詳細介紹
人胰腺癌相關成纖維細胞
一、細胞基本屬性
細胞名稱 | 人胰腺癌相關成纖維細胞 |
產(chǎn)品規(guī)格 | 5×105cells/T25細胞培養(yǎng)瓶 |
商品貨號 | A01X1359 |
實驗步驟:
一、取7-10d雄性SD大鼠,頸椎脫臼處死,浸泡于75%乙醇消毒3-5min。
二、在超凈工作臺中,將大鼠斷頭置于玻璃培養(yǎng)皿中,打開顱腔后取出全腦,放在盛有預冷的PBS玻璃培養(yǎng)皿中,去除小腦和間腦。
三、將大腦半球在干濾紙上緩慢滾動以去除軟腦膜和腦膜大血管,再放在新的盛有預冷的PBS玻璃培養(yǎng)皿中。
四、用細解剖鑷去除大腦白質、殘余大血管和軟腦膜,保留大腦皮質。
五、大腦皮質放于DMEM中,剪碎成約1mm3大小,放入50ml的離心管中,加入混合酶液I(0.05-0 .1%II型膠原酶,0 .025-0 .05%IV型膠原酶,200-400U DNaseI),混勻后37℃水浴消化1-1.5h。
六、室溫1 000×g離心8min,去上清液。
七、沉淀中加入20%BSA重懸浮,充分混勻,1 000×g,20min,4℃離心,去上清。
八、沉淀加入4ml混合酶液II( 0.05-0.1%的膠原酶/分散酶,0.05-0.1%I型膠原酶,100-300U DNaseI )重懸浮,混勻,37℃水浴消化0.5-1h,700×g室溫離心6min,去上清液。
九、沉淀加入2ml DMEM培養(yǎng)液懸浮混勻,鋪于經(jīng)離心形成連續(xù)梯度的12ml 50%Percoll(25 000×g,60min,4℃),1000×g,4℃離心10min。
十、靠近底部的紅細胞層之上的白黃色的層面即為純化的微血管段,吸出后DMEM漂洗兩次(離心1000×rpm,6min,室溫),去上清液。
加入DMEM培養(yǎng)液(20%FBS,4ug/ml素 )重懸浮,接種于含5%的大鼠 血清37℃孵育過夜所制備的細胞培養(yǎng)皿中,置于37℃、5%CO2培養(yǎng)箱內(nèi)靜置培養(yǎng)24h后更換不含素的混合培養(yǎng)基,隨后隔天換液。
原代細胞分離培養(yǎng)的思路:
取材--分離--培養(yǎng)--鑒定
首先將組織從機體中取出,經(jīng)胰dan白酶/膠原酶處理后分散成單細胞,再在合適的培養(yǎng)基中培養(yǎng),使細胞繁殖到一定系數(shù)后進行細胞鑒定。
公司正在出售的產(chǎn)品:
大鼠牙胚細胞 | 人關節(jié)軟骨細胞 |
絨毛蛋白重組兔單克隆抗體 | AF488標記的免疫球蛋白G Fc段受體Ⅱ抗體 |
人肝動脈內(nèi)皮細胞 | AF488標記的DULLARD蛋白抗體 |
人肝竇內(nèi)皮細胞 | AF488標記的促代謝型谷氨受體6抗體 |
人肝內(nèi)膽管上皮細胞 | AF488標記的磷化DNA修復Ku70抗體 |
人肝實質細胞 | AF488標記的生物抗體 |
人肝外膽管上皮細胞 | AF488標記的磷酯Cβ1抗體 |
人肝星狀細胞 | AF488標記的同源轉錄因子DLX6抗體 |
人睪丸支持細胞 | AF488標記的環(huán)指蛋白19B抗體 |
人宮頸癌組織源細胞 | AF488標記的腫瘤抑制基因ABI2/精氨酪氨蛋白激結合蛋白抗體 |
人鞏膜成纖維細胞 | AF488標記的神經(jīng)營養(yǎng)因子抗體 |
人骨骼肌細胞 | 人胰腺癌相關成纖維細胞AF488標記的人類皰疹病毒8 G蛋白偶聯(lián)受體抗體 |
人骨髓單個核細胞 | AF488標記的磷化中心粒蛋白Nudel抗體 |
人骨髓單核細胞 | AF488標記的周期依賴性激3抗體 |
人晶狀體上皮細胞 | AF488標記的碳水化合物磺基轉移8抗體 |
注意事項:
1. 培養(yǎng)基于4℃條件下可保存3-6個月。
2. 在細胞培養(yǎng)過程中,請注意保持無菌操作。
3. 傳代培養(yǎng)過程中,yi酶消化時間不宜過長,否則會影響細胞貼壁及其生長狀態(tài)。
4. 建議客戶收到細胞后前3天每個倍數(shù)各拍幾張細胞照片,記錄細胞狀態(tài),便于和技術部溝通;由于運輸?shù)脑?,個別敏感細胞會出現(xiàn)不穩(wěn)定的情況,請及時和我們聯(lián)系,詳盡告知細胞的具體情況,以便我們的技術人員跟蹤、回訪直至問題得到解決。