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轉(zhuǎn)基因品系棉花GK19染料法qPCR試劑盒

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  • 型號(hào) 50T
  • 品牌 其他品牌
  • 廠商性質(zhì) 經(jīng)銷商
  • 所在地 上海市

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更新時(shí)間:2021-02-28 19:27:50瀏覽次數(shù):231

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產(chǎn)品簡(jiǎn)介

CAS 詳見(jiàn)說(shuō)明書 純度 詳見(jiàn)說(shuō)明書
分子量 詳見(jiàn)說(shuō)明書 分子式 詳見(jiàn)說(shuō)明書
供貨周期 現(xiàn)貨 規(guī)格 50T
貨號(hào) FS-L63768 應(yīng)用領(lǐng)域 化工
主要用途 公司產(chǎn)品僅用于科研    
轉(zhuǎn)基因品系棉花GK19染料法qPCR試劑盒保存:如果樣本收集后不及時(shí)檢測(cè),請(qǐng)按一次用量分裝,凍存于-20℃,避免反復(fù)凍融,在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍。

詳細(xì)介紹

服務(wù)流程:
接受訂單及樣品——RNA提取——RNA質(zhì)量檢測(cè)——樣品cDNA合成——定量試驗(yàn)——數(shù)據(jù)分析——結(jié)果交付——售后服務(wù)。

產(chǎn)品名稱

產(chǎn)品規(guī)格

貨號(hào)

轉(zhuǎn)基因品系棉花GK19染料法qPCR試劑盒

50T

FS-L63768

儲(chǔ)存條件:
14℃或-20℃樣品收集、處理及保存方法
1. 血清:使用不含熱原和內(nèi)毒素的試管,操作過(guò)程中避免任何細(xì)胞刺激,收集血液后,3000 轉(zhuǎn)離心10 分鐘將血清和紅細(xì)胞迅速小心地分離。
2. 血漿:EDTA、檸檬酸鹽或肝素抗凝。3000 轉(zhuǎn)離心30 分鐘取上清。
3. 細(xì)胞上清液:3000 轉(zhuǎn)離心10 分鐘去除顆粒和聚合物。
4. 組織勻漿:將組織加入適量生理鹽水搗碎。3000 轉(zhuǎn)離心10 分鐘取上清。
5. 保存:如果樣本收集后不及時(shí)檢測(cè),請(qǐng)按一次用量分裝,凍存于-20℃,避免反復(fù)凍融,在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍。
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實(shí)驗(yàn)注意事項(xiàng):
1)RT-PCR可以檢測(cè)組織、細(xì)胞、血液、細(xì)菌等很多材料,不同的樣本有不同要求,實(shí)驗(yàn)前請(qǐng)充分溝通確認(rèn)實(shí)驗(yàn)方案和樣本情況;
2)客戶盡可能提供實(shí)驗(yàn)的背景信息、物種、基因準(zhǔn)確的名稱和ID號(hào);
3)客戶盡量不要提供DNA或RNA樣品。
4)樣本保存于液氮或干冰,也可以保存于Trizol液中。
實(shí)時(shí)熒光定量PCR(quantitative real-time PCR,qPCR)是指在PCR反應(yīng)體系中加入熒光基團(tuán),利用熒光信號(hào)積累實(shí)時(shí)監(jiān)測(cè)整個(gè)PCR進(jìn)程,通過(guò)標(biāo)準(zhǔn)曲線對(duì)未知模板進(jìn)行定量分析的方法。實(shí)時(shí)熒光定量PCR的化學(xué)原理包括探針類和非探針類兩類,探針類是利用與靶細(xì)胞序列特異性雜交的探針來(lái)指示擴(kuò)增產(chǎn)物的增加,非探針類是利用熒光染料或者特異性設(shè)計(jì)的引物來(lái)指示擴(kuò)增的增加。運(yùn)用該技術(shù)可以對(duì)DNA、RNA樣品進(jìn)行定量(包括定量和相對(duì)定量)和定性分析。主要服務(wù):DNA或RNA的定量分析、基因表達(dá)差異分析、基因分型。
氧化標(biāo)準(zhǔn)溶液(100μg/ml,u=6~5%,基體:酮)GFP (D5.1) XP® Rabbit mAb硝酸鐠,五水合物

(分析標(biāo)準(zhǔn)品,99%)SimpleChIP® ChIP-seq Multiplex Oligos for Illumina® (Single Index Primers)硝酸鈥

