實(shí)驗(yàn)方法步驟:
特點(diǎn):
1. 即開(kāi)即用,用戶(hù)只需要提供病毒樣品。
2. 根據(jù)保守序列設(shè)計(jì)的專(zhuān)一性引物,與相關(guān)病毒無(wú)交叉反應(yīng)。
3. 靈敏度可以達(dá)到幾百拷貝/反應(yīng)。
4. 一管式熒光定量 PCR 檢測(cè),避免后續(xù)污染。
5. 本試劑盒足夠 50 次 20μL 反應(yīng)體系的熒光定量 PCR。
6. 本產(chǎn)品只適用于科研,不能用于臨床診斷。
儲(chǔ)存條件:-20℃以下,有效期12個(gè)月。
參數(shù)規(guī)格:
產(chǎn)品名稱(chēng):沙門(mén)氏菌核酸檢測(cè)試劑盒48T 0.2PCR管
貨號(hào):YS-01P6343
產(chǎn)品規(guī)格:48T 0.2PCR管
產(chǎn)品運(yùn)輸:低溫運(yùn)輸
產(chǎn)品保存:-20℃保存
產(chǎn)品有效期:一年
運(yùn)輸:低溫
注意事項(xiàng):1.基礎(chǔ)程序;2.?dāng)U增溫度和延伸溫度;3.反應(yīng)時(shí)間;4.循環(huán)次數(shù);5.PCR 反應(yīng)液的配制;6.PCR技術(shù)的基本原理;7.PCR的反應(yīng)動(dòng)力學(xué);8.PCR擴(kuò)增產(chǎn)物;9.PCR反應(yīng)體系與反應(yīng)條件。
特點(diǎn)優(yōu)勢(shì):
1. 特異性:所有產(chǎn)品使用的引物均經(jīng)過(guò)詳盡的生物信息學(xué)分析,經(jīng)過(guò)及自建龐大數(shù)據(jù)庫(kù)的比對(duì),確保所用的每一條引物均為種屬或血清型特異的基因序列區(qū)段,可實(shí)現(xiàn)對(duì)細(xì)菌種屬及血清型的特異檢測(cè),特異性均達(dá)到100%。
2. 重現(xiàn)性:該系列所有產(chǎn)品均經(jīng)過(guò)大量實(shí)驗(yàn)菌株的驗(yàn)證,重現(xiàn)性為100%。
3. 靈敏性:該系列產(chǎn)品可實(shí)現(xiàn)對(duì)檢測(cè)菌的高靈敏檢測(cè),當(dāng)樣品中細(xì)菌的濃度達(dá)到103cfu/ml時(shí),可實(shí)現(xiàn)對(duì)其的直接檢測(cè),無(wú)需繁瑣的增菌過(guò)程。
4. 檢測(cè)范圍廣,涵蓋了對(duì)人體危害較為嚴(yán)重的17種呼吸道及腸道致病菌,可實(shí)現(xiàn)對(duì)臨床樣品及其他環(huán)境取樣的快速檢測(cè),整個(gè)檢測(cè)過(guò)程為3-4個(gè)小時(shí)。
5. 序列資源豐富,除公布的序列外,公司還進(jìn)行了大量菌株的序列破譯,從理論上保證所選引物具有良好的保守性和特異性。
6. 該系列試劑盒均經(jīng)過(guò)大量的保守性及特異性實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證,憑借公司擁有的豐富的菌種資源,每一種檢測(cè)試劑盒均經(jīng)過(guò)了20余種標(biāo)準(zhǔn)菌株和臨床菌株的保守性驗(yàn)證及40余種近緣標(biāo)準(zhǔn)菌株和臨床菌株的特異性驗(yàn)證,確保在使用過(guò)程中不會(huì)出現(xiàn)任何的假陽(yáng)性及假陰性報(bào)告結(jié)果。
實(shí)驗(yàn)過(guò)程:
一、試劑準(zhǔn)備
1. DNA模板
2.對(duì)應(yīng)目的基因的特異引物(在PCR反應(yīng)中,新合成的DNA是要接在一小段序列上才能繼續(xù)按照模板DNA復(fù)制,而不能從無(wú)到有,憑空合成。這一小段序列就是你所要有設(shè)計(jì)的引物??梢允荄NA也可以是RNA,一般20多bp,需要根據(jù)你的模板鏈設(shè)計(jì)。因此,擴(kuò)增不同的基因需要設(shè)計(jì)不同的引物)
3.10×PCR Buffer
4.2mM dNTPmix:含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM
5.Taq酶
二、操作步驟
1.在冰浴中,按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o(wú)菌0.5ml離心管中。
10×PCR buffer 5μl
dNTP mixl 4μl
引物1(10pM) 2μl
引物2(10PM) 2μl
Taq酶(2U/μl) 1μl
DNA模板(50ng-1μg/μl) 1 μl
加ddH2O至 50 μl
視PCR儀有無(wú)熱蓋,不加或添加石蠟油。
