人NK細(xì)胞公司正在出售的產(chǎn)品：大鼠結(jié)腸黏膜上皮細(xì)胞大鼠結(jié)腸平滑肌細(xì)胞大鼠晶狀體上皮細(xì)胞大鼠精原干細(xì)胞大鼠口腔上皮細(xì)胞大鼠淋巴管內(nèi)皮細(xì)胞大鼠淋巴結(jié)淋巴細(xì)胞anti-PIV IgG 人抗副流感病毒IgG抗體ELISA檢測(cè)試劑盒CPAF 人衣原體蛋白樣活性因子ELISA檢測(cè)試劑盒PNP 人副腫瘤性天皰瘡抗體ELISA檢測(cè)試劑盒PEB1 人空腸彎曲菌黏附蛋白ELISA檢測(cè)試劑盒Lyme-IgG 人萊姆I

組織來(lái)源：外周血

種屬來(lái)源：人

細(xì)胞簡(jiǎn)介：自然殺傷細(xì)胞(natural killer cell ，  NK)是機(jī)體重要的免疫細(xì)胞 ，不僅與抗腫瘤、   抗病毒感染和免疫調(diào)節(jié)有關(guān) ，而且在某些情況下參與超敏反應(yīng)和自身免疫性疾病  的發(fā)生。一種穩(wěn)定表達(dá)在NK和LAK細(xì)胞表面的LAK-1分子 ，  120kDa ，  NK細(xì)胞在 IL-2條件下培養(yǎng)20天LAK-1仍為陽(yáng)性 ，而HNK-1(CD57)  和CD16部分消失。  LAK 的殺傷活性可被抗LAK-1 McAb所抑制。

自然殺傷細(xì)胞刺激因子  (natural killer cell stimulatory factor,NKSF) 對(duì)NK細(xì)胞 有刺激作用。  IL-2、  IL-12、  IFN-α、TNF-α以及白細(xì)胞調(diào)節(jié)素(leukoregulin,LR) 對(duì)NK細(xì)胞的活化和分化有正調(diào)節(jié)作用 ，   體外培養(yǎng)時(shí)加入上述細(xì)胞因子可明顯提  高NK的殺傷活性。前列腺素 (PG)E1、  E2、  D2和腎上腺皮質(zhì)激素等對(duì)NK細(xì)胞的  活性有抑制作用。

培養(yǎng)基：原代NK細(xì)胞培養(yǎng)體系

換液頻率:每2-3天換液一次

生長(zhǎng)特性：懸浮培養(yǎng)

傳代特性：根據(jù)細(xì)胞特性傳代

消化液：0.25%胰dan白酶

培養(yǎng)條件：氣相：空氣 ，95%；  CO2 ，  5%
一、細(xì)胞基本屬性

二、細(xì)胞培養(yǎng)狀態(tài)

發(fā)貨時(shí)發(fā)送細(xì)胞電子版照片

三、使用方法

人NK細(xì)胞是一種懸浮培養(yǎng)細(xì)胞，細(xì)胞形態(tài)呈，在技術(shù)部標(biāo)準(zhǔn)操作流程下，細(xì)胞可傳2-3代；建議您收到細(xì)胞后盡快進(jìn)行相關(guān)實(shí)驗(yàn)。

客戶收到細(xì)胞后，請(qǐng)按照以下方法進(jìn)行操作。

1. 取出T25細(xì)胞培養(yǎng)瓶，用75%酒精消毒瓶身，拆下封口膜，放入37℃、5%CO2、飽和濕度的細(xì)胞培養(yǎng)箱中靜置3-4h，以穩(wěn)定細(xì)胞狀態(tài)。

2. 貼壁細(xì)胞消化

1)吸出T25細(xì)胞培養(yǎng)瓶中的培養(yǎng)基，用PBS清洗細(xì)胞一次；

2)添加0.25%消化液1mL至T25培養(yǎng)瓶中，輕微轉(zhuǎn)動(dòng)培養(yǎng)瓶至消化液覆蓋整個(gè)培養(yǎng)瓶底后，吸出多余消化液，37℃溫浴1-3min；倒置顯微鏡下觀察，待細(xì)胞回縮變圓后，再加入5ml培養(yǎng)基終止消化；

3)用吸管輕輕吹打混勻，按傳代比例接種T25培養(yǎng)瓶傳代，然后補(bǔ)充新鮮的培養(yǎng)基至5mL，置于37℃、5%CO2、飽和濕度的細(xì)胞培養(yǎng)箱中靜置培養(yǎng)；

4)待細(xì)胞貼壁后，培養(yǎng)觀察；之后按照換液頻率更換新鮮的培養(yǎng)基。

3. 細(xì)胞收貨脫落

1)收集所有細(xì)胞懸液，1000rpm，離心5min，保留沉淀；

2)添加0.25%消化液0.5mL至離心管中，重懸沉淀，放置于37℃消化3min(或4℃冰箱靜置5-7min)；消化完向離心管內(nèi)加入5ml培養(yǎng)基終止消化；

3)經(jīng)1000rpm，離心5min，丟棄上清，用5ml培養(yǎng)基重懸沉淀，接種于新的培養(yǎng)瓶?jī)?nèi)；

4)待細(xì)胞貼壁后，培養(yǎng)觀察；之后按照換液頻率更換新鮮的培養(yǎng)基(37℃預(yù)熱)。

5)原瓶?jī)?nèi)貼壁細(xì)胞按正常消化處理。

4. 細(xì)胞實(shí)驗(yàn)

因原代細(xì)胞貼壁特殊性，貼壁的原代細(xì)胞在消化后轉(zhuǎn)移至其他實(shí)驗(yàn)器皿（如玻璃爬片、培養(yǎng)板、共聚焦培養(yǎng)皿等）時(shí)，需要對(duì)實(shí)驗(yàn)器皿進(jìn)行包被，以增強(qiáng)細(xì)胞貼壁性，避免細(xì)胞因沒(méi)貼好影響實(shí)驗(yàn)；包被條件常選用鼠尾膠原Ⅰ（2-5μg/cm2） ，多聚賴氨酸PLL（0.1mg/ml），明膠（0.1%），依據(jù)細(xì)胞種類而定。懸浮/半懸浮細(xì)胞無(wú)需包被。

公司正在出售的產(chǎn)品：

四、注意事項(xiàng)

1. 培養(yǎng)基于4℃條件下可保存3-6個(gè)月。

2. 在細(xì)胞培養(yǎng)過(guò)程中，請(qǐng)注意保持無(wú)菌操作。

3. 傳代培養(yǎng)過(guò)程中，消化時(shí)間不宜過(guò)長(zhǎng)，否則會(huì)影響細(xì)胞貼壁及其生長(zhǎng)狀態(tài)。

4. 建議客戶收到細(xì)胞后前3天每個(gè)倍數(shù)各拍幾張細(xì)胞照片，記錄細(xì)胞狀態(tài)，便于和技術(shù)部溝通；由于運(yùn)輸?shù)脑颍瑐€(gè)別敏感細(xì)胞會(huì)出現(xiàn)不穩(wěn)定的情況，請(qǐng)及時(shí)和我們聯(lián)系，詳盡告知細(xì)胞的具體情況，以便我們的技術(shù)人員跟蹤、回訪直至問(wèn)題得到解決。