詳細(xì)介紹
細(xì)胞名稱(chēng) 人胰腺腺泡上皮癌;HPAC培養(yǎng)
形態(tài)特性 上皮樣
品牌 貼壁生長(zhǎng)
特征特性
培養(yǎng)條件 DMEM-H:
Dulbecco's Modified Eagle's Medium (DME H-21 4.5g/Liter Glucose) 10%FBS
傳代方法 1:3~1:6傳代,3~4天換液1次。
傳代情況 C3
凍存條件 基礎(chǔ)培養(yǎng)基+5%DMSO+20%FBS
支原體檢測(cè) 培養(yǎng)法(-)
STR Amelogenin:X;CSF1PO:13;D13S317:11;D16S539:9,10;D18S51:16;D19S433:14;D21S11:30;D2S1338:19,23;D3S1358:15,17;D5S818:12;D7S820:10,12;D8S1179:12,14;FGA:24;TH01:9.3;TPOX:10,11;vWA:15,17;
同工酶
染色體
使用權(quán)限 B類(lèi)
人胰腺腺泡上皮癌;HPAC培養(yǎng)操作流程:
1.1 主要試劑與儀器:倒置相差顯微鏡(日本 olympus imt-413),co2孵箱(日本yamato it-61)。
1.2 hek-293細(xì)胞的復(fù)蘇培養(yǎng)傳代及凍存:
1.2.1 細(xì)胞的復(fù)蘇培養(yǎng) 從液氮罐中取出凍存管,立即投入37℃水浴,并不斷的搖動(dòng),使之迅速融化。 將溶解的細(xì)胞凍存管取出,用酒精消毒后打開(kāi),吸出溶有細(xì)胞的凍存液,加入事先裝好培養(yǎng)液(37℃預(yù)熱,8~10倍體積)離心管內(nèi),稍微吹打混勻,然后1000rpm 5min,去除上清,加入適量培養(yǎng)液,吹打成細(xì)胞懸液, 以1×105/ml密度接種于25cm2培養(yǎng)瓶?jī)?nèi),在37℃、5%co2及飽和濕度下培養(yǎng)。
1.2.2 細(xì)胞傳代 原代培養(yǎng)的hek-293細(xì)胞48h換液1次,細(xì)胞長(zhǎng)至60%~70%融合時(shí),用0.25%胰酶消化1~2min,將培養(yǎng)瓶再用手掌輕輕敲打使細(xì)胞脫壁、懸浮、分散,為使細(xì)胞進(jìn)一步分散可用吹打管輕輕吹打幾次,獲得細(xì)胞懸液,然后加入倍量的培養(yǎng)基,溫和混勻,吸管分裝混合液,傳代擴(kuò)增細(xì)胞。
1.3 細(xì)胞形態(tài)的觀察 在倒置顯微鏡下觀察并記錄細(xì)胞的生長(zhǎng)情況及形態(tài)特征。
1.4 細(xì)胞的計(jì)數(shù) 常規(guī)消化細(xì)胞,待細(xì)胞變圓、脫壁并浮起,加入少量培養(yǎng)基離心,再用pbs重懸并吹打制成細(xì)胞懸液。在細(xì)胞計(jì)數(shù)板蓋玻片的一側(cè)加微量細(xì)胞懸液,用10×物鏡觀察計(jì)數(shù)板四角大方格細(xì)胞數(shù),按公式計(jì)算出細(xì)胞數(shù)。細(xì)胞數(shù)/ml原液=(四方格細(xì)胞數(shù)之和/4) ×104。
1.5 細(xì)胞的貼壁率 指數(shù)生長(zhǎng)期的細(xì)胞,以0.25%胰酶消化成單細(xì)胞懸液,計(jì)數(shù)后分別接種于12個(gè)25cm2培養(yǎng)瓶中,每?jī)尚r(shí)隨機(jī)取出3瓶細(xì)胞,吸除培養(yǎng)基及未貼壁細(xì)胞,加入胰消化酶消化、計(jì)數(shù)已貼壁細(xì)胞,取其平均值,按照公式:貼壁率(%)=(已貼壁細(xì)胞數(shù)/接種細(xì)胞數(shù)) ×100%,計(jì)算貼壁率。
1.6 生長(zhǎng)曲線 取指數(shù)生長(zhǎng)期的細(xì)胞用胰酶消化制成單細(xì)胞懸液,以1×104/孔接種于24孔板,每孔加入1ml培養(yǎng)基。每天隨機(jī)取3孔,計(jì)數(shù)每孔細(xì)胞的數(shù)目并計(jì)算平均值。連續(xù)計(jì)數(shù)10d,繪制細(xì)胞生長(zhǎng)曲線
