大鼠纖維環(huán)細(xì)胞公司正在出售的產(chǎn)品：小鼠乳腺癌細(xì)胞，4T1細(xì)胞小鼠神經(jīng)膠質(zhì)瘤細(xì)胞，G422細(xì)胞小鼠腎癌細(xì)胞，RENCA細(xì)胞小鼠腎小球系膜細(xì)胞，SV40-MES-13細(xì)胞小鼠腎足細(xì)胞，MPC-5細(xì)胞小鼠視網(wǎng)膜神經(jīng)節(jié)細(xì)胞，RGC-5細(xì)胞小鼠樹(shù)突狀細(xì)胞，DC2.4細(xì)胞原鈣黏β2(PCDHβ2)ELISA試劑盒原鈣黏β16(PCDHβ16)ELISA試劑盒原鈣黏β15(PCDHβ15)ELISA試劑盒原鈣黏

一、細(xì)胞基本屬性

 

組織來(lái)源：椎間盤(pán)組織

種屬來(lái)源：大鼠

細(xì)胞簡(jiǎn)介：纖維環(huán) ，位于椎間盤(pán)的周緣部 ，  由纖維軟骨組成 ，纖維環(huán)的纖維在椎體間斜行 ， 在橫切面上排列成同心環(huán)狀 ，相鄰環(huán)的纖維具有相反的斜度 ，而相互交叉。纖維 環(huán)細(xì)胞位于膠原纖維束之前 ，合成和分泌纖維環(huán)細(xì)胞外基質(zhì) ，維持正常的纖維環(huán) 結(jié)構(gòu)和功能。

培養(yǎng)基：原代軟骨細(xì)胞培養(yǎng)體系

換液頻率:每2-3天換液一次

生長(zhǎng)特性：貼壁生長(zhǎng)

細(xì)胞形態(tài)：多角形細(xì)胞 ，不規(guī)則細(xì)胞

傳代特性：根據(jù)細(xì)胞特性

消化液：0.25%胰dan白酶

培養(yǎng)條件：氣相：空氣 ，95%；  CO2 ，  5%

二、細(xì)胞培養(yǎng)狀態(tài)

發(fā)貨時(shí)發(fā)送細(xì)胞電子版照片

三、使用方法

大鼠纖維環(huán)細(xì)胞是一種貼壁生長(zhǎng)細(xì)胞，細(xì)胞形態(tài)呈多角形細(xì)胞 ，不規(guī)則細(xì)胞，在技術(shù)部標(biāo)準(zhǔn)操作流程下，細(xì)胞可傳2-3代；建議您收到細(xì)胞后盡快進(jìn)行相關(guān)實(shí)驗(yàn)。

客戶收到細(xì)胞后，請(qǐng)按照以下方法進(jìn)行操作。

1. 取出T25細(xì)胞培養(yǎng)瓶，用75%酒精消毒瓶身，拆下封口膜，放入37℃、5%CO2、飽和濕度的細(xì)胞培養(yǎng)箱中靜置3-4h，以穩(wěn)定細(xì)胞狀態(tài)。

2. 貼壁細(xì)胞消化

1)吸出T25細(xì)胞培養(yǎng)瓶中的培養(yǎng)基，用PBS清洗細(xì)胞一次；

2)添加0.25%消化液1mL至T25培養(yǎng)瓶中，輕微轉(zhuǎn)動(dòng)培養(yǎng)瓶至消化液覆蓋整個(gè)培養(yǎng)瓶底后，吸出多余消化液，37℃溫浴1-3min；倒置顯微鏡下觀察，待細(xì)胞回縮變圓后，再加入5ml培養(yǎng)基終止消化；

3)用吸管輕輕吹打混勻，按傳代比例接種T25培養(yǎng)瓶傳代，然后補(bǔ)充新鮮的培養(yǎng)基至5mL，置于37℃、5%CO2、飽和濕度的細(xì)胞培養(yǎng)箱中靜置培養(yǎng)；

4)待細(xì)胞貼壁后，培養(yǎng)觀察；之后按照換液頻率更換新鮮的培養(yǎng)基。

3. 細(xì)胞收貨脫落

1)收集所有細(xì)胞懸液，1000rpm，離心5min，保留沉淀；

2)添加0.25%消化液0.5mL至離心管中，重懸沉淀，放置于37℃消化3min(或4℃冰箱靜置5-7min)；消化完向離心管內(nèi)加入5ml培養(yǎng)基終止消化；

3)經(jīng)1000rpm，離心5min，丟棄上清，用5ml培養(yǎng)基重懸沉淀，接種于新的培養(yǎng)瓶?jī)?nèi)；

4)待細(xì)胞貼壁后，培養(yǎng)觀察；之后按照換液頻率更換新鮮的培養(yǎng)基(37℃預(yù)熱)。

5)原瓶?jī)?nèi)貼壁細(xì)胞按正常消化處理。

4. 細(xì)胞實(shí)驗(yàn)

因原代細(xì)胞貼壁特殊性，貼壁的原代細(xì)胞在消化后轉(zhuǎn)移至其他實(shí)驗(yàn)器皿（如玻璃爬片、培養(yǎng)板、共聚焦培養(yǎng)皿等）時(shí)，需要對(duì)實(shí)驗(yàn)器皿進(jìn)行包被，以增強(qiáng)細(xì)胞貼壁性，避免細(xì)胞因沒(méi)貼好影響實(shí)驗(yàn)；包被條件常選用鼠尾膠原Ⅰ（2-5μg/cm2） ，多聚賴氨酸PLL（0.1mg/ml），明膠（0.1%），依據(jù)細(xì)胞種類(lèi)而定。懸浮/半懸浮細(xì)胞無(wú)需包被。

四、注意事項(xiàng)

1. 培養(yǎng)基于4℃條件下可保存3-6個(gè)月。

2. 在細(xì)胞培養(yǎng)過(guò)程中，請(qǐng)注意保持無(wú)菌操作。

3. 傳代培養(yǎng)過(guò)程中，消化時(shí)間不宜過(guò)長(zhǎng)，否則會(huì)影響細(xì)胞貼壁及其生長(zhǎng)狀態(tài)。

4. 建議客戶收到細(xì)胞后前3天每個(gè)倍數(shù)各拍幾張細(xì)胞照片，記錄細(xì)胞狀態(tài)，便于和技術(shù)部溝通；由于運(yùn)輸?shù)脑颍瑐€(gè)別敏感細(xì)胞會(huì)出現(xiàn)不穩(wěn)定的情況，請(qǐng)及時(shí)和我們聯(lián)系，詳盡告知細(xì)胞的具體情況，以便我們的技術(shù)人員跟蹤、回訪直至問(wèn)題得到解決。

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