詳細(xì)介紹
原理是由一對(duì)引物介導(dǎo),能在動(dòng)植物體外對(duì)特定基因(DNA)片斷進(jìn)行快速酶促擴(kuò)增,經(jīng)過(guò)n個(gè)熱循環(huán)擴(kuò)增,擴(kuò)增產(chǎn)物中所含特定基因數(shù)是原始模板數(shù)的(1+E)n(0<E<1,擴(kuò)增效率=倍,使得檢測(cè)擴(kuò)增產(chǎn)物中的特定基因成為可能。
特異性強(qiáng)
PCR反應(yīng)的特異性決定因素為:
①引物與模板DNA特異正確的結(jié)合;
②堿基配對(duì)原則;
③Taq DNA聚合酶合成反應(yīng)的忠實(shí)性;
④靶基因的特異性與保守性。
產(chǎn)品名稱(chēng) | 規(guī)格 | 分類(lèi) |
卡氏肺孢子蟲(chóng)PCR檢測(cè)試劑盒進(jìn)口 | 50T | PCR檢測(cè)試劑盒 |
PCR基本操作:
?
實(shí)驗(yàn)注意事項(xiàng):
1)RT-PCR可以檢測(cè)組織、細(xì)胞、血液、細(xì)菌等很多材料,不同的樣本有不同要求,實(shí)驗(yàn)前請(qǐng)充分溝通確認(rèn)實(shí)驗(yàn)方案和樣本情況;
2)客戶(hù)盡可能提供實(shí)驗(yàn)的背景信息、物種、基因準(zhǔn)確的名稱(chēng)和ID號(hào);
3)客戶(hù)盡量不要提供DNA或RNA樣品。
4)樣本保存于液氮或干冰,也可以保存于Trizol液中。
實(shí)時(shí)熒光定量PCR(quantitative real-time PCR,qPCR)是指在PCR反應(yīng)體系中加入熒光基團(tuán),利用熒光信號(hào)積累實(shí)時(shí)監(jiān)測(cè)整個(gè)PCR進(jìn)程,后通過(guò)標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)對(duì)未知模板進(jìn)行定量分析的方法。實(shí)時(shí)熒光定量PCR的化學(xué)原理包括探針類(lèi)和非探針類(lèi)兩類(lèi),探針類(lèi)是利用與靶細(xì)胞序列特異性雜交的探針來(lái)指示擴(kuò)增產(chǎn)物的增加,非探針類(lèi)是利用熒光染料或者特異性設(shè)計(jì)的引物來(lái)指示擴(kuò)增的增加。運(yùn)用該技術(shù)可以對(duì)DNA、RNA樣品進(jìn)行定量(包括定量和相對(duì)定量)和定性分析。
主要服務(wù):DNA或RNA的定量分析、基因表達(dá)差異分析、基因分型。
主要技術(shù):引物設(shè)計(jì)、RNA提取、cDNA合成、qPCR
卡氏肺孢子蟲(chóng)PCR檢測(cè)試劑盒進(jìn)口 異常漢遜酵母 Hansenula anomala芝 Ganoderma lucidium
苷-5單(AMP) 質(zhì)量>98,BR Adenosine-5-monophosphoric acid
玫瑰產(chǎn)色鏈 Streptomyces roseochromogenes褐球固 Azotobacter chrooccum
5'-尿嘧啶 質(zhì)量>98%,BR 5-Bromouracil
釀酒酵母 Saccharomyces cerevisiae蕈青 Penicillium paxilli
胞嘧啶 質(zhì)量>99%,BR Cytosine
AGS(人胃細(xì)胞)Bcap-37(人細(xì)胞)
尿嘧啶 質(zhì)量>99%,可用于細(xì)胞培養(yǎng) Uracil
金子綠僵 Metarhizium anisopliae苜蓿中華根瘤 Sinorhizobium meliloti
