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詳細(xì)介紹
細(xì)胞詳述
平滑肌即無紋肌的通稱，平滑肌是由長紡錘形的單核細(xì)胞構(gòu)成。它不構(gòu)成獨(dú)立的器官，而只是成為構(gòu)成體壁和內(nèi)臟壁的因素（肌層）。平滑肌細(xì)胞互相連接，形成管狀結(jié)構(gòu)或中空器官；在功能上可以通過縮短和產(chǎn)生張力使器官發(fā)生運(yùn)動和變形，也可產(chǎn)生連續(xù)收縮或緊張性收縮，使器官對抗所加負(fù)荷而保持原有的形狀。
支氣管平滑肌細(xì)胞的收縮、舒張、增殖和凋亡與臨床許多疾病的病理生理過程有關(guān)，如支氣管哮喘、慢性阻塞性肺疾病等。例如在哮喘發(fā)病時(shí)，可以檢測到氣管平滑肌發(fā)生數(shù)目的增生和肥大，表型也發(fā)生改變，由收縮型轉(zhuǎn)為合成型與分泌型，并分泌多種與細(xì)胞因子；而且出現(xiàn)向氣管腔遷移的跡象。
該細(xì)胞通過慢病毒轉(zhuǎn)染的方式攜帶SV40基因。
注意事項(xiàng)： 收到細(xì)胞后第一次傳代建議1：2傳代，充液培養(yǎng)基是維持培養(yǎng)基，不能用來培養(yǎng)細(xì)胞。
細(xì)胞特性
1) 細(xì)胞來源于人正常支氣管組織。
2) 細(xì)胞鑒定：平滑肌肌動蛋白（α-SMA）免疫熒光染色為陽性。
3) 經(jīng)鑒定細(xì)胞純度高于90%。
4) 不含有 HIV-1、 HBV、HCV、支原體、細(xì)菌、酵母和真菌。
5） 細(xì)胞生長方式：長梭狀細(xì)胞，貼壁培養(yǎng)。
一、細(xì)胞基本屬性
產(chǎn)品名稱 | 產(chǎn)品規(guī)格 | 商品貨號 |
人支氣管平滑肌細(xì)胞永生化 | 1×106 | A01X1249 |
二、細(xì)胞培養(yǎng)狀態(tài)
發(fā)貨時(shí)發(fā)送細(xì)胞電子版照片
三、使用方法
客戶收到細(xì)胞后，請按照以下方法進(jìn)行操作。
1. 取出T25細(xì)胞培養(yǎng)瓶，用75%酒精消毒瓶身，拆下封口膜，放入37℃、5%CO2、飽和濕度的細(xì)胞培養(yǎng)箱中靜置3-4h，以穩(wěn)定細(xì)胞狀態(tài)。
2. 貼壁細(xì)胞消化
1)吸出T25細(xì)胞培養(yǎng)瓶中的培養(yǎng)基，用PBS清洗細(xì)胞一次；
2)添加0.25%消化液1mL至T25培養(yǎng)瓶中，輕微轉(zhuǎn)動培養(yǎng)瓶至消化液覆蓋整個(gè)培養(yǎng)瓶底后，吸出多余消化液，37℃溫浴1-3min；倒置顯微鏡下觀察，待細(xì)胞回縮變圓后，再加入5ml培養(yǎng)基終止消化；
3)用吸管輕輕吹打混勻，按傳代比例接種T25培養(yǎng)瓶傳代，然后補(bǔ)充新鮮的培養(yǎng)基至5mL，置于37℃、5%CO2、飽和濕度的細(xì)胞培養(yǎng)箱中靜置培養(yǎng)；
4)待細(xì)胞貼壁后，培養(yǎng)觀察；之后按照換液頻率更換新鮮的培養(yǎng)基。
3. 細(xì)胞收貨脫落
1)收集所有細(xì)胞懸液，1000rpm，離心5min，保留沉淀；
2)添加0.25%消化液0.5mL至離心管中，重懸沉淀，放置于37℃消化3min(或4℃冰箱靜置5-7min)；消化完向離心管內(nèi)加入5ml培養(yǎng)基終止消化；
