組成及試劑配制:
1、酶標(biāo)板:一塊(96孔)
2、 標(biāo)準(zhǔn)品(凍干品): 2瓶,請(qǐng)臨用前15分鐘內(nèi)配制。每瓶以樣品稀釋液稀釋至0.5ml,蓋好后室溫靜置大約10分鐘,同時(shí)反復(fù)顛倒/搓動(dòng)以助溶解,其濃度為200 U/L,然后做系列倍比稀釋(注:不要直接在板中進(jìn)行倍比稀釋),分別配制成200 U/L,100 U/L,50 U/L,25 U/L,12.5 U/L,6.25 U/L,3.12 U/L,樣品稀釋液直接作為空白孔 0 U/L。如配制100 U/L標(biāo)準(zhǔn)品:取0.3ml (不要少于0.3ml )200 U/L的上述標(biāo)準(zhǔn)品加入含有0.3ml樣品稀釋液的Eppendorf管中,混勻即可,其余濃度以此類推。
3、 樣品稀釋液:1×20ml。
4、 檢測稀釋液A:1×10ml。
特別提示:本公司的所有產(chǎn)品僅可用于科研實(shí)驗(yàn),嚴(yán)禁用于臨床醫(yī)療及其他非科研用途!
使用方法:
一、稀釋PCR陽性對(duì)照(以10E2-10E7拷貝/μL這6個(gè)10倍稀釋度為例) 1. 注意:由于標(biāo)準(zhǔn)品濃度非常高,因此下列稀釋操作一定要在獨(dú)立的區(qū)域進(jìn)行,千萬不能污染樣品或本試劑盒的其他成分)。為增加產(chǎn)品穩(wěn)定性和避免擴(kuò)散傳染性病原,本產(chǎn)品不提供活體樣品做陽性對(duì)照,只提供可以直接使用的DNA片段作為陽性對(duì)照。 2. 標(biāo)記6個(gè)離心管,分別為7,6,5,4,3,2。 3. 用帶芯槍頭分別加入45 μL熒光PCR專用模板稀釋液(用帶芯槍頭,下同)。 4. 在7號(hào)管中加入5 μL 1×10E8拷貝/μL 的陽性對(duì)照,充分震蕩1分鐘,得1×10E7拷貝/μL的陽性對(duì)照。放冰上待用。 5. 換槍頭,在6號(hào)管中加入5 μL 1×10E7拷貝/μL 的陽性對(duì)照(上步稀釋所得),充分震蕩1分鐘,得1×10E6拷貝/μL的陽性對(duì)照。放冰上待用。 6. 換槍頭,在5號(hào)管中加入5 μL 1×10E6拷貝/μL的陽性對(duì)照到5號(hào)管中,充分震蕩1分鐘,得1×10E5拷貝/μL的陽性對(duì)照。放冰上待用。 7. 重復(fù)上面的操作直到得到6個(gè)稀釋度的陽性對(duì)照。放冰上待用。 | 二、樣品DNA的制備 8. 如果有N個(gè)樣品,必須設(shè)置N+2個(gè)提取, 多出的一個(gè)是PC(樣品制備陽性對(duì)照), 一個(gè)是NC(樣品制備陰性對(duì)照)。 可以用10μL上步制備的PCR陽性對(duì)照的第4號(hào)(濃度為1×10E4 拷貝/μL,10μL相當(dāng)于1萬拷貝)或第5號(hào)(濃度為1×10E5 拷貝/μL,10μL相當(dāng)于10萬拷貝)再加上一定量的水使總體積跟每次制備要求的體積一樣,以此作為PC。另外用水作為NC。如果每次制備需要200μL樣品,則PC和NC的體積也必須是200μL。 9. 用自選方法純化樣品的DNA,本試劑盒跟市場上大多數(shù)病毒。 | 三、設(shè)置qPCR反應(yīng)(20 μL體系,在樣品制備室進(jìn)行) 10. 如果只做1次重復(fù),則標(biāo)記N+9個(gè)PCR管,其中N+2個(gè)用于上步得到的N+2個(gè)樣品,1個(gè)用于PCR陰性對(duì)照,6個(gè)用于PCR陽性對(duì)照。如果做2-3次重復(fù),則反應(yīng)設(shè)置數(shù)量相應(yīng)增加2或3倍。 11. 產(chǎn)品僅用于科研在標(biāo)記管中按下表加入各成分(本表只列出一次重復(fù)。樣品管和陰性對(duì)照設(shè)置完畢后才設(shè)置陽性對(duì)照,并且陽性對(duì)照樣品要等所有管子蓋上蓋子儲(chǔ)存好后加) |
實(shí)驗(yàn)外包:
1.基因組學(xué):基因芯片、SNP檢測、DNA甲基化檢測、生物信息學(xué)分析
2.轉(zhuǎn)錄組學(xué):microRNA芯片、LncRNA芯片、表達(dá)譜芯片、RNA-seq
