服務(wù)流程:
接受訂單及樣品——RNA提取——RNA質(zhì)量檢測(cè)——樣品cDNA合成——定量試驗(yàn)——數(shù)據(jù)分析——結(jié)果交付——售后服務(wù)。
自備物品:
15毫升錐形離心管:用于制備樣品的容器
比色皿:用于比色的容器
96孔酶標(biāo)板:用于比色的容器
分光光度儀:用于比色分析
酶標(biāo)儀:用于微量樣品比色分析
儲(chǔ)存條件:
14℃或-20℃
準(zhǔn)備物品
清理液(A) 毫升
染色液(t B) 微升
稀釋液(C) 毫升
溶解液(tD) 毫升
產(chǎn)品說明書 1份
定量PCR方法:
a、競(jìng)爭(zhēng)法
選擇由突變克隆產(chǎn)生的含有一個(gè)新內(nèi)切位點(diǎn)的外源競(jìng)爭(zhēng)性模板。在同一反應(yīng)管中,待測(cè)樣品與競(jìng)爭(zhēng)模板用同一對(duì)引物同時(shí)擴(kuò)增(其中一個(gè)引物為熒光標(biāo)記)。擴(kuò)增后用內(nèi)切酶消化PCR產(chǎn)物,競(jìng)爭(zhēng)性模板的產(chǎn)物被酶解為兩個(gè)片段,而待測(cè)模板不被酶切,可通過電泳或高效液相將兩種產(chǎn)物分開,分別測(cè)定熒光強(qiáng)度,根據(jù)已知模板推測(cè)未知模板的起始拷貝數(shù)。
b、內(nèi)參照法
在不同的PCR反應(yīng)管中加入已定量的內(nèi)標(biāo)和引物,內(nèi)標(biāo)用基因工程方法合成。上游引物用熒光標(biāo)記,下游引物不標(biāo)記。在模板擴(kuò)增的同時(shí),內(nèi)標(biāo)也被擴(kuò)增。在PCR產(chǎn)物中,由于內(nèi)標(biāo)與靶模板的長(zhǎng)度不同,二者的擴(kuò)增產(chǎn)物可用電泳或高效液相分離開來,分別測(cè)定其熒光強(qiáng)度,以內(nèi)標(biāo)為對(duì)照定量待檢測(cè)模板。
c、PCR-ELISA法
利用di高辛或等標(biāo)記引物,擴(kuò)增產(chǎn)物被固相板上特異的探針?biāo)Y(jié)合,再加入抗di高辛或酶標(biāo)抗體-辣根過氧化物酶結(jié)合物,最終酶使底物顯色。常規(guī)的PCR-ELISA法只是定性實(shí)驗(yàn),若加入內(nèi)標(biāo),作出標(biāo)準(zhǔn)曲線,也可實(shí)現(xiàn)定量檢測(cè)目的。
操作程序:
由您提供該實(shí)驗(yàn)中目的基因的相關(guān)資料(如:基因名稱、序列等信息),我們共同探討服務(wù)的可能性和技術(shù)路線;
商定服務(wù)收費(fèi)、付款方式、服務(wù)期限等,并簽定技術(shù)服務(wù)合同。
有您提供實(shí)驗(yàn)所需的足夠量的實(shí)驗(yàn)樣本(100mg組織或107個(gè)細(xì)胞),本公司不接受您提供的RNA樣本
PCR所需引物/探針(如果用探針法),可以由您自己提供,也可以委托本公司設(shè)計(jì)合成(費(fèi)用另計(jì))。如果由您自己提供,必須是PAGE純化的高質(zhì)量的干粉,本公司不接受已溶解的引物/探針。
我們進(jìn)行RNA抽提、RNA定量、反轉(zhuǎn)錄、Real-time PCR擴(kuò)增、數(shù)據(jù)分析。
提供實(shí)驗(yàn)報(bào)告,包括實(shí)驗(yàn)過程、所用儀器試劑、擴(kuò)增曲線、標(biāo)準(zhǔn)曲線和相關(guān)分析數(shù)據(jù)等。
使用方法:
一、樣品采集:
1、食品樣品:樣品的采集與預(yù)培養(yǎng)按照樣品的采集與預(yù)培養(yǎng)按照菌檢驗(yàn)要求進(jìn)行。
2、血液樣品:用抽取受檢者靜脈血2mL,注入無菌EDTA2Na(或檸檬酸鈉)抗凝管,立即混勻。
3、糞便樣品:取糞便置于滅菌的收集管中送檢。
4、病灶部位樣品:取發(fā)病部位新鮮滲出物、粘液膿血送檢。
二、稀釋 PCR 陽性對(duì)照(以 10E2-10E7 拷貝/μL 這 6 個(gè) 10 倍稀釋度為例)
