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2023-12-26 閱讀(468)
瑞氏染色是目前常用而又簡單的染色方法。瑞氏試劑中之酸性伊紅和堿性美藍混合經(jīng)化學作用后，變成中性之 伊紅化美藍，久置后，經(jīng)氧化而含有天青。此三種染料分別和細胞核及漿中的NH3+和COO-等結合，使細胞核及胞漿著色。由于系中性染料，又有緩沖液調(diào)節(jié)酸堿度，所以細胞受染后，藍紅等顏色都較適中，核染質、胞漿及其中之顆粒顯色較為清楚。
瑞氏染色分兩相進行，第一相是酸性染料伊紅與細胞中的堿性物質如血紅蛋白、嗜酸性顆粒等結合；堿性染料天青B與細胞中的酸性物質如核染色質（chro－matin）、特異中性顆粒、血小板及富含核蛋白的胞質結合。第二相是天青B和伊紅在適宜條件下形成紫色的天青B一伊紅復合物（azure B－eosin complex），這種復合物是形成Romanowsky－Giemsa效應的基礎。
Romanowsky－Giemsa效應包括：
1. 白細胞核染色質染成紫色，瘧原蟲的染色質染成紅色；
2. 中性粒細胞的顆粒及血小板顆粒區(qū)染成紫色；
3. 產(chǎn)生本效應必須有兩種染料參與，一種是天青B、另一種是伊紅。
天青B與DNA分子中的磷酸基結合，而伊紅既與DNA分子中的陽離子部位結合，又與天青B結合，與天青B的結合力來源于電子供一受體的電子轉移力，天青B的甲氨基（－NHCHs）與伊紅分子中的叛基（－COOH）間形成氫鍵。因此，天青B是噻嗪類染料中能與伊紅形成復合物的較佳選擇，因為擁有四個甲基側鏈的亞甲藍不能以氫鍵與伊紅結合。
甲醇除作為染料的溶劑，能將瑞氏染料解離成帶正電荷的天青B和帶負電荷伊紅外，因其具有脫水力，還可將細胞固定為一定形態(tài)，并使蛋白沉淀為顆粒狀、網(wǎng)狀結構，增加細胞與染料的接觸表面，增強染色效果。
細胞中的各種有機物質（特別是蛋白質）、染料等對環(huán)境的州值非常敏感。如環(huán)境偏酸，氫離子增多，降低對堿性染料的親和力；增強伊紅著色，出現(xiàn)異常紅染；相反，則可出現(xiàn)異常藍染。最佳環(huán)境應維持在PH值6 4～6、8，必須使用緩沖溶液。
