參數(shù)規(guī)格:
產(chǎn)品名稱(chēng):恙蟲(chóng)病東方體PCR試劑盒50次
產(chǎn)品貨號(hào):FS-P013587
產(chǎn)品規(guī)格:50次
產(chǎn)品分類(lèi):純化試劑盒
產(chǎn)品運(yùn)輸:低溫運(yùn)輸
實(shí)驗(yàn)過(guò)程:
一、試劑準(zhǔn)備 1. DNA模板 2.對(duì)應(yīng)目的基因的特異引物(在PCR反應(yīng)中,新合成的DNA是要接在一小段序列上才能繼續(xù)按照模板DNA復(fù)制,而不能從無(wú)到有,憑空合成。這一小段序列就是你所要有設(shè)計(jì)的引物??梢允荄NA也可以是RNA,一般20多bp,需要根據(jù)你的模板鏈設(shè)計(jì)。因此,擴(kuò)增不同的基因需要設(shè)計(jì)不同的引物) 3.10×PCR Buffer 4.2mM dNTPmix:含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM 5.Taq酶 | 二、操作步驟 1.在冰浴中,按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o(wú)菌0.5ml離心管中。 10×PCR buffer 5μl dNTP mixl 4μl 引物1(10pM) 2μl 引物2(10PM) 2μl Taq酶(2U/μl) 1μl DNA模板(50ng-1μg/μl) 1 μl 加ddH2O至 50 μl 視PCR儀有無(wú)熱蓋,不加或添加石蠟油。 2.調(diào)整好反應(yīng)程序。將上述混合液稍加離心,立即置PCR儀上,執(zhí)行擴(kuò)增。一般:在93℃預(yù)變性3-5min,進(jìn)入循環(huán)擴(kuò)增階段:93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s,循環(huán)30-35次,zui后在72℃ 保溫7min。 3.結(jié)束反應(yīng),PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測(cè)或-20℃長(zhǎng)期保存。 4.PCR的電泳檢測(cè):如在反應(yīng)管中加有石蠟油,需用100μlLuFang進(jìn)行抽提反應(yīng)混合液,以除去石蠟油;否則,直接取5-10μl電泳檢測(cè)。 |
注意事項(xiàng)
1.公司產(chǎn)品僅用于科研整個(gè)檢測(cè)過(guò)程應(yīng)嚴(yán)格按照本說(shuō)明書(shū)要求分別在試劑準(zhǔn)備區(qū)、樣本處理區(qū)和PCR擴(kuò)增區(qū)進(jìn)行操作,各區(qū)實(shí)驗(yàn)服、儀器、耗材應(yīng)獨(dú)立使用,不能混用;實(shí)驗(yàn)用吸頭采用帶濾芯吸頭;樣本處理區(qū)應(yīng)配有生物安全柜,樣本處理在生物安全柜中進(jìn)行操作;三個(gè)區(qū)應(yīng)該配有紫外線(xiàn)殺菌裝置。
2.為避免RNA降解,樣本處理過(guò)程應(yīng)在0-4℃條件下操作,且完成實(shí)驗(yàn)后立即上機(jī)檢測(cè);樣本處理過(guò)程中使用的器具耗材應(yīng)經(jīng)過(guò)無(wú)核酶處理。
3.每次實(shí)驗(yàn)應(yīng)該設(shè)置陰、陽(yáng)性對(duì)照。
4.試劑盒所有試劑在使用前應(yīng)該在常溫下充分融化混勻,并應(yīng)瞬時(shí)離心。
5.試劑盒內(nèi)所配陰性和陽(yáng)性對(duì)照在第一次使用前應(yīng)全部轉(zhuǎn)移至標(biāo)本準(zhǔn)備區(qū),并單獨(dú)存放。
6.為防止熒光干擾,應(yīng)避免裸手直接接觸PCR反應(yīng)管,并應(yīng)避免在PCR反應(yīng)管上進(jìn)行任何標(biāo)記。
7.儀器擴(kuò)增相關(guān)參數(shù)應(yīng)按照本說(shuō)明書(shū)相關(guān)要求進(jìn)行設(shè)置;不同批號(hào)試劑不能混用。