1. 注意:由于標(biāo)準(zhǔn)品濃度非常高,因此下列稀釋操作一定要在獨(dú)立的區(qū)域進(jìn)行,千萬不能污染樣品或本試劑盒的其他成分)。為增加產(chǎn)品穩(wěn)定性和避免擴(kuò)散傳染性病原,本產(chǎn)品不提供活體樣品做陽性對(duì)照,只提供可以直接使用的 DNA 片段作為陽性對(duì)照。
2. 標(biāo)記 6 個(gè)離心管,分別為 7,6,5,4,3,2。
3. 用帶芯槍頭分別加入 45 μL 熒光 PCR 專用模板稀釋液(最好用帶芯槍頭,下同)。
4. 在 7 號(hào)管中加入 5 μL 1×10E8 拷貝/μL 的陽性對(duì)照,充分震蕩 1 分鐘,得1×10E7 拷貝/μL 的陽性對(duì)照。放冰上待用。
5. 換槍頭,在 6 號(hào)管中加入 5 μL 1×10E7 拷貝/μL 的陽性對(duì)照(上步稀釋所得),充分震蕩 1 分鐘,得 1×10E6 拷貝/μL 的陽性對(duì)照。放冰上待用
6. 換槍頭,在 5 號(hào)管中加入 5 μL 1×10E6 拷貝/μL 的陽性對(duì)照到 5 號(hào)管中,充分震蕩 1 分鐘,得 1×10E5 拷貝/μL 的陽性對(duì)照。放冰上待用。
7. 重復(fù)上面的操作直到得到 6 個(gè)稀釋度的陽性對(duì)照。放冰上待用。
烯異辛酯 >99.0%(GC)化,無水 GR,粉末人雙氫睪酮(DHT)免疫試劑盒
乙二丁 CP,98.5%鈉 GR,99.5%人衰變加速因子(DAF/CD55)免疫試劑盒
烯羥酯 97%化鈉 99.99% metals basis人輸血傳播病/辛型肝炎病抗原免疫試劑盒
甲基烯羥乙酯 98%化鈉 分析標(biāo)準(zhǔn)品,99.93%人輸血傳播病(TTV)/辛型肝炎病抗體免疫試劑盒
甲基烯羥乙酯 96%化鈉 SP人輸卵管特異性糖蛋白(OVGP1)免疫試劑盒
硫羥 CP,97.0%化鈉 PT人瘦(LEP)免疫試劑盒
烯羥乙酯 97%(含200-300ppmMEHQ穩(wěn)定劑)化鈉 ACS, ≥99%人受體型酪氨蛋白磷樣N(PTPRN)免疫試劑盒
正己烷 AR,97%化鈉 AR,98%人受體TNFRSF結(jié)合絲氨蘇氨激2(RIPK2)免疫試劑盒
甲基烯羥酯 97%化鈉 昆蟲培養(yǎng)級(jí), ≥99%人嗜伊紅顆粒主要性蛋白(EMBP/MBP)免疫試劑盒
異辛烷 AR,97%縮節(jié) 分析標(biāo)準(zhǔn)品人嗜性粒陽離子蛋白(ECP)免疫試劑盒
異辛烷 for HPLC, >97% (GC)縮節(jié) 98%人嗜粒趨化蛋白Eotaxin 2(Eotaxin 2/CCL24)免疫試劑盒
異 Standard for GC,>99%(GC)阿斯巴甜 98%人嗜肺軍團(tuán)菌抗原(LP Ag)免疫試劑盒
異 >98.0% (GC)(含100ppm BHT穩(wěn)定劑)1,2,3,4-丁烷四羧 99%人視黃免疫試劑盒
異 CPDL-蘋果 CP,99%人食欲受體(OXR)免疫試劑盒
異 分析標(biāo)準(zhǔn)品,>99.7%(GC)DL-蘋果 AR,99.5%人食欲/阿立新B(OX-B)免疫試劑盒
擬態(tài)弧菌核酸檢測(cè)試劑盒48TD-半胱氨鹽一水化合物5-甲基吡啶-3-促凋亡調(diào)節(jié)蛋白BNIP3抗體
2,3-二氨基萘5-甲基吡啶-3-骨形態(tài)發(fā)生蛋白2受體抗體
人肺表面活性物質(zhì)相關(guān)蛋白D(SP-D)ELISA試劑盒, SP-D ELISA kitN-Z-1,3-二鹽鹽甲狀腺激受體共激活蛋白抗體
人葉(FA)ELISA試劑盒,FA ELISA2-蒽磺酰磷化促凋亡Bik蛋白抗體
人胱天蛋白3(Casp-3)ELISA試劑盒,N-Boc-順式-4-Fmoc-氨基-L-脯氨蛋白酪氨激BAP135抗體
人血清淀粉樣蛋白A(SAA)ELISA試劑盒,N-Boc-順式-4-Fmoc-氨基-L-脯氨磷化相關(guān)死亡促進(jìn)因子抗體
小鼠CD19分子(CD19)ELISA試劑盒,2--5-磷化Bax抗體
小鼠活化A(ACV-A)ELISA試劑盒,2--5-Bcl-10抗體