2.調(diào)整好反應(yīng)程序。將上述混合液稍加離心,立即置PCR儀上,執(zhí)行擴(kuò)增。一般:在93℃預(yù)變性3-5min,進(jìn)入循環(huán)擴(kuò)增階段:93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s,循環(huán)30-35次,zui后在72℃ 保溫7min。
3.結(jié)束反應(yīng),PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測(cè)或-20℃長(zhǎng)期保存。
4.PCR的電泳檢測(cè):如在反應(yīng)管中加有石蠟油,需用100μlLuFang進(jìn)行抽提反應(yīng)混合液,以除去石蠟油;否則,直接取5-10μl電泳檢測(cè)。
三、注意事項(xiàng)
1.PCR反應(yīng)應(yīng)該在一個(gè)沒(méi)有DNA污染的干凈環(huán)境中進(jìn)行。設(shè)立一個(gè)專(zhuān)用的PCR實(shí)驗(yàn)室。
2.純化模板所選用的方法對(duì)污染的風(fēng)險(xiǎn)有極大影響。一般而言,只要能夠得到可靠的結(jié)果,純化的方法越簡(jiǎn)單越好。
3.所有試劑都應(yīng)該沒(méi)有核酸和核酸酶的污染。操作過(guò)程中均應(yīng)戴手套。
4.PCR試劑配制應(yīng)使用zui高質(zhì)量的新鮮雙蒸水,采用0.22μm濾膜過(guò)濾除菌或高壓滅菌。
5.試劑都應(yīng)該以大體積配制,試驗(yàn)一下是否滿(mǎn)意,然后分裝成僅夠一次使用的量?jī)?chǔ)存,從而確保實(shí)驗(yàn)與實(shí)驗(yàn)之間的連續(xù)性。
6.試劑或樣品準(zhǔn)備過(guò)程中都要使用一次性滅菌的塑料瓶和管子,玻璃器皿應(yīng)洗滌干凈并高壓滅菌。
7.PCR的樣品應(yīng)在冰浴上化開(kāi),并且要充分混勻。
2-亞氨基硫雜環(huán)戊烷鹽鹽 98%過(guò)氧化苯甲酰 75%, remainder water豬Na+/K+-ATP(Na/K ATPase)免疫試劑盒
DL-異檸檬三鈉 92%過(guò)氧化氫叔丁 70% in H2O豬L-乳脫氫(L-LDH)免疫試劑盒
高氯鐵 CP, low chloride過(guò)氧化苯甲叔丁酯 98%豬E選擇(E-Selectin/CD62E)免疫試劑盒
異基氯化鎂 2.0 M in diethyl ether1,1-雙(叔丁基過(guò)氧基)環(huán)己烷 80 wt. %豬D-乳脫氫(D-LDH)免疫試劑盒
異(正+反) 分析標(biāo)準(zhǔn)品,用于環(huán)境分析2,5-二甲基-2,5-雙(過(guò)氧化叔丁基)-3-己炔 試劑級(jí)豬D二聚體(D2D)免疫試劑盒
異戊 99%乙異戊酯 AR,99%豬C肽(C-Peptide)免疫試劑盒
無(wú)水三氯化鐵 ≥99.99% metals basis過(guò)氧化十二酰 98%豬C反應(yīng)蛋白(CRP)免疫試劑盒
三磺銦 98%過(guò)硫鈉 99.99% metals basis豬c-fos 免疫試劑盒
2-亞氨基生物 98%四苯鈉 AR,99%豬B淋巴瘤因子2(Bcl-2)免疫試劑盒
肌-5′-磷二鈉鹽 99%四苯鈉 99.5%豬Bcl-2相關(guān)X蛋白(BAX)免疫試劑盒
5--2- 98%2,5-二甲基-2,5-雙-(叔丁基過(guò)氧)己烷 93%豬Apelin(APLN)免疫試劑盒
胰島 ≥27 USP units/mg (HPLC)正丁 GR(劇品)豬5羥色(5-HT)免疫試劑盒
烯異癸酯 98%,含70-100ppm對(duì)苯二酚穩(wěn)定劑異丁 99%(劇品)豬Ⅲ型前膠原肽(PⅢNP)免疫試劑盒
2-丁酮 97%異丁 Standard for GC, ≥99.5% (GC)豬Ⅲ型前膠原氨基末端肽(PⅢNP)免疫試劑盒
亞油 99%聚烯酰 非離子型,分子量:200萬(wàn)-1400萬(wàn)豬Ⅲ型前膠原氨基端肽(PⅢNT)免疫試劑盒
沙門(mén)氏菌核酸檢測(cè)試劑盒48T 0.2PCR管8異前列腺(8-iso-PG)ELISA試劑盒--動(dòng)物,人二氯磷乙酯軟骨蛋白聚糖抗體
皮質(zhì)醇(Cortisol)ELISA試劑盒--動(dòng)物,人二硝氧化鋯水合物, Puratronic5-氨基乙酰合1抗體
L-正纈氨二硝氧化鋯水合物, Puratronicp53凋亡激蛋白1抗體
小鼠神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子3(NT-3)ELISA試劑盒,8-溴-2'-脫氧腺P53凋亡激蛋白2抗體
小鼠α2纖溶抑制物(α2-PI)ELISA試劑盒,9,10-二苯基蒽激活受體2B抗體
小鼠甲狀腺抗體(TAb)ELISA試劑盒,9,10-二苯基蒽AIMP2抗體
小鼠促性腺激釋放激(GnRH)ELISA試劑盒,9,10-二苯基蒽乙??贵w
α-內(nèi)肽(α-EP)ELISA試劑盒--動(dòng)物,人二苯基次膦酰氯5-氨基乙酰合1抗體