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更新時(shí)間:2024-02-24 07:31:01瀏覽次數(shù):1081評(píng)價(jià)
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CAS:121714-22-5/鈣熒光探針Fluo-3 AM
CAS:121714-22-5,Fluo-3 AM [ 鈣熒光探針Fluo-3 AM ]
CAS#:121714-22-5
中文名:鈣熒光探針Fluo-3, AM
英文名:1-[2-Amino-5-(2,7-dichloro-6-hydroxy-3-oxo-9-xanthenyl)phenoxy]-2-(2-amino-5-methylphenoxy)ethane-N,N,N’,N’-tetraacetic acid, pentaacetoxymethyl ester
分子式:C51H50Cl2N2O23
分子量:1129.85
結(jié)構(gòu)式:
性質(zhì):
1. 外觀:紅色粉末
2. 純度:≥90%
3. 產(chǎn)品描述:
Fluo-3, AM是常用的檢測(cè)細(xì)胞內(nèi)鈣離子濃度的熒光探針之一。它穿透細(xì)胞膜進(jìn)入細(xì)胞后被細(xì)胞內(nèi)的酯酶剪切形成Fluo-3,從而被滯留在細(xì)胞內(nèi),Fluo-3若以游離配體形式存在時(shí)幾乎是非熒光性的,但是當(dāng)它與細(xì)胞內(nèi)鈣離子結(jié)合后可以產(chǎn)生較強(qiáng)的熒光,激發(fā)波長(zhǎng)為506nm,發(fā)射波長(zhǎng)為526nm。實(shí)際檢測(cè)時(shí)推薦使用的激發(fā)波長(zhǎng)為488nm左右,發(fā)射波長(zhǎng)為525~530nm。可以使用激光共聚焦顯微鏡或流式細(xì)胞儀檢測(cè)細(xì)胞內(nèi)鈣離子濃度的變化。
4. 操作說明(for Human T cells)*
(1) 試劑
2 mM的Fluo-3, AM/DMSO(將1mg Fluo-3, AM溶于442µL DMSO)
Pluronic F127
Hanks•balanced salt solution(HBSS)
HEPES buffer saline(10mM HEPES,1mM Na2HPO4,137mM NaCl,5mM KCl,1mM CaCl2,0.5mM MgCl2,5mM glucose,0.1% BSA,pH 7.4)
(2) 操作
①. 向Fluo-3, AM/DMSO溶液中加入16.5mg Pluronic F127,Pluronic F127可以 防止Fluo-3, AM在HBSS中聚合并能幫助其進(jìn)入細(xì)胞。
②. 用HBSS稀釋Fluo-3, AM溶液,制備4µM的Fluo-3, AM工作液。
③. 將Fluo-3, AM工作液加入細(xì)胞,在37℃培養(yǎng)20分鐘。
④. 加入5倍體積的含有1%胎牛血清的HBSS,再繼續(xù)培養(yǎng)40分鐘。
⑤. 用HEPES buffer saline洗滌細(xì)胞3次,然后用HEPES buffer saline使細(xì)胞重懸浮,制成1×105 cells/mL的溶液。
⑥. 37℃下培養(yǎng)10分鐘,然后用該細(xì)胞進(jìn)行熒光鈣離子檢測(cè)。激發(fā)波長(zhǎng)506nm,發(fā)射波長(zhǎng)526nm。
*標(biāo)記的條件因細(xì)胞種類而異,在每次實(shí)驗(yàn)前,請(qǐng)先確定條件。以上方法僅供參考。
儲(chǔ)存條件:-20℃干燥避光保存,有效期一年。
CAS:121714-22-5/鈣熒光探針Fluo-3 AM
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CAS:121714-22-5/鈣熒光探針Fluo-3 AM
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