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GFP小鼠骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞永生化+GFP

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產(chǎn)品簡介

供貨周期 現(xiàn)貨 規(guī)格 1×106
貨號 A01X1245 主要用途 僅供科研實(shí)驗(yàn)
組織來源 實(shí)驗(yàn)動物的正常骨髓血組織 種屬來源 小鼠
GFP小鼠骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞永生化+GFP的相關(guān)產(chǎn)品:大鼠小腸黏膜上皮細(xì)胞RWPE-2 人前列腺正常細(xì)胞SAOS-2人成骨肉瘤細(xì)胞SBC-2人小細(xì)胞肺癌SCaBER人膀胱鱗癌細(xì)胞SCC-9人類鱗狀上皮舌癌細(xì)胞SCC-25人口腔鱗癌細(xì)胞SHP-77人小細(xì)胞肺癌細(xì)胞sh-sy5y人神經(jīng)母細(xì)胞瘤細(xì)胞sh-sy5y轉(zhuǎn)染突變型人神經(jīng)母細(xì)胞瘤細(xì)胞sh-sy5y轉(zhuǎn)染野生型人神經(jīng)母細(xì)胞瘤細(xì)胞SIHa人子宮頸鱗癌細(xì)胞

詳細(xì)介紹

GFP小鼠骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞永生化+GFP

一、細(xì)胞基本屬性

細(xì)胞名稱

GFP小鼠骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞永生化+GFP

產(chǎn)品規(guī)格

1×106

商品貨號

A01X1245

細(xì)胞詳述

 骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞是骨髓基質(zhì)干細(xì)胞,對骨髓中的造血干細(xì)胞(HSC)不僅有機(jī)械支持作用,還能分泌多種生長因子(如IL-6,IL-11,LIF,M-CSF及SCF等)來支持造血。骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞(bone mesenchymal stem cells,BMSCs)具有多向分化潛能,能促進(jìn)間充質(zhì)組織的再生,如:骨、軟骨、肌肉、韌帶、肌腱、脂肪及基質(zhì)等組織。

在骨髓中,BMSCs占骨髓有核細(xì)胞總數(shù)的0.001%~0.1%,含量極低。而同時(shí),由于組織工程需要大量的種子細(xì)胞,從嚙齒類動物骨髓分離BMSCs的技術(shù)上的難度限制了許多實(shí)驗(yàn)的開展。體外分離培養(yǎng)純度高、活力強(qiáng)、生物特性均一的BMSCs對組織工程及細(xì)胞的體內(nèi)、體外實(shí)驗(yàn)顯得至關(guān)重要。

該細(xì)胞通過慢病毒轉(zhuǎn)染的方式攜帶SV40+GFP基因。

細(xì)胞篩選

該細(xì)胞為穩(wěn)定轉(zhuǎn)染GFP的細(xì)胞,隨細(xì)胞傳代次數(shù)的增加,其GFP熒光強(qiáng)度會逐漸減弱。若實(shí)驗(yàn)要求需要維持熒光強(qiáng)度,可以加入嘌呤霉素進(jìn)行再次篩選。         建議收到細(xì)胞后至少傳3代,凍存留種后再進(jìn)行篩選。

初次進(jìn)行細(xì)胞篩選時(shí),建議加入終濃度為1ug/ml嘌呤霉素的培養(yǎng)基維持培養(yǎng),若無細(xì)胞漂浮或者漂浮較少,即可更換為含2ug/ml嘌呤霉素的培養(yǎng)基繼續(xù)篩選,以此類推,至最高藥物濃度為5ug/ml。若篩選過程中,漂浮細(xì)胞大于60%,則停止篩選,換成正常培養(yǎng)基培養(yǎng),至細(xì)胞密度約80%,可繼續(xù)加入同濃度嘌呤霉素進(jìn)行篩選。當(dāng)加入5ug/ml嘌呤霉素時(shí)細(xì)胞正常增殖,可停止篩選,用不含藥培養(yǎng)基正常培養(yǎng)。

細(xì)胞特性

1) 組織來源于實(shí)驗(yàn)動物的正常骨髓血組織。

2) 細(xì)胞鑒定:CD44免疫熒光染色為陽性。

3) 經(jīng)鑒定細(xì)胞純度高于90%。

4) 不含有 HIV-1、 HBV、HCV、支原體、細(xì)菌、酵母和真菌。

5) 細(xì)胞生長方式:長梭形細(xì)胞,不規(guī)則細(xì)胞,貼壁培養(yǎng)。
6.jpg

實(shí)驗(yàn)步驟:

一、取7-10d雄性SD大鼠,頸椎脫臼處死,浸泡于75%乙醇消毒3-5min。

二、在超凈工作臺中,將大鼠斷頭置于玻璃培養(yǎng)皿中,打開顱腔后取出全腦,放在盛有預(yù)冷的PBS玻璃培養(yǎng)皿中,去除小腦和間腦。

三、將大腦半球在干濾紙上緩慢滾動以去除軟腦膜和腦膜大血管,再放在新的盛有預(yù)冷的PBS玻璃培養(yǎng)皿中。

四、用細(xì)解剖鑷去除大腦白質(zhì)、殘余大血管和軟腦膜,保留大腦皮質(zhì)。

五、大腦皮質(zhì)放于DMEM中,剪碎成約1mm3大小,放入50ml的離心管中,加入混合酶液I(0.05-0 .1%II型膠原酶,0 .025-0 .05%IV型膠原酶,200-400U DNaseI),混勻后37℃水浴消化1-1.5h。

