shí)驗(yàn)
1.在DPBS中制備15 mg/mL的熒光素原液，0.22 μm膜過濾保存，現(xiàn)配先用，若保存需避光保存在-20℃，避免反復(fù)凍融。
2.腹腔注射用量：根據(jù)動(dòng)物體重參考用量為150 mg/kg（或10 μL/g上述制備的原液），參考時(shí)間為10-15 min后進(jìn)行成像。實(shí)際操作建議應(yīng)該對(duì)每個(gè)動(dòng)物模型進(jìn)行熒光素的動(dòng)力學(xué)研究，以確定峰值信號(hào)時(shí)間。
逐典D-螢光素鉀鹽優(yōu)勢(shì)
1.高純度（HPLC驗(yàn)證純度≥99%)
2.優(yōu)異的生物發(fā)光性能
3.高溶解度（>40mg/ml)
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