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細(xì)胞因子是由免疫細(xì)胞(如單核、巨噬細(xì)胞、T細(xì)胞、B細(xì)胞、NK細(xì)胞等)和某些非免疫細(xì)胞(內(nèi)皮細(xì)胞、表皮細(xì)胞、纖維母細(xì)胞等)經(jīng)刺激而合成、分泌的一類(lèi)具有廣泛生物學(xué)活性的小分子蛋白質(zhì)。其作用是通過(guò)結(jié)合相應(yīng)受體調(diào)節(jié)細(xì)胞生長(zhǎng)、分化和效應(yīng),調(diào)控免疫應(yīng)答。細(xì)胞因子,是細(xì)胞分化和行使功能時(shí)的產(chǎn)物,相當(dāng)于人體內(nèi)各類(lèi)細(xì)胞間相互交流的“信使"。它們被廣泛地應(yīng)用于醫(yī)學(xué)診斷、抗癌治療、免疫調(diào)節(jié)、以及自身免疫等多種領(lǐng)域。
一、常見(jiàn)細(xì)胞因子
細(xì)胞因子可分為白細(xì)胞介素(interleukin, IL)、干擾素 (interferon, IFN)、腫 瘤 壞 死 因 子 (tumornecrosisfactor,TNF)、集落刺激因子(colony stimulating factor, CSF)、生長(zhǎng)因子、趨化性細(xì)胞因子等。眾多的細(xì)胞因子在體內(nèi)通過(guò)旁分泌、自分泌或內(nèi)分泌等方式發(fā)揮作用,同時(shí)具有多效性、重疊性、拮抗性、協(xié)同性等多種生理特性,從而形成較復(fù)雜的細(xì)胞因子調(diào)節(jié)網(wǎng)絡(luò),參與人體多種重要的生理功能。
二、常見(jiàn)細(xì)胞因子檢測(cè)方法
1、ELISA測(cè)定
酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定(ELISA)指將可溶性的抗原或抗體結(jié)合到聚苯乙烯等固相載體上,利用抗原抗體特異性結(jié)合進(jìn)行免疫反應(yīng)的定性和定量檢測(cè)方法。
特點(diǎn):穩(wěn)定性好、提高檢出率、分子量大,操作簡(jiǎn)單、快速、敏感性高、特異性強(qiáng)、實(shí)驗(yàn)設(shè)備要求簡(jiǎn)單、應(yīng)用范圍廣泛、無(wú)放射性污染、能定性及半微量、微量、超微量定量分析,是目前應(yīng)用廣,發(fā)展最快的酶免疫學(xué)技術(shù)方法。
2、CBA測(cè)定
Cytometric Bead Array(CBA)是指細(xì)胞因子微球檢測(cè)技術(shù)。即微量樣本多指標(biāo)流式蛋白定量技術(shù)是一個(gè)基于流式細(xì)胞檢測(cè)系統(tǒng)的多重蛋白定量檢測(cè)方法,它能夠同時(shí)對(duì)單個(gè)樣品中的多個(gè)指標(biāo)進(jìn)行檢測(cè)。是一種基于流式細(xì)胞檢測(cè)系統(tǒng)的多重蛋白定量檢測(cè)方法,它能夠同時(shí)對(duì)單個(gè)樣品中的多個(gè)指標(biāo)進(jìn)行檢測(cè)。
特點(diǎn):樣本用量少,多指標(biāo)檢測(cè);操作方便,節(jié)省時(shí)間;同一樣本同時(shí)檢測(cè),誤差小,精密度高;標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)自動(dòng)測(cè)定,專(zhuān)用軟件自動(dòng)計(jì)算,檢測(cè)范圍寬,靈敏度高;無(wú)酶-底物背景干擾。
3、FCM測(cè)定
流式細(xì)胞術(shù)是一種生物學(xué)技術(shù),用于對(duì)懸浮于流體中的微小顆粒進(jìn)行計(jì)數(shù)和分選。這種技術(shù)可以用來(lái)對(duì)流過(guò)光學(xué)或電子檢測(cè)器的一個(gè)個(gè)細(xì)胞進(jìn)行連續(xù)的多種參數(shù)分析。流式細(xì)胞術(shù)(Flow CytoMetry,F(xiàn)CM)是對(duì)懸液中的單細(xì)胞或其他生物粒子,通過(guò)檢測(cè)標(biāo)記的熒光信號(hào),實(shí)現(xiàn)高速、逐一的細(xì)胞定量分析和分選的技術(shù)。
特點(diǎn):可以檢測(cè)依托流式平臺(tái)檢測(cè)同時(shí)檢測(cè)多指標(biāo)。
4、RT-PCR測(cè)定
細(xì)胞因子的mRNA壽命短且拷貝數(shù)低,因此難以在小量樣本中進(jìn)行檢測(cè)。RT-PCR是一種能檢測(cè)細(xì)胞內(nèi)低豐度特異RNA的方法,其原理是首先以RNA為模板,在逆轉(zhuǎn)錄酶的催化下,合成與RNA互補(bǔ)的cDNA。然后以cDNA為模板,用PCR技術(shù)對(duì)靶序列進(jìn)行擴(kuò)增,使微量細(xì)胞因子的RNA經(jīng)放大后檢出。RT-PCR能檢出單個(gè)細(xì)胞中少于10個(gè)拷貝的特異RNA,如同時(shí)放大內(nèi)參照物(如β-Actin),即可對(duì)RT-PCR檢出的細(xì)胞因子mRNA進(jìn)行定量。