3.蛋白質(zhì)組學(xué):2D-DIGE、SILAC、iTRAQ、TMT、Label-free、MRM
4.基因檢測:DNA/RNA提取、RT-PCR、Real-timePCR
5.蛋白質(zhì)檢測:Western blot、Co-ip EMSA、CHIP、免疫熒光、ELISA
6.病理檢測:HE染色、特殊染色、組織切片、免疫組化、流式細(xì)胞分選
7.代謝組學(xué):GC-MS、LC-MS、NMR
8.細(xì)胞及動(dòng)物模型:原代細(xì)胞、細(xì)胞模型、動(dòng)物模型構(gòu)建
Human Involucrin,iNV ELISA Kit 人套膜蛋白Multi-class antibodies: 48T
Socs 1 細(xì)胞因子信號(hào)傳導(dǎo)抑制蛋白1抗體Multi-class antibodies: 0.1ml
Rhesus antibody Rh Goat Mouse IgM/Alexa Fluor 647 Alexa Fluor 647標(biāo)記的羊抗小鼠IgM 0.1ml
C5a ELISA Kit 大鼠補(bǔ)體片斷5a 96T
Neurotensin Receptor 2 神經(jīng)降壓受體2抗體 0.2ml
Phospho-BLNK(Tyr189) 磷化T細(xì)胞連接蛋白抗體 0.1ml
Socs 1 細(xì)胞因子信號(hào)傳導(dǎo)抑制蛋白1抗體Multi-class antibodies: 0.1ml
SMM(Human smooth muscle Myosin) ELISA Kit 人平滑肌肌球蛋白Multi-class antibodies: 48T
Phospho-p63 (Ser395) 磷化P63抑制基因抗體Multi-class antibodies: 0.1ml
Rhesus antibody Rh HSD17B3 羥類固醇脫氫17β3抗體 0.2ml
C4a(Mouse Complement fragment 4a)ELISA Kit 小鼠過敏/補(bǔ)體片斷4a 96T
Proteasome 19S 10B 蛋白體PRS10B抗體 0.2ml
CRBN cereblon蛋白抗體 0.1ml
Phospho-p63 (Ser395) 磷化P63抑制基因抗體Multi-class antibodies: 0.1ml
Donkey rabbit IgG/PE-Cy7 PE-Cy7標(biāo)記的驢抗兔IgG 0.1ml
GCDH 戊二酰A脫氫抗體 0.2ml
Rhesus antibody Rh ART5 二磷腺苷核糖基轉(zhuǎn)移5抗體 0.2ml
ICAM-3/CD50/FITC 熒光標(biāo)記細(xì)胞間粘附分子-3抗體IgGMulti-class antibodies: 0.2ml
Rhesus antibody Rh Rabbit Monkey IgG/PE-Cy7 PE-Cy7標(biāo)記的兔抗猴IgG 0.1ml
Phospho-PKC alpha/beta II (Thr638/641)/FITC 熒光標(biāo)記磷化蛋白激C α/β2抗體IgGMulti-class antibodies: 0.2ml
沙門氏菌通用探針法熒光定量PCR試劑盒50次釀酒酵母種屬: Saccharomyces│cerevisiae提供形式: 凍干物安全等級(jí): 1模式菌株: no應(yīng)用領(lǐng)域: 醬油生香酵母培養(yǎng)基: 0013生長條件: 28℃存儲(chǔ)條件: 液氮超低溫凍結(jié)法;真空冷凍干燥法
地中海擬無枝菌種屬: Amycolatopsis│mediterranei提供形式: 斜面培養(yǎng)物安全等級(jí): 1模式菌株: no應(yīng)用領(lǐng)域: 產(chǎn)生Rifamycin SV利福霉SV培養(yǎng)基: CM0015生長條件: 28C存儲(chǔ)條件: 真空冷凍干燥
綠針假單胞菌種屬: Pseudomonas│chlororaphis提供形式: 凍干物安全等級(jí): 1模式菌株: yes應(yīng)用領(lǐng)域: 模式菌株培養(yǎng)基: 0002生長條件: 30℃存儲(chǔ)條件: 液氮超低溫凍結(jié)法;真空冷凍干燥法
