詳細(xì)介紹
細(xì)胞名稱 鯽魚腦星形膠質(zhì)細(xì)胞系;CAA圖片
形態(tài)特性 上皮樣
生長特性 貼壁生長
特征特性 該細(xì)胞屬保藏,其特征特性尚未公開。
培養(yǎng)條件 10%FBS
傳代方法 無
傳代情況 1:
3傳代,3-4天傳1次
凍存條件 C5
支原體檢測 基礎(chǔ)培養(yǎng)基+5%DMSO+20%FBS
STR 陰性
同工酶
染色體 未做
使用權(quán)限
鯽魚腦星形膠質(zhì)細(xì)胞系;CAA圖片操作流程:
※主要試劑與儀器:倒置相差顯微鏡),co2孵箱。
※細(xì)胞的復(fù)蘇培養(yǎng)傳代及凍存:
?細(xì)胞的復(fù)蘇培養(yǎng):從液氮罐中取出凍存管,立即投入37℃水浴,同時不斷搖動使之迅速融化,然后用酒精消毒后打開,吸出溶有細(xì)胞的凍存液,加入事先裝好培養(yǎng)液(37℃預(yù)熱,8~10倍體積)離心管內(nèi),稍微吹打混勻,去除上清,加入適量培養(yǎng)液,吹打成細(xì)胞懸液, 以1×105/ml密度接種于25cm2培養(yǎng)瓶內(nèi),在37℃、5%co2及飽和濕度下培養(yǎng)。
?細(xì)胞傳代:原代培養(yǎng)的hek-293細(xì)胞48h換液1次,細(xì)胞長至60%~70%融合時,用0.25%胰酶消化1~2min,將培養(yǎng)瓶再用手掌輕輕敲打使細(xì)胞脫壁、懸浮、分散,為使細(xì)胞進(jìn)一步分散可用吹打管輕輕吹打幾次,獲得細(xì)胞懸液,然后加入倍量的培養(yǎng)基,溫和混勻,吸管分裝混合液,傳代擴(kuò)增細(xì)胞。
?細(xì)胞形態(tài)的觀察:在倒置顯微鏡下觀察并記錄細(xì)胞的生長情況及形態(tài)特征。
?生長曲線:取指數(shù)生長期的細(xì)胞用胰酶消化制成單細(xì)胞懸液,以1×104/孔接種于24孔板,每孔加入1ml培養(yǎng)基。每天隨機(jī)取3孔,計數(shù)每孔細(xì)胞的數(shù)目并計算平均值。連續(xù)計數(shù)10d,繪制細(xì)胞生長曲線
?細(xì)胞的貼壁率:指數(shù)生長期的細(xì)胞,以0.25%胰酶消化成單細(xì)胞懸液,計數(shù)后分別接種于12個25cm2培養(yǎng)瓶中,每兩小時隨機(jī)取出3瓶細(xì)胞,吸除培養(yǎng)基及未貼壁細(xì)胞,加入胰消化酶消化、計數(shù)已貼壁細(xì)胞,取其平均值,按照公式:貼壁率(%)=(已貼壁細(xì)胞數(shù)/接種細(xì)胞數(shù)) ×100%,計算貼壁率。
?細(xì)胞的計數(shù):常規(guī)消化細(xì)胞,待細(xì)胞變圓、脫壁并浮起,加入少量培養(yǎng)基離心,再用pbs重懸并吹打制成細(xì)胞懸液。在細(xì)胞計數(shù)板蓋玻片的一側(cè)加微量細(xì)胞懸液,用10×物鏡觀察計數(shù)板四角大方格細(xì)胞數(shù),按公式計算出細(xì)胞數(shù)。細(xì)胞數(shù)/ml原液=(四方格細(xì)胞數(shù)之和/4) ×104。
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冬凌草英文名稱:Rabdosia rubescens規(guī)格:1g保存:-20℃,避光
蜂膠英文名稱:Propolis規(guī)格:0.5g保存:-20℃,避光
盤龍參英文名稱:Pan Longcan規(guī)格:1.5g保存:-20℃,避光