豬主動(dòng)脈內(nèi)皮細(xì)胞的相關(guān)產(chǎn)品：大鼠睪丸支持細(xì)胞人誘導(dǎo)多能干細(xì)胞（iPSC）培養(yǎng)體系iPS細(xì)胞培養(yǎng)添加劑（配套）iPS細(xì)胞消化液（相關(guān)1）iPS細(xì)胞消化液（相關(guān)1）Matrigel基質(zhì)膠（相關(guān)2）iPS細(xì)胞專用因子Y27632（相關(guān)3）iPS細(xì)胞鋪底工作液(可替代CA004)H9人類胚胎干細(xì)胞培養(yǎng)體系H9細(xì)胞培養(yǎng)添加劑（配套）Matrigel基質(zhì)膠（相關(guān)2）H9細(xì)胞專用因子Y27632（相關(guān)3）H9細(xì)

豬主動(dòng)脈內(nèi)皮細(xì)胞

一、細(xì)胞基本屬性

 

培養(yǎng)基：含FBS、生長添加劑、Penicillin、Streptomycin等

包被條件：PLL(0.1mg/ml)，明膠(0.1%)

傳代特性：可傳2-3代

消化液：0.25%胰dan白酶

培養(yǎng)條件：氣相：空氣，95%；CO2，5%

細(xì)胞簡介：豬主動(dòng)脈內(nèi)皮細(xì)胞分離自主動(dòng)脈組織；主動(dòng)脈是體循環(huán)的動(dòng)脈主干。其運(yùn)行路徑為：升主動(dòng)脈起于左心室，至右側(cè)第2胸肋關(guān)節(jié)高度移行為主動(dòng)脈弓，弓行向左后至第4胸椎體下緣移行為降主動(dòng)脈；在第12胸椎體高度穿膈的主動(dòng)脈裂孔移行為腹主動(dòng)脈，以上為胸主動(dòng)脈，至第4腰椎體下緣分為左、右髂總動(dòng)脈；髂總動(dòng)脈在骶髂關(guān)節(jié)高度分為髂內(nèi)、外動(dòng)脈。主動(dòng)脈內(nèi)皮細(xì)胞是覆蓋在主動(dòng)脈內(nèi)面的單層細(xì)胞，可分泌一系列血管活性物質(zhì)而保持血管穩(wěn)態(tài)，當(dāng)其受到炎癥或其它因素刺激后穩(wěn)態(tài)被破壞而導(dǎo)致一些心血管疾病的發(fā)生。因此，主動(dòng)脈內(nèi)皮細(xì)胞已成為研究心血管疾病發(fā)病機(jī)制及治療藥物的工具。內(nèi)皮細(xì)胞或血管內(nèi)皮是一薄層的專門上皮細(xì)胞，由一層扁平細(xì)胞所組成。它形成血管的內(nèi)壁，是血管管腔內(nèi)血液及其他血管壁(單層鱗狀上皮)的接口。內(nèi)皮細(xì)胞是沿著整個(gè)循環(huán)系統(tǒng)，由心臟直至小的微血管。
原代細(xì)胞分離培養(yǎng)的思路：

取材--分離--培養(yǎng)--鑒定

首先將組織從機(jī)體中取出，經(jīng)胰dan白酶/膠原酶處理后分散成單細(xì)胞，再在合適的培養(yǎng)基中培養(yǎng)，使細(xì)胞繁殖到一定系數(shù)后進(jìn)行細(xì)胞鑒定。

實(shí)驗(yàn)步驟：

一、取7-10d雄性SD大鼠，頸椎脫臼處死,浸泡于75％乙醇消毒3-5min。

二、在超凈工作臺(tái)中，將大鼠斷頭置于玻璃培養(yǎng)皿中，打開顱腔后取出全腦,放在盛有預(yù)冷的PBS玻璃培養(yǎng)皿中，去除小腦和間腦。

三、將大腦半球在干濾紙上緩慢滾動(dòng)以去除軟腦膜和腦膜大血管，再放在新的盛有預(yù)冷的PBS玻璃培養(yǎng)皿中。

四、用細(xì)解剖鑷去除大腦白質(zhì)、殘余大血管和軟腦膜，保留大腦皮質(zhì)。

五、大腦皮質(zhì)放于DMEM中，剪碎成約1mm3大小，放入50ml的離心管中，加入混合酶液I(0.05-0 .1％II型膠原酶，0 .025-0 .05％IV型膠原酶，200-400U DNaseI)，混勻后37℃水浴消化1-1.5h。

六、室溫1 000×g離心8min，去上清液。

七、沉淀中加入20％BSA重懸浮，充分混勻，1 000×g，20min，4℃離心，去上清。

八、沉淀加入4ml混合酶液II( 0.05-0.1％的膠原酶/分散酶，0.05-0.1％I型膠原酶，100-300U DNaseI )重懸浮，混勻，37℃水浴消化0.5-1h，700×g室溫離心6min，去上清液。

九、沉淀加入2ml DMEM培養(yǎng)液懸浮混勻，鋪于經(jīng)離心形成連續(xù)梯度的12ml 50％Percoll(25 000×g，60min，4℃)，1000×g，4℃離心10min。

十、靠近底部的紅細(xì)胞層之上的白黃色的層面即為純化的微血管段，吸出后DMEM漂洗兩次(離心1000×rpm，6min，室溫)，去上清液。

加入DMEM培養(yǎng)液(20％FBS，4ug/ml素 )重懸浮，接種于含5％的大鼠 血清37℃孵育過夜所制備的細(xì)胞培養(yǎng)皿中，置于37℃、5％CO2培養(yǎng)箱內(nèi)靜置培養(yǎng)24h后更換不含素的混合培養(yǎng)基，隨后隔天換液。

注意事項(xiàng)：

1. 培養(yǎng)基于4℃條件下可保存3-6個(gè)月。

2. 在細(xì)胞培養(yǎng)過程中，請(qǐng)注意保持無菌操作。

3. 傳代培養(yǎng)過程中，yi酶消化時(shí)間不宜過長，否則會(huì)影響細(xì)胞貼壁及其生長狀態(tài)。

4. 建議客戶收到細(xì)胞后前3天每個(gè)倍數(shù)各拍幾張細(xì)胞照片，記錄細(xì)胞狀態(tài)，便于和技術(shù)部溝通；由于運(yùn)輸?shù)脑?，個(gè)別敏感細(xì)胞會(huì)出現(xiàn)不穩(wěn)定的情況，請(qǐng)及時(shí)和我們聯(lián)系，詳盡告知細(xì)胞的具體情況，以便我們的技術(shù)人員跟蹤、回訪直至問題得到解決。
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