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詳細(xì)介紹
參數(shù)規(guī)格：
產(chǎn)品名稱：油菜內(nèi)源基因核酸檢測試劑盒48T 0.1PCR管
產(chǎn)品貨號：FS-02R6688
產(chǎn)品規(guī)格：48T 0.1PCR管
產(chǎn)品分類：小宗農(nóng)產(chǎn)品檢測系列（Gm9）PCR-熒光探針法
產(chǎn)品運輸：低溫運輸
實驗過程：
一、試劑準(zhǔn)備 1. DNA模板 2．對應(yīng)目的基因的特異引物（在PCR反應(yīng)中，新合成的DNA是要接在一小段序列上才能繼續(xù)按照模板DNA復(fù)制，而不能從無到有，憑空合成。這一小段序列就是你所要有設(shè)計的引物?？梢允荄NA也可以是RNA，一般20多bp，需要根據(jù)你的模板鏈設(shè)計。因此，擴增不同的基因需要設(shè)計不同的引物） 3．10×PCR Buffer 4．2mM dNTPmix：含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM 5．Taq酶 | 二、操作步驟 1．在冰浴中，按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o菌0.5ml離心管中。 10×PCR buffer 5μl dNTP mixl 4μl 引物1（10pM） 2μl 引物2（10PM） 2μl Taq酶（2U/μl） 1μl DNA模板（50ng-1μg/μl） 1 μl 加ddH2O至 50 μl 視PCR儀有無熱蓋，不加或添加石蠟油。 2．調(diào)整好反應(yīng)程序。將上述混合液稍加離心，立即置PCR儀上，執(zhí)行擴增。一般：在93℃預(yù)變性3-5min，進入循環(huán)擴增階段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循環(huán)30-35次，zui后在72℃ 保溫7min。 3．結(jié)束反應(yīng)，PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測或-20℃長期保存。 4．PCR的電泳檢測：如在反應(yīng)管中加有石蠟油，需用100μlLuFang進行抽提反應(yīng)混合液，以除去石蠟油；否則，直接取5-10μl電泳檢測。 |
注意事項
1.公司產(chǎn)品僅用于科研整個檢測過程應(yīng)嚴(yán)格按照本說明書要求分別在試劑準(zhǔn)備區(qū)、樣本處理區(qū)和PCR擴增區(qū)進行操作，各區(qū)實驗服、儀器、耗材應(yīng)獨立使用，不能混用；實驗用吸頭采用帶濾芯吸頭；樣本處理區(qū)應(yīng)配有生物安全柜，樣本處理在生物安全柜中進行操作；三個區(qū)應(yīng)該配有紫外線殺菌裝置。
2.為避免RNA降解，樣本處理過程應(yīng)在0-4℃條件下操作，且完成實驗后立即上機檢測；樣本處理過程中使用的器具耗材應(yīng)經(jīng)過無核酶處理。
3.每次實驗應(yīng)該設(shè)置陰、陽性對照。
4.試劑盒所有試劑在使用前應(yīng)該在常溫下充分融化混勻，并應(yīng)瞬時離心。
5.試劑盒內(nèi)所配陰性和陽性對照在第一次使用前應(yīng)全部轉(zhuǎn)移至標(biāo)本準(zhǔn)備區(qū)，并單獨存放。
6.為防止熒光干擾，應(yīng)避免裸手直接接觸PCR反應(yīng)管，并應(yīng)避免在PCR反應(yīng)管上進行任何標(biāo)記。
7.儀器擴增相關(guān)參數(shù)應(yīng)按照本說明書相關(guān)要求進行設(shè)置；不同批號試劑不能混用。
8.ABI系列熒光定量PCR儀參數(shù)設(shè)置中不選ROX校正，淬滅基因選擇None。
9.實驗過程中產(chǎn)品的廢棄物應(yīng)該進行無害化處理后方可丟棄。
操作流程:
1.從室溫平衡20min后的鋁箔袋中取出所需板條，剩余板條用自封袋密封放回4℃。
2.設(shè)置標(biāo)準(zhǔn)品孔和樣本孔，標(biāo)準(zhǔn)品孔各加不同濃度的標(biāo)準(zhǔn)品50μL；