8.ABI系列熒光定量PCR儀參數(shù)設(shè)置中不選ROX校正,淬滅基因選擇None。
9.實(shí)驗(yàn)過(guò)程中產(chǎn)品的廢棄物應(yīng)該進(jìn)行無(wú)害化處理后方可丟棄。
KLK9/FITC 熒光標(biāo)記激肽釋放9抗體IgGMulti-class antibodies: 0.2ml
Slug/FITC 熒光標(biāo)記鋅指轉(zhuǎn)錄因子Slug抗體IgGMulti-class antibodies: 0.2ml
Rhesus antibody Rh ALOX12/12 Lipoxygenase 12脂氧合抗體 0.1ml
Rabbit human IgG/Cy7 Cy7標(biāo)記的兔抗人IgG 0.1ml
GLYATL2 甘胺-N-?;D(zhuǎn)移樣2抗體 0.2ml
Rhesus antibody Rh Rabbit Guinea pig IgM 兔抗豚鼠IgM 1mg
Slug/FITC 熒光標(biāo)記鋅指轉(zhuǎn)錄因子Slug抗體IgGMulti-class antibodies: 0.2ml
NON(Human nonmethylated oligonucleotide0 ELISA Kit 人非甲基化寡核苷Multi-class antibodies: 48T
Phospho-PDGF Receptor beta (Tyr1009) 磷化血小板源性生長(zhǎng)因子受體-B抗體Multi-class antibodies: 0.1ml
Rhesus antibody Rh HLC8/Lung cancer related protein 8 肺癌相關(guān)蛋白8抗體 0.2ml
ANA(Human neutrophil antibody) ELISA Kit 人抗中性粒細(xì)胞抗體 96T
PRL3 磷酯3蛋白抗體 0.2ml
C1orf125 1號(hào)染色體開(kāi)放閱讀框125抗體 0.2ml
Phospho-PDGF Receptor beta (Tyr1009) 磷化血小板源性生長(zhǎng)因子受體-B抗體Multi-class antibodies: 0.1ml
Mouse human IgG(3D3)/RBITC 羅丹明標(biāo)記的鼠抗人IgG單克隆抗體 0.1ml
Glutamyl Prolyl tRNA synthetase/ProRS 谷酰-脯酰-tRNA合成抗體 0.2ml
Rhesus antibody Rh ASTN2 星形肌動(dòng)蛋白抗體 0.2ml
H-ras/FITC 熒光標(biāo)記原癌基因H-ras抗體IgGMulti-class antibodies: 0.2ml
Rhesus antibody Rh Rabbit mouse IgG-Fc 兔抗小鼠IgG-Fc 1mg
Phospho-c-Kit (Tyr719) /FITC 熒光標(biāo)記磷化原癌基因c-kit抗體IgGMulti-class antibodies: 0.2ml
恙蟲(chóng)病東方體PCR試劑盒50次福氏志賀氏菌種屬: Shigella│flexneri提供形式: 凍干物安全等級(jí): 2模式菌株: no應(yīng)用領(lǐng)域: B 蘇聯(lián)系統(tǒng)新城培養(yǎng)基: CM0051生長(zhǎng)條件: 37℃存儲(chǔ)條件: 真空冷凍干燥法
蠟狀芽孢桿菌種屬: Bacillus│cereus分離基物: 土壤提供形式: 凍干物安全等級(jí): 2模式菌株: no培養(yǎng)基: 0002生長(zhǎng)條件: 30℃存儲(chǔ)條件: 液氮超低溫凍結(jié)法;真空冷凍干燥法
肺炎克雷伯氏菌種屬: Klebsiella│pneumoniae提供形式: 凍干物安全等級(jí): 2模式菌株: no應(yīng)用領(lǐng)域: 致病菌芯片培養(yǎng)基: 2生長(zhǎng)條件: 37℃存儲(chǔ)條件: -80℃冰箱凍結(jié)法
玫瑰色鮮艷菌(加詞待譯)種屬: Roseivivax│litoreus分離基物: 樣/海提供形式: 凍干物模式菌株: yes應(yīng)用領(lǐng)域: 模式菌株培養(yǎng)基: 471生長(zhǎng)條件: 28℃存儲(chǔ)條件: 液氮超低溫凍結(jié)法;-80℃冰箱凍結(jié)法;真空冷凍干燥法
