詳細介紹
細胞名稱 非洲綠猴腎細胞;VERO-76培養(yǎng)
形態(tài)特性 上皮樣細胞
品牌 貼壁生長
特征特性 為VERO細胞的一個亞克隆
培養(yǎng)條件 DMEM-H:
Dulbecco's Modified Eagle's Medium (DME H-21 4.5g/Liter Glucose) 新生牛血清,10%
傳代方法 1:
8,4-5天一次
傳代情況
凍存條件 基礎(chǔ)培養(yǎng)液+20%牛血清+10%DMSO
支原體檢測 培養(yǎng)法(-)
STR
同工酶
染色體
使用權(quán)限 A類
非洲綠猴腎細胞;VERO-76培養(yǎng)貼壁細胞: 對于貼壁細胞應(yīng)先吸(倒)盡培養(yǎng)基,吸的越干凈越好,以免中和后加入的消化液,使強度減弱(或PBS洗1-3次)。50ml培養(yǎng)瓶加入消化液約1-3ml,按此比例進行消化,(根據(jù)經(jīng)驗),晃動使消化液鋪均勻置37度培養(yǎng)箱約2-5分鐘,鏡下見細胞收縮變圓或少數(shù)脫落后,輕輕振動瓶底使細胞全部脫落,加入2-3ml*培養(yǎng)基后,輕輕吹打,使細胞基本成單個懸浮,然后分置其它無菌培養(yǎng)瓶內(nèi),加入*培養(yǎng)基后繼續(xù)培養(yǎng)或?qū)嶒灐?/span>
操作流程:
1.1 主要試劑與儀器:倒置相差顯微鏡(日本 olympus imt-413),co2孵箱(日本yamato it-61)。
1.2 hek-293細胞的復蘇培養(yǎng)傳代及凍存:
1.2.1 細胞的復蘇培養(yǎng) 從液氮罐中取出凍存管,立即投入37℃水浴,并不斷的搖動,使之迅速融化。 將溶解的細胞凍存管取出,用酒精消毒后打開,吸出溶有細胞的凍存液,加入事先裝好培養(yǎng)液(37℃預熱,8~10倍體積)離心管內(nèi),稍微吹打混勻,然后1000rpm 5min,去除上清,加入適量培養(yǎng)液,吹打成細胞懸液, 以1×105/ml密度接種于25cm2培養(yǎng)瓶內(nèi),在37℃、5%co2及飽和濕度下培養(yǎng)。
1.2.2 細胞傳代 原代培養(yǎng)的hek-293細胞48h換液1次,細胞長至60%~70%融合時,用0.25%胰酶消化1~2min,將培養(yǎng)瓶再用手掌輕輕敲打使細胞脫壁、懸浮、分散,為使細胞進一步分散可用吹打管輕輕吹打幾次,獲得細胞懸液,然后加入倍量的培養(yǎng)基,溫和混勻,吸管分裝混合液,傳代擴增細胞。
1.3 細胞形態(tài)的觀察 在倒置顯微鏡下觀察并記錄細胞的生長情況及形態(tài)特征。
1.4 細胞的計數(shù) 常規(guī)消化細胞,待細胞變圓、脫壁并浮起,加入少量培養(yǎng)基離心,再用pbs重懸并吹打制成細胞懸液。在細胞計數(shù)板蓋玻片的一側(cè)加微量細胞懸液,用10×物鏡觀察計數(shù)板四角大方格細胞數(shù),按公式計算出細胞數(shù)。細胞數(shù)/ml原液=(四方格細胞數(shù)之和/4) ×104。
1.5 細胞的貼壁率 指數(shù)生長期的細胞,以0.25%胰酶消化成單細胞懸液,計數(shù)后分別接種于12個25cm2培養(yǎng)瓶中,每兩小時隨機取出3瓶細胞,吸除培養(yǎng)基及未貼壁細胞,加入胰消化酶消化、計數(shù)已貼壁細胞,取其平均值,按照公式:貼壁率(%)=(已貼壁細胞數(shù)/接種細胞數(shù)) ×100%,計算貼壁率。
1.6 生長曲線 取指數(shù)生長期的細胞用胰酶消化制成單細胞懸液,以1×104/孔接種于24孔板,每孔加入1ml培養(yǎng)基。每天隨機取3孔,計數(shù)每孔細胞的數(shù)目并計算平均值。連續(xù)計數(shù)10d,繪制細胞生長曲線
Anti-FABP(brain)/FITC 熒光素標記腦型脂肪酸結(jié)合蛋白抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格: 0.2ml
Anti-Contactin-6/mNB-3/FITC 熒光素標記NB-3神經(jīng)粘附蛋白抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格: 0.2ml