人胰腺腺泡上皮癌;HPAC培養(yǎng)貼壁細(xì)胞: 對(duì)于貼壁細(xì)胞應(yīng)先吸(倒)盡培養(yǎng)基,吸的越干凈越好,以免中和后加入的消化液,使強(qiáng)度減弱(或PBS洗1-3次)。50ml培養(yǎng)瓶加入消化液約1-3ml,按此比例進(jìn)行消化,(根據(jù)經(jīng)驗(yàn)),晃動(dòng)使消化液鋪均勻置37度培養(yǎng)箱約2-5分鐘,鏡下見(jiàn)細(xì)胞收縮變圓或少數(shù)脫落后,輕輕振動(dòng)瓶底使細(xì)胞全部脫落,加入2-3ml*培養(yǎng)基后,輕輕吹打,使細(xì)胞基本成單個(gè)懸浮,然后分置其它無(wú)菌培養(yǎng)瓶?jī)?nèi),加入*培養(yǎng)基后繼續(xù)培養(yǎng)或?qū)嶒?yàn)。
人胰腺腺泡上皮癌;HPAC培養(yǎng)懸浮細(xì)胞: 一般傳代可直接將細(xì)胞原液分置其它培養(yǎng)瓶?jī)?nèi),加入*培養(yǎng)基繼續(xù)培養(yǎng),如要高濃度可先離心1000rpm,5min后加入*培養(yǎng)基,輕輕吹勻后,分置其它培養(yǎng)瓶?jī)?nèi)加入*培養(yǎng)基繼續(xù)培養(yǎng)。需要指出的是,在不同的科研小組中這些術(shù)語(yǔ)的定義會(huì)有所不同。許多研究員不用細(xì)胞系這個(gè)詞表示細(xì)胞群除非細(xì)胞經(jīng)過(guò)了遺傳改造。
Anti-Tumstatin/Col4a3/FITC 熒光素標(biāo)記抑素抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格: 0.2ml
CBP(CREB-binding protein) CREB結(jié)合蛋白抗原Multi-class antibodies規(guī)格: 0.5mg
磷酸化鈣/鈣調(diào)素依賴(lài)蛋白激酶2α抗體 Anti-phospho-CaMK2a 0.1ml
SDHA 英文名稱(chēng): 琥珀酸脫氫酶復(fù)合體亞基A抗體 0.1ml
E.coli DH-5 Alpha 英文名稱(chēng): DH5α大腸桿菌菌體蛋白抗體 0.1ml
Rhesus antibody Rh Phospho-HSP27 (Ser15) 磷酸化熱休克蛋白27抗體 規(guī)格 0.1ml
CBP(CREB-binding protein) CREB結(jié)合蛋白抗原Multi-class antibodies規(guī)格: 0.5mg
TSA(Human tumor specific antigen) ELISA Kit 人特異性抗原Multi-class antibodies規(guī)格: 48T
Anti-HHV8/ORF K2 人類(lèi)皰疹病毒8抗體Multi-class antibodies規(guī)格: 0.2ml
Rhesus antibody Rh MFGE8/BA46 上皮細(xì)胞抗原BA46抗體 規(guī)格 0.2ml
L-LDH(Human L-Lactate Dehydrogenase) ELISA Kit 人L-乳酸脫氫酶 96T
RNF211 英文名稱(chēng): 環(huán)指蛋白211抗體 0.2ml
CYP51A1 英文名稱(chēng): 羊毛甾醇14α-去甲基化酶蛋白抗體 0.2ml
Anti-HHV8/ORF K2 人類(lèi)皰疹病毒8抗體Multi-class antibodies規(guī)格: 0.2ml
人BMX非受體絡(luò)氨酸激酶(BMX)ELISA試劑盒人96T1.56-100 ng/mL小鼠磷酸化蛋白激酶B(P-PKB)ELISA試劑盒,英文名:P-PKB ELISA Kit人白介素4受體(IL4R/CD124)ELISA試劑盒人96T15.6-1000 pg/mL小鼠白介素21(IL21)ELISA試劑盒,英文名:IL21 ELISA Kit人白介素18(IL-18)ELISA試劑盒人96T15.6-1000 pg/mL小鼠CD14分子(CD14)ELISA試劑盒,英文名:CD14 ELISA Kit人白細(xì)胞免疫球蛋白樣受體亞科B成員1(LILRB1)ELISA試劑盒人96T31.2-2000 