胞嘧啶(標(biāo)準(zhǔn)品) 質(zhì)量HPLC>98%,標(biāo)準(zhǔn)品 Cytosine
人肺細(xì)胞Protein A Affinity MagBeads/Protein A 磁性親和純化介質(zhì)
呤 質(zhì)量>99%,BR,可用于細(xì)胞培養(yǎng) Adenine sulfate
Caco-2,人結(jié)直腸細(xì)胞暫無(wú) Cobetia marina
呤(標(biāo)準(zhǔn)品) 質(zhì)量HPLC>98%,標(biāo)準(zhǔn)品 Adenine sulfate
鼠李糖桿 Lactobacillus rhamnosus黑木耳 Auricularia auricula
6-咪并[1,2-b]噠嗪 質(zhì)量>98% 6-Chloroimidazo[1,2-b]pyridazine Phospho-MARCKS (Ser152 + Ser156)英文名稱(chēng):KCNN419號(hào)染色體開(kāi)放閱讀框75體
Phospho-MARCKS (Ser162)英文名稱(chēng):KLHL23隱花色蛋白1體
Met (c Met)英文名稱(chēng):KBTBD10隱花色蛋白2體
phospho-MAP3K9+MAP3K10(Thr312 + Thr266)英文名稱(chēng):KBTBD4鈣通道L型α2多肽體
TYRO3英文名稱(chēng):KLHL24L型電壓依賴(lài)型鈣通道β3(L-type Ca++ CPβ3)體
MAP3K9英文名稱(chēng):KLHL21L型電壓依賴(lài)型鈣通道β4體
MC3 Receptor英文名稱(chēng):KLHL25電壓依賴(lài)性鈣通道CACNA1G+CACNA1H體
Menin英文名稱(chēng):Kinesin鈣結(jié)合蛋白1體
PCR反應(yīng)特點(diǎn)
(1) 特異性強(qiáng)
PCR反應(yīng)的特異性決定因素為:
①引物與模板DNA特異正確的結(jié)合;
②堿基配對(duì)原則;
③Taq DNA聚合酶合成反應(yīng)的忠實(shí)性;
④靶基因的特異性與保守性。
其中引物與模板的正確結(jié)合是關(guān)鍵。引物與模板的結(jié)合及引物鏈的延伸是遵循堿基配對(duì)原則的。聚合酶合成反應(yīng)的忠實(shí)性及Taq DNA聚合酶耐高溫性,使反應(yīng)中模板與引物的結(jié)合(復(fù)性)可以在較高的溫度下進(jìn)行,結(jié)合的特異性大大增加,被擴(kuò)增的靶基因片段也就能保持很高的正確度。再通過(guò)選擇特異性和保守性高的靶基因區(qū),其特異性程度就更高。
(2) 靈敏度高
PCR產(chǎn)物的生成量是以指數(shù)方式增加的,能將皮克(pg=10-12g)量級(jí)的起始待測(cè)模板擴(kuò)增到微克(ug=10-6g)水平。能從100萬(wàn)個(gè)細(xì)胞中檢出一個(gè)靶細(xì)胞;在病毒的檢測(cè)中,PCR的靈敏度可達(dá)3個(gè)RFU(空斑形成單位);在細(xì)菌學(xué)中zui小檢出率為3個(gè)細(xì)菌。
(3) 簡(jiǎn)便、快速
PCR反應(yīng)用耐高溫的Taq DNA聚合酶,一次性地將反應(yīng)液加好后,即在DNA擴(kuò)增液和水浴鍋上進(jìn)行變性-退火-延伸反應(yīng),一般在2~4 小時(shí)完成擴(kuò)增反應(yīng)。擴(kuò)增產(chǎn)物一般用電泳分析,不一定要用同位素,無(wú)放射性污染、易推廣。
(4) 對(duì)標(biāo)本的純度要求低
不需要分離病毒或細(xì)菌及培養(yǎng)細(xì)胞,DNA 粗制品及總RNA均可作為擴(kuò)增模板。可直接用臨床標(biāo)本如血液、體腔液、洗嗽液、毛發(fā)、細(xì)胞、活PCR技術(shù)概論。