除草標(biāo)準(zhǔn)溶液(10μg/ml,u=5%)Erlin-1 Antibody環(huán)己-1-甲

2-萘氧酸(標(biāo)準(zhǔn)品)Erlin-2 AntibodyN,O-1,二?;胚?/span>

滅菌丹標(biāo)準(zhǔn)溶液(100μg/ml,u=2%)Death Receptor Antibody Sampler Kit II-甲基吡啶

滅菌丹標(biāo)準(zhǔn)溶液(10μg/ml,u=6%)MUC16 Antibody氨基-硝基吡啶

標(biāo)準(zhǔn)溶液(100μg/ml,u=4%)Caspase-3 (8G10) Rabbit mAb (HRP Conjuga)3,二氟酸

惡草酮(分析標(biāo)準(zhǔn)品,97.5%)EGF Receptor (T43) Antibody(1S,4R)-氨基環(huán)戊-2-甲酸

甲基嘧啶(10μg/ml,u=3%)Akt2 (5B5) Rabbit mAb6-吡啶-2-

撲滅津(標(biāo)準(zhǔn)品)Phospho-Akt (Thr308) (C31E5E) Rabbit mAb1-溴-2-氟-三氟甲氧基

戊炔草(標(biāo)準(zhǔn)品)Phospho-Akt (Thr308) (C31E5E) Rabbit mAb3,5-二溴-羥基

五甲(標(biāo)準(zhǔn)品)Akt (5G3) Mouse mAb鉑酸銨

基對(duì)氧(標(biāo)準(zhǔn)品)Akt (5G3) Mouse mAb六鈀酸

腐霉利(標(biāo)準(zhǔn)品)Akt1 (2H10) Mouse mAb鉑酸

吡蚜酮(標(biāo)準(zhǔn)品)Akt1 (2H10) Mouse mAb吡啶-酸

敵稗(分析標(biāo)準(zhǔn)品,98%)Phospho-IGF-I Receptor β (Tyr1135/1136)/Insulin Receptor β (Tyr1150/1151) (19H7) Rabbit mAb (Biotinylad)吡啶-酸

水硫標(biāo)準(zhǔn)溶液(10μg/ml,u=5~3%,酮)Phospho-mTOR (Ser2448) Antibody六氟銻酸鈉

水硫標(biāo)準(zhǔn)溶液(100μg/ml,u=5~3%,酮)Phospho-mTOR (Ser2448) AntibodyN'-CBZ-D-鳥(niǎo)氨酸
轉(zhuǎn)基因品系棉花GK19染料法qPCR試劑盒TLC法鑒別98%500mlPROM2 ELISA Kit酰芍藥苷

野馬追內(nèi)酯B(標(biāo)準(zhǔn)品) 質(zhì)量規(guī)格:HPLC≥98%,標(biāo)準(zhǔn)品 Eupalilide B

標(biāo)準(zhǔn)品,中藥標(biāo)準(zhǔn)品, L鼠李糖

TLC法鑒別90%500mlPcad ELISA Kit

 釀酒酵母 Saccharomyces cerevisiae293(人胚腎細(xì)胞)

培養(yǎng)基,培養(yǎng)基, 多粘菌素B(1.2mg)

TLC法鑒別90%500mlSubstance P,SP ELISA Kit醛

酒石長(zhǎng)春瑞濱(標(biāo)準(zhǔn)品) 質(zhì)量規(guī)格:HPLC≥98%,標(biāo)準(zhǔn)品 Virelbine tartrate