pg/mL大鼠孕酮受體(PROGR)ELISA試劑盒,英文名:PROGR ELISA Kit人CDK活化激酶裝配因子MAT1(MNAT1)ELISA試劑盒人96T78-5000 pg/mL大鼠纖溶酶抗纖溶酶復(fù)合物(PAP)ELISA試劑盒,英文名:PAP ELISA Kit人肌球蛋白輕鏈激酶(MYLK)ELISA試劑盒人96T0.156-10 ng/mL大鼠熱休克蛋白60(Hsp-60)ELISA試劑盒,英文名:Hsp-60 ELISA Kit人NAD(P)H脫氫酶醌1(NAD(P)H dehydrogenase [quinone] 1)ELISA試劑盒人96T0.312-20 ng/mL大鼠可溶性CD86(B7-2/sCD86)ELISA試劑盒,英文名:B7-2/sCD86 ELISA Kit
ELISA Kit for Human Complement component C9小鼠基質(zhì)金屬蛋白酶抑制因子3(TIMP-3)ELISA試劑盒,英文名:TIMP-3 ELISA Kit人 2',5'-寡腺苷酸合成酶2(OAS2)ELISA試劑盒人96T0.312-20 ng/mL大鼠胱抑素SA(CST2)ELISA試劑盒,英文名:CST2 ELISA Kit人PDZ和LIM域蛋白1(PDZ and LIM domain protein 1)ELISA試劑盒人96T0.156-10 ng/mL大鼠促甲狀腺激素(TSH)ELISA試劑盒,英文名:TSH ELISA Kit人催乳素(PRL)ELISA試劑盒人96T15.6-1000 pg/mL大鼠Toll樣受體4(TLR-4)ELISA試劑盒,英文名:TLR-4 ELISA Kit人絡(luò)絲蛋白(Reelin)ELISA試劑盒人96T15.6-1000 pg/mL大鼠組蛋白乙?;D(zhuǎn)移酶1(HAT1)ELISA試劑盒,英文名:HAT1 ELISA Kit人血清反應(yīng)因子(SRF)ELISA試劑盒人96T31.2-2000 pg/mL大鼠纖維蛋白原α(FGα)ELISA試劑盒,英文名:FGα ELISA Kit人克拉拉細(xì)胞磷脂結(jié)合蛋白(CC10)ELISA試劑盒人96T1.56-100 ng/mL大鼠趨化因子C-X-C-基元配體16(CXCL16)ELISA試劑盒,英文名:CXCL16 ELISA Kit
抗體稀釋液 10ml/100ml pH7.2
Versican 英文名稱(chēng): 蛋白聚糖Versican抗體 0.1ml
Rhesus antibody Rh phospho-c-Abl(Tyr245) 磷酸化非受體酪氨酸激酶c-Abl抗體 規(guī)格 0.1ml
Laminin Beta1 peptide 層粘連蛋白β1抗原Multi-class antibodies規(guī)格: 0.5mg
phospho-DOK1(Tyr362) 英文名稱(chēng): 磷酸化D酪酸激酶衰減蛋白1抗體 0.1ml
Anti-phospho-ALK/CD246 (Tyr1604) 磷酸化間變型淋巴瘤激酶抗體Multi-class antibodies規(guī)格: 0.1ml
人胰腺腺泡上皮癌;HPAC培養(yǎng)VCL(Human vinculin) ELISA Kit 人紐蛋白Multi-class antibodies規(guī)格: 48T
Anti-Phospho-PAK1 (Ser199/204)/PAK2 (Ser192/197) 磷酸化p21激活激酶1/2抗體Multi-class antibodies規(guī)格: 0.1ml
Rhesus antibody Rh HPR 結(jié)合珠蛋白相關(guān)蛋白抗體 規(guī)格 0.2ml
Ach ELISA Kit 大鼠乙酰膽堿 96T
Phospho-PKR (Thr446 + Thr451) 英文名稱(chēng): 磷酸化蛋白激酶R抗體 0.1ml
Cryptochrome 1 英文名稱(chēng): 隱花色素蛋白1抗體 0.2ml
Anti-Phospho-PAK1 (Ser199/204)/PAK2 (Ser192/197) 磷酸化p21激活激酶1/2抗體Multi-class antibodies規(guī)格: 0.1ml