3)經(jīng)1000rpm，離心5min，丟棄上清，用5ml培養(yǎng)基重懸沉淀，接種于新的培養(yǎng)瓶內(nèi)；
4)待細(xì)胞貼壁后，培養(yǎng)觀察；之后按照換液頻率更換新鮮的培養(yǎng)基(37℃預(yù)熱)。
5)原瓶內(nèi)貼壁細(xì)胞按正常消化處理。
4. 細(xì)胞實(shí)驗(yàn)
因原代細(xì)胞貼壁特殊性，貼壁的原代細(xì)胞在消化后轉(zhuǎn)移至其他實(shí)驗(yàn)器皿（如玻璃爬片、培養(yǎng)板、共聚焦培養(yǎng)皿等）時(shí)，需要對實(shí)驗(yàn)器皿進(jìn)行包被，以增強(qiáng)細(xì)胞貼壁性，避免細(xì)胞因沒貼好影響實(shí)驗(yàn)；包被條件常選用鼠尾膠原Ⅰ（2-5μg/cm2） ，多聚賴氨酸PLL（0.1mg/ml），明膠（0.1%），依據(jù)細(xì)胞種類而定。懸浮/半懸浮細(xì)胞無需包被。
公司正在出售的產(chǎn)品：
兔角膜內(nèi)皮細(xì)胞 | HC11小鼠乳腺上皮細(xì)胞專用培養(yǎng)基 |
錨蛋白重復(fù)域54抗體 | AF555標(biāo)記的腦型脂肪結(jié)合蛋白抗體 |
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CT26.WT小鼠結(jié)腸癌細(xì)胞專用培養(yǎng)基 | AF555標(biāo)記的信號轉(zhuǎn)導(dǎo)與轉(zhuǎn)錄激活因子1單克隆抗體 |
E0771小鼠髓樣乳腺癌細(xì)胞專用培養(yǎng)基 | AF555標(biāo)記的鋅指蛋白32抗體 |
E0771小鼠髓樣乳腺癌細(xì)胞專用培養(yǎng)基 | AF555標(biāo)記的LYPD5蛋白抗體 |
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E14小鼠胚胎干細(xì)胞專用培養(yǎng)基 | AF555標(biāo)記的細(xì)胞角蛋白13抗體 |
EL-4小鼠淋巴瘤細(xì)胞專用培養(yǎng)基 | 人支氣管平滑肌細(xì)胞永生化AF555標(biāo)記的APC標(biāo)記小鼠抗人CD3單克隆抗體 |
EL-4小鼠淋巴瘤細(xì)胞專用培養(yǎng)基 | AF555標(biāo)記的肝臟X受體抗體 |
EMT6小鼠乳腺癌細(xì)胞專用培養(yǎng)基 | AF555標(biāo)記的DHX40蛋白抗體 |
H22小鼠肝癌細(xì)胞專用培養(yǎng)基 | AF555標(biāo)記的AICAR甲?；D(zhuǎn)移抗體 |
四、注意事項(xiàng)
1. 培養(yǎng)基于4℃條件下可保存3-6個(gè)月。
2. 在細(xì)胞培養(yǎng)過程中，請注意保持無菌操作。
3. 傳代培養(yǎng)過程中，消化時(shí)間不宜過長，否則會影響細(xì)胞貼壁及其生長狀態(tài)。
4. 建議客戶收到細(xì)胞后前3天每個(gè)倍數(shù)各拍幾張細(xì)胞照片，記錄細(xì)胞狀態(tài)，便于和技術(shù)部溝通；由于運(yùn)輸?shù)脑?，個(gè)別敏感細(xì)胞會出現(xiàn)不穩(wěn)定的情況，請及時(shí)和我們聯(lián)系，詳盡告知細(xì)胞的具體情況，以便我們的技術(shù)人員跟蹤、回訪直至問題得到解決。
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