3.樣本孔中加入待測樣本50μL；空白孔不加。
4.除空白孔外，標(biāo)準(zhǔn)品孔和樣本孔中每孔加入辣根過氧化物酶（HRP）標(biāo)記的檢測抗體100μL，用封板膜封住反應(yīng)孔，37℃水浴鍋或恒溫箱溫育60min。
5.棄去液體，吸水紙上拍干，每孔加滿洗滌液（350μL），靜置1min，甩去洗滌液，吸水紙上拍干，如此重復(fù)洗板5次（也可用洗板機洗板）。
6.每孔加入底物A、B各50μL，37℃避光孵育15min。
7.每孔加入終止液50μL，15min內(nèi)，在450nm波長處測定各孔的OD值。
GHRP-Ghrelin ELISA Kit 大鼠生長釋放肽ghrelinMulti-class antibodies： 96T
TIMP-3 金屬蛋白組織抑制因子-3抗體Multi-class antibodies： 0.1ml
Rhesus antibody Rh Glutamine synthetase/GLUL/GS 谷氨酰胺合成/谷氨連接抗體 0.1ml
Gzms-B ELISA Kit 大鼠顆粒B 96T
NR5A2/LRH1 成纖維細(xì)胞核受體Nr5a2抗體 0.2ml
ARSA 芳基酯A抗體 0.2ml
TIMP-3 金屬蛋白組織抑制因子-3抗體Multi-class antibodies： 0.1ml
I CTP(Human Cross-linked Carboxy-terminal telopeptide of type I collagen) ELISA Kit 人Ⅰ型膠原交聯(lián)羧基末端肽Multi-class antibodies： 48T
HSL/LIPE 敏感脂肪抗體Multi-class antibodies： 0.2ml
Rhesus antibody Rh MATR3/Matrin 3 核基質(zhì)蛋白3抗體 0.1ml
MAO(Human monoamine oxidase) ELISA Kit 人單胺氧化 96T
RECK 金屬蛋白抑制因子RECK抗體 0.2ml
C5orf55 5號染色體開放閱讀框55抗體 0.2ml
HSL/LIPE 敏感脂肪抗體Multi-class antibodies： 0.2ml
Rabbit horse IgG/Alexa Fluor 488 Alexa Fluor 488標(biāo)記的兔抗馬IgG 0.1ml
GAPDH 3-磷甘油脫氫 0.1ml
Rhesus antibody Rh AKAP95/AKAP8 蛋白激A錨定蛋白95抗體 0.1ml
Phospho-Lamin A/C (Ser22) /FITC 熒光標(biāo)記磷化核纖層蛋白A/C抗體IgGMulti-class antibodies： 0.2ml
Rhesus antibody Rh Rabbit Goat IgM/HRP 辣根過氧化物標(biāo)記的兔抗羊IgM 0.1ml
Sox2/FITC 熒光標(biāo)記胚胎干細(xì)胞關(guān)鍵蛋白抗體IgGMulti-class antibodies： 0.2ml
油菜內(nèi)源基因核酸檢測試劑盒48T 0.1PCR管8-異構(gòu)前列腺F2α（8-epi-PGF2α）elisa檢測試劑盒
豚鼠葡萄糖轉(zhuǎn)運蛋白2（GLUT2）elisa檢測試劑盒
大鼠胰脂肪（PL）elisa檢測試劑盒
大鼠骨成型蛋白2（BMP-2）elisa檢測試劑盒
大鼠血管內(nèi)皮生長因子（VEGF）elisa檢測試劑盒
大鼠脂聯(lián)（ADP/Acrp30）elisa檢測試劑盒
睪酮（T）elisa檢測試劑盒
脂氧A4（LXA4）elisa檢測試劑盒
豚鼠鈣調(diào)磷結(jié)合蛋白1（CABIN1）elisa檢測試劑盒
豚鼠核因子-κB亞基p65（NF-κB p65）elisa檢測試劑盒
豚鼠凝集樣氧化低密度脂蛋白受體1（LOX-1）elisa檢測試劑盒
大鼠AMPA離子能谷受體1（GRIA1）elisa檢測試劑盒
大鼠白介1α（IL-1α）elisa檢測試劑盒
大鼠骨保護（OPG）elisa檢測試劑盒
大鼠B瘤因子2（BCL-2）elisa檢測試劑盒
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