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詳細(xì)介紹
水牛皮膚成纖維樣細(xì)胞；WB-S3價(jià)格懸浮細(xì)胞: 一般傳代可直接將細(xì)胞原液分置其它培養(yǎng)瓶?jī)?nèi)，加入*培養(yǎng)基繼續(xù)培養(yǎng)，如要高濃度可先離心1000rpm，5min后加入*培養(yǎng)基，輕輕吹勻后，分置其它培養(yǎng)瓶?jī)?nèi)加入*培養(yǎng)基繼續(xù)培養(yǎng)。需要指出的是，在不同的科研小組中這些術(shù)語(yǔ)的定義會(huì)有所不同。許多研究員不用細(xì)胞系這個(gè)詞表示細(xì)胞群除非細(xì)胞經(jīng)過(guò)了遺傳改造。
細(xì)胞名稱 水牛皮膚成纖維樣細(xì)胞；WB-S3價(jià)格
形態(tài)特性 成纖維細(xì)胞樣
品牌 貼壁生長(zhǎng)
特征特性 該細(xì)胞系來(lái)源于一雌性沼澤型水牛的耳部皮膚組織，2010年由中科院昆明細(xì)胞庫(kù)建立。
培養(yǎng)條件 DMEM-H：
Dulbecco's Modified Eagle's Medium (DME H-21 4.5g/Liter Glucose) 10%FBS
傳代方法 1：
2傳代；3-4天一次
傳代情況 P2
凍存條件 基礎(chǔ)培養(yǎng)基+5%DMSO+20%FBS
支原體檢測(cè) 熒光法（-）
STR -
同工酶
染色體
使用權(quán)限 A類
貼壁細(xì)胞: 對(duì)于貼壁細(xì)胞應(yīng)先吸(倒)盡培養(yǎng)基，吸的越干凈越好，以免中和后加入的消化液，使強(qiáng)度減弱（或PBS洗1－3次）。50ml培養(yǎng)瓶加入消化液約1-3ml，按此比例進(jìn)行消化，(根據(jù)經(jīng)驗(yàn))，晃動(dòng)使消化液鋪均勻置37度培養(yǎng)箱約2-5分鐘，鏡下見細(xì)胞收縮變圓或少數(shù)脫落后，輕輕振動(dòng)瓶底使細(xì)胞全部脫落，加入2-3ml*培養(yǎng)基后，輕輕吹打，使細(xì)胞基本成單個(gè)懸浮，然后分置其它無(wú)菌培養(yǎng)瓶?jī)?nèi)，加入*培養(yǎng)基后繼續(xù)培養(yǎng)或?qū)嶒?yàn)。
操作流程：
1.1 主要試劑與儀器：倒置相差顯微鏡（日本 olympus imt-413），co2孵箱（日本yamato it-61）。
1.2 hek-293細(xì)胞的復(fù)蘇培養(yǎng)傳代及凍存：
1.2.1 細(xì)胞的復(fù)蘇培養(yǎng) 從液氮罐中取出凍存管,立即投入37℃水浴,并不斷的搖動(dòng),使之迅速融化。 將溶解的細(xì)胞凍存管取出,用酒精消毒后打開,吸出溶有細(xì)胞的凍存液,加入事先裝好培養(yǎng)液（37℃預(yù)熱，8～10倍體積）離心管內(nèi),稍微吹打混勻,然后1000rpm 5min,去除上清,加入適量培養(yǎng)液,吹打成細(xì)胞懸液, 以1×105/ml密度接種于25cm2培養(yǎng)瓶?jī)?nèi)，在37℃、5％co2及飽和濕度下培養(yǎng)。
1.2.2 細(xì)胞傳代 原代培養(yǎng)的hek－293細(xì)胞48h換液1次，細(xì)胞長(zhǎng)至60%～70%融合時(shí)，用0.25%胰酶消化1～2min，將培養(yǎng)瓶再用手掌輕輕敲打使細(xì)胞脫壁、懸浮、分散，為使細(xì)胞進(jìn)一步分散可用吹打管輕輕吹打幾次，獲得細(xì)胞懸液，然后加入倍量的培養(yǎng)基，溫和混勻，吸管分裝混合液，傳代擴(kuò)增細(xì)胞。
1.3 細(xì)胞形態(tài)的觀察 在倒置顯微鏡下觀察并記錄細(xì)胞的生長(zhǎng)情況及形態(tài)特征。
1.4 細(xì)胞的計(jì)數(shù) 常規(guī)消化細(xì)胞，待細(xì)胞變圓、脫壁并浮起，加入少量培養(yǎng)基離心，再用pbs重懸并吹打制成細(xì)胞懸液。在細(xì)胞計(jì)數(shù)板蓋玻片的一側(cè)加微量細(xì)胞懸液，用10×物鏡觀察計(jì)數(shù)板四角大方格細(xì)胞數(shù)，按公式計(jì)算出細(xì)胞數(shù)。細(xì)胞數(shù)/ml原液＝(四方格細(xì)胞數(shù)之和/4) ×104。
1.5 細(xì)胞的貼壁率 指數(shù)生長(zhǎng)期的細(xì)胞，以0.25％胰酶消化成單細(xì)胞懸液，計(jì)數(shù)后分別接種于12個(gè)25cm2培養(yǎng)瓶中，每?jī)尚r(shí)隨機(jī)取出3瓶細(xì)胞，吸除培養(yǎng)基及未貼壁細(xì)胞，加入胰消化酶消化、計(jì)數(shù)已貼壁細(xì)胞，取其平均值，按照公式：貼壁率(%)=(已貼壁細(xì)胞數(shù)/接種細(xì)胞數(shù)) ×100％，計(jì)算貼壁率。
