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在分子生物學(xué)研究范疇中,報告基因(reporter gene)作為常用的基因工具,發(fā)揮著不可替代的重要作用。報告基因是一種編碼易被檢測的蛋白質(zhì)基因,與目的基因融合表達后,其表達產(chǎn)物可以用來標定目的基因的表達情況。通常通過直接測定報告基因mRNA、蛋白或酶活性來檢測報告基因是否在細胞中表達。
在分子生物學(xué)研究中,報告基因確實是一個非常重要的工具。報告基因是一種編碼易被檢測的蛋白質(zhì)的基因,當它與目的基因融合后,可以通過檢測報告基因的表達產(chǎn)物來了解目的基因的表達情況。報告基因的表達產(chǎn)物可以是mRNA、蛋白質(zhì)或酶等,這些產(chǎn)物可以被特定的檢測方法所識別和測量。
作為報告基因,在遺傳選擇和篩選檢測方面必須具有以下幾個條件:
① 已被克隆和全序列已測定;
② 表達產(chǎn)物在受體細胞中不存在,且在被轉(zhuǎn)染的細胞中無相似的內(nèi)源性表達產(chǎn)物;
③ 其表達產(chǎn)物能進行定量測定。
除此之外,理想的報告基因還應(yīng)做到細胞內(nèi)其它基因的產(chǎn)物不會干擾報告基因產(chǎn)物的檢測,并且產(chǎn)物檢測方法應(yīng)該快速、簡便、靈敏度好且重復(fù)性好。
隨著科學(xué)技術(shù)的不斷發(fā)展,報告基因的種類越來越豐富。綠色熒光蛋白基因(GFP)因其易于檢測、熒光性質(zhì)穩(wěn)定、無細胞毒性、可用于活細胞檢測等優(yōu)點,而被廣泛用于生命科學(xué)研究。用395nm的紫外線和475nm的藍光激發(fā),GFP可在508nm處自行發(fā)射綠色熒光,無需輔助因子和底物,用常規(guī)的熒光顯微鏡即可定性檢測胞內(nèi)表達情況。增強型綠色熒光蛋白(eGFP)突變體,發(fā)射出的熒光強度比野生型GFP大6倍以上,因此,比GFP更適合作為一種報告基因來研究基因表達、調(diào)控、細胞分化及蛋白質(zhì)在生物體內(nèi)定位和轉(zhuǎn)運等。
除常見的GFP外,紅色熒光蛋白在1999年被報道,以其能夠與GFP共同使用,解決一些GFP單獨解決不了的科學(xué)問題,同時因其激發(fā)和發(fā)射波長更長,在細胞內(nèi)成像時背景低等優(yōu)點,受到廣大科研工作者的青睞。如mCherry是一種紅色熒光蛋白的變種,來自于mushroom coral的紅色熒光蛋白,被廣泛用于生物技術(shù)作為示蹤劑的紅色熒光染料,包括分子的標記和細胞組分的定位等。表現(xiàn)出熒光亮度及光穩(wěn)定型,以及更低的細胞毒性。
螢火蟲螢光素酶(Firefly luciferase)是一種分子量約為61kD的蛋白,在ATP、鎂離子和氧氣存在的條件下,可以催化luciferin氧化成oxyluciferin,在luciferin氧化的過程中,會發(fā)出波長為560nm左右的生物螢光(bioluminescence),是目前體內(nèi)外檢測實驗中常用螢光素酶,可作為對照研究靶基因在哺乳動物細胞中的翻譯效率,細胞活力和體內(nèi)成像測定。
逐典螢光素酶報告基因
針對報告基因檢測不同的側(cè)重需求,逐典推出了3種檢測系統(tǒng)。
逐典螢光素酶報告基因特點:
1. 檢測靈敏度高,信號穩(wěn)定性好
HEK293-NFK B-LUC細胞加入梯度稀釋的TNF 在37C、5%CO條件下刺激6小時后,分別用增強型、超敏型、穩(wěn)定型檢測試劑進行信號檢測。
2. 操作方便
僅需將底物和螢光素酶檢測緩沖液混合后直接加入到細胞即可。
3. 穩(wěn)定性好
同時在10次反復(fù)凍融實驗中,逐典全系列報告基因檢測試劑盒顯示出較強的穩(wěn)定性。