Rhesus antibody Rh C17orf42 17號染色體開放閱讀框42抗體 規(guī)格 0.2ml
PP-2B alpha 1 蛋白磷酸酯酶-2B 催化亞單位(抗原) 0.5mg
HDAC4 + 5 + 9 英文名稱: 組蛋白去乙?;?+5+9抗體 0.2ml
Rhesus antibody Rh RNF93/ZNF178 環(huán)指蛋白93抗體 規(guī)格 0.2ml
Anti-Contactin-6/mNB-3/FITC 熒光素標記NB-3神經(jīng)粘附蛋白抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格: 0.2ml
Integrin Alpha5(ITG- AlphaV/CD49e) 粘附分子整合素α5抗原Multi-class antibodies規(guī)格: 0.5mg
Anti-ADRB1 腎上腺素能受體β1抗體Multi-class antibodies規(guī)格: 0.1ml
Rhesus antibody Rh Phospho-CD18 (Ser756/Thr758/759) 磷酸化整合素β2抗體 規(guī)格 0.1ml
ECL化學發(fā)光染色液 套 A和B液各50ml
VILIP1 英文名稱: 神經(jīng)視錐蛋白樣1抗體(神經(jīng)鈣蛋白) 0.2ml
DNAJC9 英文名稱: DNAJC9蛋白抗體 0.2ml
Anti-ADRB1 腎上腺素能受體β1抗體Multi-class antibodies規(guī)格: 0.1ml
Rabbit anti-MG IgG/Alexa Fluor 555 Alexa Fluor 555標記的兔抗長爪沙鼠IgG 0.1ml
GPATCH4 英文名稱: G蛋白修補結(jié)構(gòu)域蛋白4抗體 0.2ml
Rhesus antibody Rh AQP7 水通道蛋白-7抗體 規(guī)格 0.1ml
Anti-IL-2/FITC 熒光素標記白介素2抗體(人) IgGMulti-class antibodies規(guī)格: 0.2ml
Rhesus antibody Rh Rabbit Anti-Mink IgG/Cy5 Cy5標記的兔抗水貂IgG 規(guī)格 0.1ml
Anti-PTPN4/MEG1/FITC 熒光素標記蛋白酪氨酸磷酸酶非受體型4抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格: 0.2ml
ADAM8(Mouse A Disintegrin And Metalloprotease 8) ELISA KIT 小鼠解整合素樣金屬蛋白酶8Multi-class antibodies規(guī)格: 48T
Anti-CD31/FITC 熒光素標記血小板內(nèi)皮細胞黏附分子-1抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格: 0.2ml
Rhesus antibody Rh dUTPase 脫氧尿嘧啶三磷酸核苷水解酶抗體 規(guī)格 0.1ml
ECV IgG 艾柯病毒 IgG(間接法二步法)
MAOA 英文名稱: 單氧化酶A抗體 0.1ml
Ankyrin G 英文名稱: 錨定蛋白G抗體 0.2ml
Anti-CD31/FITC 熒光素標記血小板內(nèi)皮細胞黏附分子-1抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格: 0.2ml
懸浮細胞: 一般傳代可直接將細胞原液分置其它培養(yǎng)瓶內(nèi),加入*培養(yǎng)基繼續(xù)培養(yǎng),如要高濃度可先離心1000rpm,5min后加入*培養(yǎng)基,輕輕吹勻后,分置其它培養(yǎng)瓶內(nèi)加入*培養(yǎng)基繼續(xù)培養(yǎng)。需要指出的是,在不同的科研小組中這些術(shù)語的定義會有所不同。許多研究員不用細胞系這個詞表示細胞群除非細胞經(jīng)過了遺傳改造。