1.6 生長(zhǎng)曲線 取指數(shù)生長(zhǎng)期的細(xì)胞用胰酶消化制成單細(xì)胞懸液，以1×104/孔接種于24孔板，每孔加入1ml培養(yǎng)基。每天隨機(jī)取3孔，計(jì)數(shù)每孔細(xì)胞的數(shù)目并計(jì)算平均值。連續(xù)計(jì)數(shù)10d，繪制細(xì)胞生長(zhǎng)曲線
Anti-CT DNA /Gold 膠體金標(biāo)記兔抗小胸腺DNA 抗體IgG(10nm/15nm)Multi-class antibodies規(guī)格： 0.2ml
Anti-Langerin/CD207/FITC 熒光素標(biāo)記白細(xì)胞分化抗原CD207抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格： 0.2ml
Rhesus antibody Rh CCDC102B 卷曲螺旋結(jié)構(gòu)域蛋白102B抗體 規(guī)格 0.2ml
CXCR3/CD183 peptide 細(xì)胞表面趨化因子受體3抗原 0.5mg
HCV-NS1 英文名稱： 丙型肝炎病毒-NS1抗體 0.1ml
Rhesus antibody Rh SLC40A1/FPN1 細(xì)胞膜鐵轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白FP1抗體 規(guī)格 0.1ml
Anti-Langerin/CD207/FITC 熒光素標(biāo)記白細(xì)胞分化抗原CD207抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格： 0.2ml
IQGAP1 支架蛋白抗原Multi-class antibodies規(guī)格： 0.5mg
Anti-ADM R 腎上腺髓質(zhì)素受體抗體Multi-class antibodies規(guī)格： 0.1ml
Rhesus antibody Rh Phospho-cdc2 (Thr14) 磷酸化周期素依賴激酶2抗體 規(guī)格 0.1ml
BCIP/NBT顯色試劑盒-深藍(lán)色 50ml Sigma原料，單一組分
VAT1L 英文名稱： 囊泡胺轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白1家族蛋白抗體 0.2ml
DRIL1 英文名稱： B淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)相關(guān)蛋白DRIL1抗體 0.2ml
Anti-ADM R 腎上腺髓質(zhì)素受體抗體Multi-class antibodies規(guī)格： 0.1ml
Rabbit anti-MG IgG/Gold 膠體金標(biāo)記的兔抗長(zhǎng)爪沙鼠IgG 0.5ml
GAL4 英文名稱： 調(diào)節(jié)蛋白GAL4抗體 0.1ml
Rhesus antibody Rh AP-TNAP/ALPL 堿性磷酸酶抗體 規(guī)格 0.1ml
Anti-IKK gamma/FITC 熒光素標(biāo)記核因子κB激酶gamma抑制劑抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格： 0.2ml
Rhesus antibody Rh Rabbit Anti-Mink IgG/Alexa Fluor 488 Alexa Fluor 488標(biāo)記的兔抗水貂IgG 規(guī)格 0.1ml
Anti-PRCP/FITC 熒光素標(biāo)記脯氨酰羧肽酶抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格： 0.2ml
1,3-DPG(Human 1,3-Disphosphoglycerate, ELISA Kit 人1,3-二磷酸甘油酸Multi-class antibodies規(guī)格： 48T
Anti-MK1/MAPKK1/MKK1 MK1/MAPKK1抗體(N-端)Multi-class antibodies規(guī)格： 0.1ml
Rhesus antibody Rh ITPR1 5-三磷酸肌醇受體1抗體 規(guī)格 0.2ml
ECF ELISA Kit 大鼠嗜酸粒細(xì)胞趨化因子 96T
Proteasome 19S S5A 英文名稱： 26S蛋白酶調(diào)節(jié)亞型S5a抗體 0.2ml
C22orf13 英文名稱： 22號(hào)染色體開放閱讀框13抗體 0.2ml
Anti-MK1/MAPKK1/MKK1 MK1/MAPKK1抗體(N-端)Multi-class antibodies規(guī)格： 0.1ml
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