產(chǎn)品簡介
供貨周期 | 現(xiàn)貨 | 規(guī)格 | 1×106 |
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貨號 | A01X1245 | 主要用途 | 僅供科研實(shí)驗(yàn) |
組織來源 | 實(shí)驗(yàn)動物的正常骨髓血組織 | 種屬來源 | 小鼠 |
上海撫生實(shí)業(yè)有限公司 |
—— 銷售熱線 ——
18201748966 |
參考價(jià) | ¥3500 |
1×106 | 3500元 | 15 瓶 可售 |
更新時(shí)間:2024-04-08 15:07:50瀏覽次數(shù):253
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供貨周期 | 現(xiàn)貨 | 規(guī)格 | 1×106 |
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貨號 | A01X1245 | 主要用途 | 僅供科研實(shí)驗(yàn) |
組織來源 | 實(shí)驗(yàn)動物的正常骨髓血組織 | 種屬來源 | 小鼠 |
GFP小鼠骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞永生化+GFP
一、細(xì)胞基本屬性
細(xì)胞名稱 | GFP小鼠骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞永生化+GFP |
產(chǎn)品規(guī)格 | 1×106 |
商品貨號 | A01X1245 |
細(xì)胞詳述
骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞是骨髓基質(zhì)干細(xì)胞,對骨髓中的造血干細(xì)胞(HSC)不僅有機(jī)械支持作用,還能分泌多種生長因子(如IL-6,IL-11,LIF,M-CSF及SCF等)來支持造血。骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞(bone mesenchymal stem cells,BMSCs)具有多向分化潛能,能促進(jìn)間充質(zhì)組織的再生,如:骨、軟骨、肌肉、韌帶、肌腱、脂肪及基質(zhì)等組織。
在骨髓中,BMSCs占骨髓有核細(xì)胞總數(shù)的0.001%~0.1%,含量極低。而同時(shí),由于組織工程需要大量的種子細(xì)胞,從嚙齒類動物骨髓分離BMSCs的技術(shù)上的難度限制了許多實(shí)驗(yàn)的開展。體外分離培養(yǎng)純度高、活力強(qiáng)、生物特性均一的BMSCs對組織工程及細(xì)胞的體內(nèi)、體外實(shí)驗(yàn)顯得至關(guān)重要。
該細(xì)胞通過慢病毒轉(zhuǎn)染的方式攜帶SV40+GFP基因。
細(xì)胞篩選
該細(xì)胞為穩(wěn)定轉(zhuǎn)染GFP的細(xì)胞,隨細(xì)胞傳代次數(shù)的增加,其GFP熒光強(qiáng)度會逐漸減弱。若實(shí)驗(yàn)要求需要維持熒光強(qiáng)度,可以加入嘌呤霉素進(jìn)行再次篩選。 建議收到細(xì)胞后至少傳3代,凍存留種后再進(jìn)行篩選。
初次進(jìn)行細(xì)胞篩選時(shí),建議加入終濃度為1ug/ml嘌呤霉素的培養(yǎng)基維持培養(yǎng),若無細(xì)胞漂浮或者漂浮較少,即可更換為含2ug/ml嘌呤霉素的培養(yǎng)基繼續(xù)篩選,以此類推,至最高藥物濃度為5ug/ml。若篩選過程中,漂浮細(xì)胞大于60%,則停止篩選,換成正常培養(yǎng)基培養(yǎng),至細(xì)胞密度約80%,可繼續(xù)加入同濃度嘌呤霉素進(jìn)行篩選。當(dāng)加入5ug/ml嘌呤霉素時(shí)細(xì)胞正常增殖,可停止篩選,用不含藥培養(yǎng)基正常培養(yǎng)。
