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Millipore Amicon Ultra超濾離心管應(yīng)用：

• 生物樣品濃縮：包括抗原、抗體、酶、核酸或微生物

• 組織培養(yǎng)提取物或細(xì)胞裂解液中大分子組分的純化

• 對(duì)稀釋或從柱洗脫液預(yù)先純化的蛋白質(zhì)進(jìn)行濃縮

• 脫鹽和緩沖液更換

Millipore Amicon Ultra超濾離心管訂購(gòu)信息：

改進(jìn)了垂直膜的設(shè)計(jì)，Amicon Ultra-0.5系列性能更好，離心時(shí)間更短

Amicon Ultra-4系列，用于濃縮物體積 1–4mL 的合適裝置

Amicon Ultra-4 超濾管超濾管使用離心管和蓋裝配。

Amicon Ultra-15系列，用于濃縮物體積 <15 mL

Amicon Ultra-15 超濾管超濾管使用離心管和蓋裝配

蛋白濃縮和換Buffer通常使用的超濾管，常用Millipore的Amicon-Ultra-15超濾管（MWCO10kD）。也有其它型號(hào) 的、不同體積大小和MWCO超濾管可選，視目的蛋白的分子量與濃縮前體積、濃縮目標(biāo)體積而定?？芍貜?fù)使用，使用一次就扔掉太浪費(fèi)。

1、選擇合適的超濾管，主要考慮MWCO和濃縮體積，最常見(jiàn)的是Ultra-15（10kD）。到底選擇多大截留分子量比較合適呢？10kDa、 5kDa、還是30kDa？通常應(yīng)截留分子量不應(yīng)大于目的蛋白分子量的1/3，比如目的蛋白分子量為35kDa，就可以選擇10kDa截留分子量的超濾 管。若目的蛋白分子量為10kD左右，則可以用截留分子量3kD的超濾管。認(rèn)真閱讀使用說(shuō)明書(shū)，注意超濾膜對(duì)各種化學(xué)物質(zhì)的耐受程度有所不同，表格中有。

2、新買來(lái)的超濾是干燥的，使用前加入MilliQ水，水量*過(guò)膜，冰浴或冰箱里預(yù)冷幾分鐘。然后將水倒出，即可加入蛋白液，加入的多少，以不超過(guò)管頂?shù)陌拙€為準(zhǔn)。操作要輕，加入蛋白液前，超濾管需要插在冰上預(yù)冷。

3、平衡。質(zhì)量和重心二者都要達(dá)到平衡。注意轉(zhuǎn)速和加速度不可太快，否則直接損壞超濾膜。開(kāi)始離心超濾（離心機(jī)預(yù)冷至4度）。不同離心機(jī)的轉(zhuǎn)速 rpm換算成g之后，有所不同。具體可參閱附件里的說(shuō)明書(shū)。離心機(jī)的加速度調(diào)至比較低檔，減小對(duì)膜的壓力。注意，一定要等離心機(jī)達(dá)到目的轉(zhuǎn)速之后，方可離開(kāi) 離心機(jī)，否則離心機(jī)出問(wèn)題時(shí)，無(wú)法第一時(shí)間處理，后果不可預(yù)測(cè)！膜與轉(zhuǎn)軸的方向根據(jù)說(shuō)明書(shū)調(diào)整（角轉(zhuǎn)離心機(jī)的情況是膜與軸垂直）。在實(shí)際使用中，一般轉(zhuǎn)速 開(kāi)的比說(shuō)明書(shū)里的要低，這樣可以延長(zhǎng)離心管的使用壽命。