公州假諾卡氏菌種屬: Pseudonocardia│kongjuensis提供形式: 凍干物安全等級(jí): 1模式菌株: yes應(yīng)用領(lǐng)域: 模式菌株培養(yǎng)基: 0038生長條件: 28℃存儲(chǔ)條件: 液氮超低溫凍結(jié)法;真空冷凍干燥法
γ-谷氨酰環(huán)化轉(zhuǎn)移(GGCT)ELISA試劑盒二乙二丁醋酯 98%燒石棉 CP,20-30目DMP
γ谷氨酰半胱氨合成(γ-ECS)ELISA試劑盒N,N-二甲基乙酰 P,98.0% 氫鈉 AR(劇品)沒食子月桂酯(>98.5%,BR)
γ谷氨-半胱氨合成(γ-GCS)ELISA試劑盒N,N-二甲基乙 99.0%亞硝鈷鈉 99.995% metals basisdUMP;2'-脫氧尿苷-5'-二鈉鹽
γ干擾誘導(dǎo)蛋白16/p16(IFI16/p16)ELISA試劑盒N,N-二甲基乙 CP,98.0% 燒石棉 CP, 10-20目乙鹽鹽(>98%,BR)
γ干擾誘導(dǎo)單核因子(MIGF/CXCL9)ELISA試劑盒N,N-二甲基乙 重蒸餾, ≥99.5%鄰聯(lián)甲 AR,98%呋喃三二鈉鹽
γ干擾受體(IFN-γR)ELISA試劑盒雙酮烯酰 99%鄰聯(lián)甲 CP,97%3-吲哚基-beta-D-吡喃葡萄糖苷(>98%,BR)
γ干擾(IFN-γ)ELISA試劑盒硫二乙酯 CP鄰聯(lián)甲 分析標(biāo)準(zhǔn)品,用于環(huán)境分析,≥99%(GC)氧化鑭(>99%,EP)
γ干擾(IFNγ)ELISA試劑盒硫二乙酯 GR鹽鄰聯(lián)甲 AR化鎂六(分子生物學(xué))
γ分泌激活蛋白(PION)ELISA試劑盒3-二基 99%式碳鋅 AR,57.5%醋錳四
γ氨基丁(GABA)ELISA試劑盒二異丁基酮 異構(gòu)體混合物,97%甘氨 AR,99.5-100.5%錳屑(>99%,BR)
β-轉(zhuǎn)導(dǎo)重復(fù)序列包含蛋白(BTRC)ELISA試劑盒二異丁基酮 99%甘氨鈉 98%錳粉(>99%,BR)
β抑制蛋白2(ARRB2)ELISA試劑盒異辛 AR甘氨甲酯鹽鹽 99%6-(馬來酰亞基)己琥珀酰亞酯
β血小板球蛋白/β血栓環(huán)蛋白(β-TG)ELISA試劑盒異辛 CP,98.0%甘氨乙酯鹽鹽 99%神經(jīng)氨(≥10 units/ mg )
β血小板球蛋白(β-TG)ELISA試劑盒乙酰乙乙酯 AR,98%氟鋁 98.5%乙鎳四(>98%,BC)
β(BTC)ELISA試劑盒乙酰乙乙酯 CP,97%氟硅 AR,99.0%尼羅紅(>95%,BS)
β位淀粉樣前體蛋白裂解2(BACE2)ELISA試劑盒乙酰乙乙酯 >99.0%(GC)氟硅 99.999% metals basisN-基脲(>97%,BR)
PCR實(shí)驗(yàn)步驟:
①取凍存已裂解的細(xì)胞,室溫放置5分鐘使其*溶解。
②兩相分離 每1ml的試劑裂解的樣品中加入0.2ml的lvfang,蓋緊管蓋。手動(dòng)劇烈振蕩管體15秒后,15到30℃孵育2到3分鐘。4℃下12000rpm離心15分鐘。離心后混合液體將分為下層的紅色酚lvfang相,中間層以及無色水相上層。RNA全部被分配于水相中。水相上層的體積大約是勻漿時(shí)加入的TRIZOL試劑的60%。
③RNA沉淀將水相上層轉(zhuǎn)移到一干凈無RNA酶的離心管中。加等體積異丙醇混合以沉淀其中的RNA,混勻后15到30℃孵育10分鐘后,于4℃下12000rpm 離心10分鐘。此時(shí)離心前不可見的RNA沉淀將在管底部和側(cè)壁上形成膠狀沉淀塊。
④RNA清洗 移去上清液,每1ml試劑裂解的樣品中加入至少1ml的75%乙醇(75%乙醇用DEPCH2O配制),清洗RNA沉淀?;靹蚝?,4℃下7000rpm離心5分鐘。
⑤RNA干燥 小心吸去大部分乙醇溶液,使RNA沉淀在室溫空氣中干燥5-10分鐘。
⑥溶解RNA沉淀 溶解RNA時(shí),先加入無RNA酶的水40μl用槍反復(fù)吹打幾次,使其*溶解,獲得的RNA溶液保存于-80℃待用。 1)紫外吸收法測定先用稀釋用的TE溶液將分光光度計(jì)調(diào)零。然后取少量RNA溶液用TE稀釋(1:100)后,讀取其在分光光度計(jì)260nm和280nm處的吸收值,測定RNA溶液 濃度和純度。