細(xì)胞特性
1) 組織來源于實(shí)驗(yàn)動物的正常骨髓血組織。
2) 細(xì)胞鑒定:CD44免疫熒光染色為陽性。
3) 經(jīng)鑒定細(xì)胞純度高于90%。
4) 不含有 HIV-1、 HBV、HCV、支原體、細(xì)菌、酵母和真菌。
5) 細(xì)胞生長方式:長梭形細(xì)胞,不規(guī)則細(xì)胞,貼壁培養(yǎng)。
實(shí)驗(yàn)步驟:
一、取7-10d雄性SD大鼠,頸椎脫臼處死,浸泡于75%乙醇消毒3-5min。
二、在超凈工作臺中,將大鼠斷頭置于玻璃培養(yǎng)皿中,打開顱腔后取出全腦,放在盛有預(yù)冷的PBS玻璃培養(yǎng)皿中,去除小腦和間腦。
三、將大腦半球在干濾紙上緩慢滾動以去除軟腦膜和腦膜大血管,再放在新的盛有預(yù)冷的PBS玻璃培養(yǎng)皿中。
四、用細(xì)解剖鑷去除大腦白質(zhì)、殘余大血管和軟腦膜,保留大腦皮質(zhì)。
五、大腦皮質(zhì)放于DMEM中,剪碎成約1mm3大小,放入50ml的離心管中,加入混合酶液I(0.05-0 .1%II型膠原酶,0 .025-0 .05%IV型膠原酶,200-400U DNaseI),混勻后37℃水浴消化1-1.5h。
六、室溫1 000×g離心8min,去上清液。
七、沉淀中加入20%BSA重懸浮,充分混勻,1 000×g,20min,4℃離心,去上清。
八、沉淀加入4ml混合酶液II( 0.05-0.1%的膠原酶/分散酶,0.05-0.1%I型膠原酶,100-300U DNaseI )重懸浮,混勻,37℃水浴消化0.5-1h,700×g室溫離心6min,去上清液。
九、沉淀加入2ml DMEM培養(yǎng)液懸浮混勻,鋪于經(jīng)離心形成連續(xù)梯度的12ml 50%Percoll(25 000×g,60min,4℃),1000×g,4℃離心10min。
十、靠近底部的紅細(xì)胞層之上的白黃色的層面即為純化的微血管段,吸出后DMEM漂洗兩次(離心1000×rpm,6min,室溫),去上清液。
加入DMEM培養(yǎng)液(20%FBS,4ug/ml素 )重懸浮,接種于含5%的大鼠 血清37℃孵育過夜所制備的細(xì)胞培養(yǎng)皿中,置于37℃、5%CO2培養(yǎng)箱內(nèi)靜置培養(yǎng)24h后更換不含素的混合培養(yǎng)基,隨后隔天換液。
原代細(xì)胞分離培養(yǎng)的思路:
取材--分離--培養(yǎng)--鑒定
首先將組織從機(jī)體中取出,經(jīng)胰dan白酶/膠原酶處理后分散成單細(xì)胞,再在合適的培養(yǎng)基中培養(yǎng),使細(xì)胞繁殖到一定系數(shù)后進(jìn)行細(xì)胞鑒定。
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注意事項(xiàng):
1. 培養(yǎng)基于4℃條件下可保存3-6個(gè)月。
2. 在細(xì)胞培養(yǎng)過程中,請注意保持無菌操作。
3. 傳代培養(yǎng)過程中,yi酶消化時(shí)間不宜過長,否則會影響細(xì)胞貼壁及其生長狀態(tài)。
4. 建議客戶收到細(xì)胞后前3天每個(gè)倍數(shù)各拍幾張細(xì)胞照片,記錄細(xì)胞狀態(tài),便于和技術(shù)部溝通;由于運(yùn)輸?shù)脑?,個(gè)別敏感細(xì)胞會出現(xiàn)不穩(wěn)定的情況,請及時(shí)和我們聯(lián)系,詳盡告知細(xì)胞的具體情況,以便我們的技術(shù)人員跟蹤、回訪直至問題得到解決。