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目錄:上海貝博生物科技有限公司>>蛋白質生物學>>蛋白提取和裂解>> 酵母組蛋白提取試劑盒

酵母組蛋白提取試劑盒
  • 酵母組蛋白提取試劑盒
參考價 面議
具體成交價以合同協(xié)議為準
參考價 面議
具體成交價以合同協(xié)議為準
  • 品牌 貝博生物
  • 型號
  • 廠商性質 生產商
  • 所在地
屬性

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更新時間：2024-11-10 11:00:02瀏覽次數(shù)：102評價

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產品概述 product description 貝博® BBproExtra® 酵母組蛋白提取試劑盒適用于從各種昆蟲組織樣本中提取組蛋白。提取過程簡單方便，避免了重復性差的研磨法，超聲波法或壓榨法對酵母細胞的破壞，避免激烈的機械處理造成的氧化和熱度升高對目的蛋白的破壞作用。 提取的蛋白可用于Western Blotting、蛋白質電泳、組蛋白修飾實驗比如乙?；?、甲基化、sumoylation等下游蛋白研究。
保存溫度
2-8℃
注意事項
1.蛋白酶抑制劑未開蓋使用前也可以2-8℃儲存。開蓋使用后-20℃儲存。
2.蛋白酶抑制劑在2-8℃低溫時是固體狀態(tài)，從冰箱取出后恢復至室溫或37℃短時間水浴，變成液體狀態(tài)后離心至管底部再開蓋。
3.試劑拆封后請盡快使用完！
有效期
一年
檢測方法
WB,IP等
適用樣本
酵母
產品特點
1.使用方便，從細胞，組織中提取蛋白不需經過研磨、反復凍融、超聲破碎等前處理。
2.含蛋白穩(wěn)定劑，提取的蛋白穩(wěn)定。
3.紫外檢測蛋白濃度時，背景干擾低。
4.蛋白酶抑制劑抑制了蛋白的降解，蛋白酶抑制劑配方優(yōu)化。蛋白酶抑制劑混合物包含7種獨立的蛋白酶抑制劑；每一種抑制劑可特異性抑制某一種或幾種蛋白酶活性。該混合物優(yōu)化的組成使其可以抑制幾乎所有重要的蛋白酶活性，包括蛋白酶、半酸蛋白酶、天冬氨酸蛋白酶、丙氨酰-氨基肽酶等。
產品應用
WB,IP等
儀器準備
1.離心機
2.振蕩器
3.勻漿機/勻漿器
4.渦旋混勻器
5.移液器
6.冰箱
7.冰盒
試劑準備
1.PBS緩沖液
2.蛋白定量試劑盒
耗材準備
1.離心管
2.吸頭
3.一次性手套
使用注意事項
使用注意事項：
? 旋帽離心管裝的試劑在開蓋前請短暫離心，將蓋內壁上的液體甩至管底，避免開蓋時液體灑落。
? 蛋白酶抑制劑在2-8℃時是固體狀態(tài)，從冰箱取出后恢復至室溫或37℃短時間水浴，變成液體狀態(tài)后離心至管底部再開蓋。
? 實驗過程中的所有試劑須預冷；所有器具須放-20℃冰箱預冷。整個過程須保持樣品處于低溫。
? 蛋白酶抑制劑儲存期間溶液如果出現(xiàn)沉淀，不影響使用，溶解后正常使用。
? 如果試劑盒不能短時間內用完，蛋白酶抑制劑混合物不可以一次全部加入提取液。
? 可以根據(jù)自己實驗需要加入其它蛋白酶抑制劑單品。
? 下游實驗如果是進行特定蛋白酶或磷酸酶的酶活性檢測，提取液可以不加蛋白酶抑制劑或磷酸酶抑制劑，注意提取過程保持低溫操作，縮短離心時間。
使用方法
1. 提取液制備：
每500ul蛋白提取液A中加入2ul蛋白酶抑制劑混合物混勻后置冰上備用。
2. 收集酵母培養(yǎng)物，在4℃，1000×g條件下離心5-10分鐘，吸干上清，收集酵母細胞。
3. 用冷PBS洗滌酵母細胞兩次，每次洗滌后盡可能吸干上清。
4. 每100-200mg濕重酵母細胞（或者100-200ul酵母沉淀體積）中加入250-500ul冷的酵母蛋白提取液E，充分混勻。
5. 在室溫或37℃條件下于振蕩30分鐘-2小時。
6. 在4℃，2000×g條件下離心5-10分鐘，棄上清，留沉淀。
7. 在沉淀中加入500ul蛋白提取液A，混勻后，在4℃條件下輕輕振蕩20-40分鐘。
8. 在4℃，16000×g條件下離心15分鐘，棄上清，留沉淀。
9. 沉淀中加入100ul組蛋白提取液B。
10. 用200ul槍頭反復吹打混勻或充分渦旋振蕩混勻。
11. 置4℃冰箱過夜存放。
12. 在12000×g條件下離心10分鐘，收集上清。
13. 在上清中加入10-25ul 試劑C充分混勻。
14. 加入上樣緩沖液混勻后煮沸，分裝于-80℃冰箱保存?zhèn)溆没蛑苯佑糜谙掠螌嶒灐?br>
常見問題分析
1.蛋白濃度低？
處理部分樣本時可能沒有裂解，導致蛋白濃度低。只要適當延長試劑E和A的處理時間即可。在持續(xù)振蕩的條件下處理，沒有振蕩器也可間隔幾分鐘用吸頭吹打混勻。
2.用什么方法定量蛋白？
建議用Bradford法。不適合用BCA法。

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