六、室溫1 000×g離心8min,去上清液。

七、沉淀中加入20%BSA重懸浮,充分混勻,1 000×g,20min,4℃離心,去上清。

八、沉淀加入4ml混合酶液II( 0.05-0.1%的膠原酶/分散酶,0.05-0.1%I型膠原酶,100-300U DNaseI )重懸浮,混勻,37℃水浴消化0.5-1h,700×g室溫離心6min,去上清液。

九、沉淀加入2ml DMEM培養(yǎng)液懸浮混勻,鋪于經(jīng)離心形成連續(xù)梯度的12ml 50%Percoll(25 000×g,60min,4℃),1000×g,4℃離心10min。

十、靠近底部的紅細(xì)胞層之上的白黃色的層面即為純化的微血管段,吸出后DMEM漂洗兩次(離心1000×rpm,6min,室溫),去上清液。

加入DMEM培養(yǎng)液(20%FBS,4ug/ml素 )重懸浮,接種于含5%的大鼠 血清37℃孵育過夜所制備的細(xì)胞培養(yǎng)皿中,置于37℃、5%CO2培養(yǎng)箱內(nèi)靜置培養(yǎng)24h后更換不含素的混合培養(yǎng)基,隨后隔天換液。

原代細(xì)胞分離培養(yǎng)的思路:

取材--分離--培養(yǎng)--鑒定

首先將組織從機(jī)體中取出,經(jīng)胰dan白酶/膠原酶處理后分散成單細(xì)胞,再在合適的培養(yǎng)基中培養(yǎng),使細(xì)胞繁殖到一定系數(shù)后進(jìn)行細(xì)胞鑒定。

2.png
公司正在出售的產(chǎn)品:

人直腸癌組織源細(xì)胞

lovo人結(jié)直腸癌細(xì)胞專用培養(yǎng)基

卷曲螺旋結(jié)構(gòu)域蛋白38抗體

PE-Cy7標(biāo)記的透明質(zhì)3/玻璃3抗體

KG-1人急性髓性白血病細(xì)胞專用培養(yǎng)基

PE-Cy7標(biāo)記的突觸富含脯氨膜蛋白7抗體

KG-1a人急性髓性白血病細(xì)胞專用培養(yǎng)基

PE-Cy7標(biāo)記的剪接體相關(guān)蛋白62抗體

KG-1a人急性髓性白血病細(xì)胞專用培養(yǎng)基

PE-Cy7標(biāo)記的耳聾相關(guān)常染色體顯性遺傳5抗體

KGN人卵巢顆粒瘤細(xì)胞專用培養(yǎng)基

PE-Cy7標(biāo)記的GDNF家族受體α3抗體 GFR α3

KGN人卵巢顆粒瘤細(xì)胞專用培養(yǎng)基

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KLE人子宮內(nèi)膜癌細(xì)胞專用培養(yǎng)基

PE-Cy7標(biāo)記的細(xì)胞骨架相關(guān)蛋白1/微管蛋白折疊輔助因子B抗體

KLE人子宮內(nèi)膜癌細(xì)胞專用培養(yǎng)基

PE-Cy7標(biāo)記的鋅指蛋白518抗體

KNS-89人腦膠質(zhì)瘤細(xì)胞專用培養(yǎng)基

PE-Cy7標(biāo)記的半胱胺蛋白蛋白-12抗體

KNS-89人腦膠質(zhì)瘤細(xì)胞專用培養(yǎng)基

PE-Cy7標(biāo)記的磷化APP淀粉樣肽前體蛋白抗體

KTC-1人甲狀腺癌細(xì)胞專用培養(yǎng)基

GFP小鼠骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞永生化+GFPPE-Cy7標(biāo)記的基質(zhì)金屬蛋白27抗體

KTC-1人甲狀腺癌細(xì)胞專用培養(yǎng)基

PE-Cy7標(biāo)記的接頭蛋白DOK7抗體

KU812人外周血嗜堿性白血病細(xì)胞專用培養(yǎng)基

PE-Cy7標(biāo)記的γ-5羧合成抗體

LNCaP clone FGC人前列腺癌細(xì)胞專用培養(yǎng)基

PE-Cy7標(biāo)記的Toll樣受體11抗體

 

注意事項(xiàng):

1. 培養(yǎng)基于4℃條件下可保存3-6個(gè)月。

2. 在細(xì)胞培養(yǎng)過程中,請注意保持無菌操作。

3. 傳代培養(yǎng)過程中,yi酶消化時(shí)間不宜過長,否則會影響細(xì)胞貼壁及其生長狀態(tài)。

4. 建議客戶收到細(xì)胞后前3天每個(gè)倍數(shù)各拍幾張細(xì)胞照片,記錄細(xì)胞狀態(tài),便于和技術(shù)部溝通;由于運(yùn)輸?shù)脑?,個(gè)別敏感細(xì)胞會出現(xiàn)不穩(wěn)定的情況,請及時(shí)和我們聯(lián)系,詳盡告知細(xì)胞的具體情況,以便我們的技術(shù)人員跟蹤、回訪直至問題得到解決。

 


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