E-鈣粘附分子(E-Cadherin)ELISA試劑盒對(duì)基-β-D-吡喃半乳糖苷 98%二甲基烯1,4-丁二酯, 含100ppm MEHQ 穩(wěn)定劑, 95%乙二甲(色譜級(jí))
CXC趨化因子配體1(CXCL1)ELISA試劑盒4-基-β-D-吡喃葡萄糖苷 98%二烯1,3-丁二酯, 含500 ppm 對(duì)二酚(HQ)穩(wěn)定劑, 98%異丁(色譜級(jí))
CX3C趨化因子/fractalkine(FKN/CX3CL1)ELISA試劑盒4-基-2-乙酰氨基-2-脫氧-β-D-吡喃葡萄糖苷 98%甲基烯叔丁酯, 包含有200 ppm MEHQ阻聚劑, 99%乙甲酯(色譜級(jí))
CD80分子(CD80/B7-1)ELISA試劑盒4-基-2-乙酰氨基-2-脫氧-α-D-吡喃半乳糖苷 98%甲基烯環(huán)己酯, 包含60 - 100 ppm MEHQ(氫醌單甲)穩(wěn)定劑,乙二甲乙酯(色譜級(jí))
B活化因子(BAFF/CD257/TNFSF13B)ELISA試劑盒鄰基-β-D-吡喃葡萄糖苷 99%二甲基烯二乙二酯 96%異戊(色譜級(jí))
10kDa干擾γ誘導(dǎo)蛋白(IP-10/CXCL10)ELISA試劑盒2-基-β-D-吡喃半乳糖苷 99%,non-animal origin甲基烯二乙基氨基乙酯, 包含100 ppm 吩噻, 99%甲(色譜級(jí))
10kDa干擾γ誘導(dǎo)蛋白(IP-10)ELISA試劑盒對(duì)-α-D-葡萄糖吡喃苷 99%烯乙氧基乙氧基乙酯, >90%(GC),含1000ppmMEHQ穩(wěn)定劑對(duì)甲酰(色譜級(jí))
左右決定因子1(LEFTY1)ELISA試劑盒1-O-辛基-β-D-吡喃葡萄糖苷2,3,4,6-四乙鹽 98%二烯二乙二酯 75%硝(色譜級(jí))
組織轉(zhuǎn)谷氨酰(TGM2)ELISA試劑盒三-O-乙?;?D-葡萄烯糖 98%烯二甲基氨基乙酯 99%正辛(色譜級(jí))
組織因子通道抑制因子2(TFPI2)ELISA試劑盒5-硫代-D-葡萄糖 96%烯 N,N-二乙基氨基乙酯 95%2-戊酮(色譜級(jí))
組織型纖溶原激活因子(tPA)ELISA試劑盒2,3,4,6-四-O-芐基-D-吡喃半乳糖 98%甲基烯異辛酯 99%3-戊酮(色譜級(jí))
組織內(nèi)轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子β結(jié)合蛋白2(LTBP2)ELISA試劑盒四乙酰核糖 98%甲基烯甲氧基乙酯 98%,含60-100ppmMEHQ穩(wěn)定劑正(色譜級(jí))
組織金屬蛋白抑制因子4(TIMP4)ELISA試劑盒5-溴-4-3吲哚基β-D 半乳糖 99%烯-2-甲氧乙基酯 98%正戊(色譜級(jí))
組織金屬蛋白抑制因子3(TIMP3)ELISA試劑盒二巰基 97%二烯乙二酯 90%石油(色譜級(jí))
組織金屬蛋白抑制因子2(TIMP2)ELISA試劑盒L-腎上腺 98%(劇品)乙二二甲基烯酯 98%石油(色譜級(jí))
組織金屬蛋白抑制因子1(TIMP1)ELISA試劑盒重去甲腎上腺 ≥98%(HPLC),USP3-乙氧基烯乙酯 98%石油(色譜級(jí))
操作流程:
1.從室溫平衡20min后的鋁箔袋中取出所需板條,剩余板條用自封袋密封放回4℃。
2.設(shè)置標(biāo)準(zhǔn)品孔和樣本孔,標(biāo)準(zhǔn)品孔各加不同濃度的標(biāo)準(zhǔn)品50μL;
3.樣本孔中加入待測(cè)樣本50μL;空白孔不加。
4.除空白孔外,標(biāo)準(zhǔn)品孔和樣本孔中每孔加入辣根過(guò)氧化物酶(HRP)標(biāo)記的檢測(cè)抗體100μL,用封板膜封住反應(yīng)孔,37℃水浴鍋或恒溫箱溫育60min。
5.棄去液體,吸水紙上拍干,每孔加滿(mǎn)洗滌液(350μL),靜置1min,甩去洗滌液,吸水紙上拍干,如此重復(fù)洗板5次(也可用洗板機(jī)洗板)。
6.每孔加入底物A、B各50μL,37℃避光孵育15min。
7.每孔加入終止液50μL,15min內(nèi),在450nm波長(zhǎng)處測(cè)定各孔的OD值。