標(biāo)準(zhǔn)品,中藥標(biāo)準(zhǔn)品, 茄尼醇
實(shí)驗(yàn)過(guò)程:
一、試劑準(zhǔn)備
1. DNA模板
2.對(duì)應(yīng)目的基因的特異引物(在PCR反應(yīng)中,新合成的DNA是要接在一小段序列上才能繼續(xù)按照模板DNA復(fù)制,而不能從無(wú)到有,憑空合成。這一小段序列就是你所要有設(shè)計(jì)的引物??梢允荄NA也可以是RNA,一般20多bp,需要根據(jù)你的模板鏈設(shè)計(jì)。因此,擴(kuò)增不同的基因需要設(shè)計(jì)不同的引物)
3.10×PCR Buffer
4.2mM dNTPmix:含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM
5.Taq酶
二、操作步驟
1.在冰浴中,按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o(wú)菌0.5ml離心管中。
      10×PCR buffer             5μl
      dNTP mixl                 4μl
      引物1(10pM)               2μl
      引物2(10PM)              2μl
     Taq酶(2U/μl)            1μl
     DNA模板(50ng-1μg/μl)    1 μl
      加ddH2O至               50 μl
    視PCR儀有無(wú)熱蓋,不加或添加石蠟油。
2.調(diào)整好反應(yīng)程序。將上述混合液稍加離心,立即置PCR儀上,執(zhí)行擴(kuò)增。一般:在93℃預(yù)變性3-5min,進(jìn)入循環(huán)擴(kuò)增階段:93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s,循環(huán)30-35次,后在72℃ 保溫7min。
3.結(jié)束反應(yīng),PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測(cè)或-20℃長(zhǎng)期保存。
4.PCR的電泳檢測(cè):如在反應(yīng)管中加有石蠟油,需用100μlLuFang進(jìn)行抽提反應(yīng)混合液,以除去石蠟油;否則,直接取5-10μl電泳檢測(cè)。
檢測(cè)方法包括以下步驟:
(1)將參照基因與待測(cè)目的基因片段等比例連接,克隆到同一個(gè)質(zhì)粒載體上,構(gòu)建一種可同時(shí)用于參照基因以及待測(cè)目的基因擴(kuò)增檢測(cè)的標(biāo)準(zhǔn)品,并將所得標(biāo)準(zhǔn)品按照濃度梯度稀釋后同時(shí)用于繪制參照基因以及待測(cè)目的基因的標(biāo)準(zhǔn)曲線;
(2)待測(cè)樣本與步驟(1)所述標(biāo)準(zhǔn)品經(jīng)同步進(jìn)行實(shí)時(shí)熒光定量PCR擴(kuò)增后,目的基因與參照基因按照各自的標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算各自的拷貝數(shù),計(jì)算待測(cè)樣本的目的基因與參照基因拷貝數(shù)比值,即得目的基因的拷貝數(shù)相對(duì)定量檢測(cè)結(jié)果。
其中步驟(1)為:將參照基因與待測(cè)目的基因片段等比例連接,克隆到同一個(gè)質(zhì)粒載體上,構(gòu)建一種可同時(shí)用于參照基因以及待測(cè)目的基因擴(kuò)增檢測(cè)的標(biāo)準(zhǔn)品,并將所得標(biāo)準(zhǔn)品按照濃度梯度稀釋后同時(shí)用于繪制參照基因以及待測(cè)目的基因的標(biāo)準(zhǔn)曲線。
其中所述參照基因?yàn)楸绢I(lǐng)域常規(guī)參照基因,較佳地管家基因,優(yōu)選地為RPPH1的擴(kuò)增區(qū)域,其中所述質(zhì)粒載體為本領(lǐng)域常規(guī)質(zhì)粒載體,較佳地為PCR克隆載體,優(yōu)選地為TA cloning載體,所述TA cloning載體較佳地為pMD18-T載體。其中所述標(biāo)準(zhǔn)品的核酸序列如序列表中SEQ ID NO:6所示。所述的等比例較佳地為1:1。由于標(biāo)準(zhǔn)品中待測(cè)目的基因與參照基因的比例為1:1,解決了目前相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)曲線法應(yīng)用中目的基因與參照基因的濃度比例關(guān)系難以控制的問(wèn)題,提高HER2基因擴(kuò)增檢測(cè)的可靠性。
步驟(2)為:待測(cè)樣本與步驟(1)所述標(biāo)準(zhǔn)品經(jīng)同步進(jìn)行實(shí)時(shí)熒光定量PCR擴(kuò)增后,目的基因與參照基因按照各自的標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算各自的拷貝數(shù),計(jì)算待測(cè)樣本的目的基因與參照基因拷貝數(shù)比值,即得目的基因的拷貝數(shù)相對(duì)定量檢測(cè)結(jié)果。
其中所述待測(cè)目的基因?yàn)楸绢I(lǐng)域常規(guī)待測(cè)目的基因,較佳地為腫瘤或者疾病的特異性基因,更佳地為HER2基因的擴(kuò)增區(qū)域,所述熒光定量PCR擴(kuò)增為本領(lǐng)域常規(guī)熒光定量PCR擴(kuò)增方法,所述熒光定量PCR擴(kuò)增方法較佳地為多通道熒光定量PCR擴(kuò)增,更佳地為雙通道熒光定量PCR擴(kuò)增。

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