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參考價(jià)	面議

蛋白質(zhì)生物學(xué)

蛋白提取和裂解

細(xì)胞器分離

蛋白純化

蛋白質(zhì)濃縮和緩沖液置換

蛋白定量

蛋白凝膠電泳

免疫組織化學(xué)

貝博生物

產(chǎn)品概述 product description 貝博® BBproExtra® 組織總蛋白提取試劑盒適用于從各種纖維、脂肪、肝臟、消化道、腎臟、心臟、肌肉、血管、結(jié)締組織等動(dòng)物組織中提取總蛋白。提取過(guò)程簡(jiǎn)單方便，可在1小時(shí)內(nèi)完成。本試劑盒含有的配方能夠有效溶解細(xì)胞膜組份，包括細(xì)胞質(zhì)膜、核膜和各種細(xì)胞器膜。本試劑盒含有的蛋白酶抑制劑混合物，阻止了蛋白酶對(duì)蛋白的降解，為提取高純度的蛋白提供了保證。本試劑盒提取的蛋白可用于Western Blotting、蛋白質(zhì)電泳、免疫沉淀、ELISA、轉(zhuǎn)錄活性分析、Gel shift凝膠阻滯實(shí)驗(yàn)、酶活性測(cè)定等下游蛋白研究實(shí)驗(yàn)。本試劑盒提取的蛋白為具有天然蛋白構(gòu)象的活性蛋白。本試劑盒中不含有EDTA，與金屬螯和層析等下游應(yīng)用兼容。

詳細(xì)介紹

保存溫度

2-8℃

注意事項(xiàng)

1.蛋白酶抑制劑未開(kāi)蓋使用前也可以2-8℃儲(chǔ)存。開(kāi)蓋使用后-20℃儲(chǔ)存。
2.蛋白酶抑制劑在2-8℃低溫時(shí)是固體狀態(tài)，從冰箱取出后恢復(fù)至室溫或37℃短時(shí)間水浴，變成液體狀態(tài)后離心至管底部再開(kāi)蓋。
3.試劑拆封后請(qǐng)盡快使用完！

有效期

一年

檢測(cè)方法

WB,IP等

適用樣本

動(dòng)物組織

產(chǎn)品特點(diǎn)

1.使用方便，從細(xì)胞，組織中提取蛋白不需經(jīng)過(guò)研磨、反復(fù)凍融、超聲破碎等前處理。
2.提取過(guò)程簡(jiǎn)單方便，將蛋白提取的時(shí)間縮短至30分鐘-1小時(shí)。
3.含蛋白穩(wěn)定劑，提取的蛋白穩(wěn)定。
4.紫外檢測(cè)蛋白濃度時(shí)，背景干擾低。
5.總蛋白提取液含多種有效成分，可以充分釋放胞漿蛋白、核蛋白和膜蛋白，又可結(jié)合釋出的蛋白防止沉淀。
6.蛋白酶抑制劑抑制了蛋白的降解，蛋白酶抑制劑配方優(yōu)化。蛋白酶抑制劑混合物包含6種獨(dú)立的蛋白酶抑制劑AEBSF、Aprotinin、Leupeptin、Pepstatin A、Bestatin、E-64，每一種抑制劑可特異性抑制某一種或幾種蛋白酶活性。該混合物優(yōu)化的組成使其可以抑制幾乎所有重要的蛋白酶活性，包括蛋白酶、半蛋白酶、天冬氨酸蛋白酶、丙氨酰-氨基肽酶等。

產(chǎn)品應(yīng)用

WB,IP等

儀器準(zhǔn)備

1.離心機(jī)
2.振蕩器
3.勻漿機(jī)/勻漿器
4.渦旋混勻器
5.移液器
6.冰箱
7.冰盒

試劑準(zhǔn)備

1.PBS緩沖液
2.蛋白定量試劑盒

耗材準(zhǔn)備

1.離心管
2.吸頭
3.一次性手套

使用注意事項(xiàng)

使用注意事項(xiàng)：
? 旋帽離心管裝的試劑在開(kāi)蓋前請(qǐng)短暫離心，將蓋內(nèi)壁上的液體甩至管底，避免開(kāi)蓋時(shí)液體灑落。
? 蛋白酶抑制劑在2-8℃時(shí)是固體狀態(tài)，從冰箱取出后恢復(fù)至室溫或37℃短時(shí)間水浴，變成液體狀態(tài)后離心至管底部再開(kāi)蓋。
? 實(shí)驗(yàn)過(guò)程中的所有試劑須預(yù)冷；所有器具須放-20℃冰箱預(yù)冷。整個(gè)過(guò)程須保持樣品處于低溫。
? 蛋白酶抑制劑儲(chǔ)存期間溶液如果出現(xiàn)沉淀，不影響使用，溶解后正常使用。
? 如果試劑盒不能短時(shí)間內(nèi)用完，蛋白酶抑制劑混合物不可以一次全部加入提取液。
? 可以根據(jù)自己實(shí)驗(yàn)需要加入其它蛋白酶抑制劑單品。
? 下游實(shí)驗(yàn)如果是進(jìn)行特定蛋白酶或磷酸酶的酶活性檢測(cè)，提取液可以不加蛋白酶抑制劑或磷酸酶抑制劑，注意提取過(guò)程保持低溫操作，縮短離心時(shí)間。

使用方法

1. 提取液制備：
每500ul冷的總蛋白提取液中加入2ul蛋白酶抑制劑混合物，混勻后置冰上備用。
2. 取50-100mg組織樣本用剪刀剪碎，加入500ul總蛋白提取液，用組織勻漿器/勻漿機(jī)勻漿至無(wú)明顯肉眼可見(jiàn)固體。
3. 將組織勻漿吸入一預(yù)冷的干凈離心管中，在4℃條件下振蕩20-30分鐘。
4. 在4℃，12000×g條件下離心10分鐘。
5. 將上清吸入另一預(yù)冷的干凈離心管，即得到組織總蛋白。
6. 將上述蛋白提取物定量后分裝于-80℃冰箱保存?zhèn)溆没蛑苯佑糜谙掠螌?shí)驗(yàn)。

常見(jiàn)問(wèn)題分析

1.蛋白濃度低？
處理部分組織樣本時(shí)可能沒(méi)有裂解，導(dǎo)致蛋白濃度低。只要適當(dāng)延長(zhǎng)試劑A的處理時(shí)間即可。在持續(xù)振蕩的條件下處理，沒(méi)有振蕩器也可間隔幾分鐘用吸頭吹打混勻。

2.細(xì)胞裂解速度慢？
為了充分保證提取得到的蛋白的活性，提取液采用的保護(hù)蛋白的配方，裂解能力溫和，下游應(yīng)用范圍廣。適當(dāng)延長(zhǎng)裂解的時(shí)間即可。

3.用什么方法定量蛋白？
建議用BCA法。不適合用Bradford法，因?yàn)樵噭〢中含有干擾Bradford法的組份，導(dǎo)致定量不準(zhǔn)。如果已經(jīng)進(jìn)行過(guò)透析處理或者用脫鹽柱改換過(guò)緩沖體系，則可以用Bradford法定量。

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