使用注意事項
?旋帽離心管裝的試劑在開蓋前請短暫離心,將蓋內壁上的液體甩至管底,避免開蓋時液體灑落。
?蛋白酶抑制劑在2-8℃時是固體狀態(tài),從冰箱取出后恢復至室溫或37℃短時間水浴,變成液體狀態(tài)后離心至管底部再開蓋。
?實驗過程中的所有試劑須預冷;所有器具須放-20℃冰箱預冷。整個過程須保持樣品處于低溫。
?蛋白酶抑制劑儲存期間溶液如果出現(xiàn)沉淀,不影響使用,溶解后正常使用。
?如果試劑盒不能短時間內用完,蛋白酶抑制劑混合物不可以一次全部加入提取液。
?可以根據(jù)自己實驗需要加入其它蛋白酶抑制劑單品。
?下游實驗如果是進行特定蛋白酶或磷酸酶的酶活性檢測,提取液可以不加蛋白酶抑制劑或磷酸酶抑制劑,注意提取過程保持低溫操作,縮短離心時間。
?Western Blot實驗內參可以選用beta-actin、GAPDH、Tubulin。
離心機轉速有相對離心力(RCF,×g)和每分鐘轉速(RPM,r/min)兩種表示方式,有些離心機設置有RPM和×g顯示切換,但部分離心機沒有自動切換功能。需要用下面的公式進行換算:g=r×1.118×10-5×rpm2 (r 為有效離心半徑,即從離心機軸心到離心收集管底部中心位置的長度,單位為厘米) 例如: 轉速為3000rpm,有效離心半徑為10 cm,則相對離心力(RCF,×g)為=10×1.118×10-5×30002=1006.2(×g)。