4、當(dāng)濃縮到剩下1ml時(shí)，【取50ul國(guó)產(chǎn)Bradford溶液，加入10ul流穿，看有沒(méi)變藍(lán)色，以此判斷超濾管是否漏掉蛋白。如果管漏了，將 上層和流穿重新倒入新管中開(kāi)始超濾。要精確判斷是否漏管，用5mg/ml的BSA離心10min，再取流穿，跑蛋白膠或Bradford粗測(cè)】，繼續(xù)加入 剩下的蛋白液濃縮（在冰上操作，防止蛋白受熱），直到所有濃縮液都加完為止。離心過(guò)程中注意是否發(fā)生蛋白沉淀，導(dǎo)致堵管。若發(fā)生沉淀，要確定沉淀的具體原 因，是蛋白濃度過(guò)高還是Buffer不合適；前者可用多根超濾管同時(shí)超濾，降低濃度的辦法解決，后者的方法是換不同的Buffer，直到蛋白不發(fā)生沉淀為 止。

5、前面幾步用以濃縮蛋白，如果要換Buffer，在總蛋白液濃縮至1ml左右的時(shí)候，輕輕加入新的Buffer（經(jīng)0.22um超濾膜超濾），再 濃縮至1ml左右，連續(xù)三次，最后一次的濃縮終體積根據(jù)需要的蛋白濃度而定，一般不多于500ul，也有濃縮至200ul以內(nèi)的情況。按照每次至少10倍 左右的體積濃縮算，三次達(dá)到1000倍以上，基本上可以達(dá)到換buffer的目的。

6、取出最終蛋白濃縮液的操作在冰上操作，用黃槍頭（200ul）取，輕輕順著邊緣插入槍頭，輕輕吹打、混勻蛋白液，注意不要碰到超濾膜，然后吸取 濃縮液，每次吸接近200ul，直到吸完。管底剩下的最后一點(diǎn)濃縮液不必吸取，否則難度太大，有可能損壞超濾膜。最后加入MilliQ水到超濾管中，沒(méi)過(guò) 超濾膜，防止膜失水變干。

7、以下是處理超濾管，重復(fù)利用超濾管的步驟。

8、倒出超濾管里的水，用milliQ水輕輕潤(rùn)洗幾次，【若管底有可見(jiàn)的蛋白沉淀，可以先加入水，然后用槍頭吹打，注意不要碰到膜，吹打至沉淀懸 起，然后倒掉，不可用自來(lái)水猛沖】然后加入0.2M的NaOH溶液，室溫放置20min，期間平衡超濾管。再離心10min。倒出殘留的NaOH溶液，將 管芯浸入MilliQ水的燒杯(1或2L)中,放置幾個(gè)小時(shí),再換新的水,放置幾個(gè)小時(shí)，不斷稀釋NaOH濃度。50ml管和蓋子用自來(lái)水洗，內(nèi)壁再用 MilliQ水洗干凈。

9、取出浸沒(méi)的管芯，加至接近滿的MilliQ水，50ml管也加滿MilliQ水，將管芯慢慢放入50ml離心管，排出部分水，然后蓋上蓋子，放4度保存，直到下次使用。一般來(lái)說(shuō)，按照上述步驟和注意事項(xiàng)，每根管用三四年不會(huì)壞。

問(wèn)：超濾管能重復(fù)使用嗎？

答：可以。一般也就用個(gè)一兩次就換新的，網(wǎng)絡(luò)顯示可用2-5次。

用離心管濃縮一種蛋白，可以考慮使用，先用緩沖液洗滌，再用去離子水反復(fù)洗滌。殘留蛋白雜質(zhì)多時(shí)，可以0.1N NaOH 清洗以及0.1% SDS清洗，去除和溶解蛋白質(zhì)及其他雜質(zhì)的。然后將超濾離心管的超濾膜泡在疊*鈉溶液或20%的乙醇溶液中，防止長(zhǎng)菌，而且防干，只要超濾膜侵了水，就不可以再讓它干，否則超濾膜的分子結(jié)構(gòu)就變了。

不可以用超聲洗滌！

注意：

1. 本產(chǎn)品僅供科研使用。請(qǐng)勿用于醫(yī)藥、臨床診斷或治療，食品及化妝品等用途。請(qǐng)勿存放于普通住宅區(qū)。

2. 為了您的安全和健康，請(qǐng)穿好實(shí)驗(yàn)服并佩戴一次性手套和口罩操作。

超濾管化學(xué)兼容性

密理博產(chǎn)品規(guī)格及價(jià)目表