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詳細(xì)介紹
細(xì)胞名稱 蘭州黑白花奶牛舌尖細(xì)胞；NHBT培養(yǎng)
形態(tài)特性 上皮樣
品牌 貼壁生長
特征特性
培養(yǎng)條件 DMEM-H：
Dulbecco's Modified Eagle's Medium (DME H-21 4.5g/Liter Glucose) 10%FBS
傳代方法
傳代情況
凍存條件 基礎(chǔ)培養(yǎng)基+8%DMSO+20%FBS
支原體檢測 培養(yǎng)法（-）
STR -
同工酶
染色體
使用權(quán)限 A類
蘭州黑白花奶牛舌尖細(xì)胞；NHBT培養(yǎng)貼壁細(xì)胞: 對于貼壁細(xì)胞應(yīng)先吸(倒)盡培養(yǎng)基，吸的越干凈越好，以免中和后加入的消化液，使強(qiáng)度減弱（或PBS洗1－3次）。50ml培養(yǎng)瓶加入消化液約1-3ml，按此比例進(jìn)行消化，(根據(jù)經(jīng)驗(yàn))，晃動(dòng)使消化液鋪均勻置37度培養(yǎng)箱約2-5分鐘，鏡下見細(xì)胞收縮變圓或少數(shù)脫落后，輕輕振動(dòng)瓶底使細(xì)胞全部脫落，加入2-3ml*培養(yǎng)基后，輕輕吹打，使細(xì)胞基本成單個(gè)懸浮，然后分置其它無菌培養(yǎng)瓶內(nèi)，加入*培養(yǎng)基后繼續(xù)培養(yǎng)或?qū)嶒?yàn)。
操作流程：
1.1 主要試劑與儀器：倒置相差顯微鏡（日本 olympus imt-413），co2孵箱（日本yamato it-61）。
1.2 hek-293細(xì)胞的復(fù)蘇培養(yǎng)傳代及凍存：
1.2.1 細(xì)胞的復(fù)蘇培養(yǎng) 從液氮罐中取出凍存管,立即投入37℃水浴,并不斷的搖動(dòng),使之迅速融化。 將溶解的細(xì)胞凍存管取出,用酒精消毒后打開,吸出溶有細(xì)胞的凍存液,加入事先裝好培養(yǎng)液（37℃預(yù)熱，8～10倍體積）離心管內(nèi),稍微吹打混勻,然后1000rpm 5min,去除上清,加入適量培養(yǎng)液,吹打成細(xì)胞懸液, 以1×105/ml密度接種于25cm2培養(yǎng)瓶內(nèi)，在37℃、5％co2及飽和濕度下培養(yǎng)。
1.2.2 細(xì)胞傳代 原代培養(yǎng)的hek－293細(xì)胞48h換液1次，細(xì)胞長至60%～70%融合時(shí)，用0.25%胰酶消化1～2min，將培養(yǎng)瓶再用手掌輕輕敲打使細(xì)胞脫壁、懸浮、分散，為使細(xì)胞進(jìn)一步分散可用吹打管輕輕吹打幾次，獲得細(xì)胞懸液，然后加入倍量的培養(yǎng)基，溫和混勻，吸管分裝混合液，傳代擴(kuò)增細(xì)胞。
1.3 細(xì)胞形態(tài)的觀察 在倒置顯微鏡下觀察并記錄細(xì)胞的生長情況及形態(tài)特征。
1.4 細(xì)胞的計(jì)數(shù) 常規(guī)消化細(xì)胞，待細(xì)胞變圓、脫壁并浮起，加入少量培養(yǎng)基離心，再用pbs重懸并吹打制成細(xì)胞懸液。在細(xì)胞計(jì)數(shù)板蓋玻片的一側(cè)加微量細(xì)胞懸液，用10×物鏡觀察計(jì)數(shù)板四角大方格細(xì)胞數(shù)，按公式計(jì)算出細(xì)胞數(shù)。細(xì)胞數(shù)/ml原液＝(四方格細(xì)胞數(shù)之和/4) ×104。
1.5 細(xì)胞的貼壁率 指數(shù)生長期的細(xì)胞，以0.25％胰酶消化成單細(xì)胞懸液，計(jì)數(shù)后分別接種于12個(gè)25cm2培養(yǎng)瓶中，每兩小時(shí)隨機(jī)取出3瓶細(xì)胞，吸除培養(yǎng)基及未貼壁細(xì)胞，加入胰消化酶消化、計(jì)數(shù)已貼壁細(xì)胞，取其平均值，按照公式：貼壁率(%)=(已貼壁細(xì)胞數(shù)/接種細(xì)胞數(shù)) ×100％，計(jì)算貼壁率。
1.6 生長曲線 取指數(shù)生長期的細(xì)胞用胰酶消化制成單細(xì)胞懸液，以1×104/孔接種于24孔板，每孔加入1ml培養(yǎng)基。每天隨機(jī)取3孔，計(jì)數(shù)每孔細(xì)胞的數(shù)目并計(jì)算平均值。連續(xù)計(jì)數(shù)10d，繪制細(xì)胞生長曲線
Anti-PLC beta 3/Phospholipase C beta 3/FITC 熒光素標(biāo)記磷酯酶Cβ3抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格： 0.2ml
Anti-NFBD1/MDC1/FITC 熒光素標(biāo)記DNA損傷關(guān)卡蛋白1抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格： 0.2ml
Rhesus antibody Rh C10orf63/Enkurin 10號染色體開放閱讀框63抗體 規(guī)格 0.2ml
Batroxobin 蛇毒巴曲酶抗原 0.5mg
HCG Beta(4H7) 英文名稱： 人絨毛膜促性腺激素β亞基單抗 0.1ml
Rhesus antibody Rh RNF150 環(huán)指蛋白150抗體 規(guī)格 0.2ml
Anti-NFBD1/MDC1/FITC 熒光素標(biāo)記DNA損傷關(guān)卡蛋白1抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格： 0.2ml
Jo1/HRS(Human Jo-1 Antibody) ELISA Kit 人Jo1抗體/抗組氨酰tRNA合成酶抗體Multi-class antibodies規(guī)格： 48T
Anti-IL-32/NK4 白介素32抗體Multi-class antibodies規(guī)格： 0.2ml
Rhesus antibody Rh LRPAP1/MRAP 脂蛋白受體相關(guān)蛋白抗體(低密度脂蛋白相關(guān)蛋白的相關(guān)蛋白1) 規(guī)格 0.1ml
BMPs(Human bone morphogenetic proteins) ELISA Kit 人骨形成蛋白 96T
Phospho-Rb (Ser612) 英文名稱： 磷酸化視網(wǎng)膜母細(xì)胞瘤相關(guān)蛋白1抗體 0.1ml
CHAC2 英文名稱： 陽離子轉(zhuǎn)運(yùn)調(diào)節(jié)樣蛋白2抗體 0.1ml
Anti-IL-32/NK4 白介素32抗體Multi-class antibodies規(guī)格： 0.2ml
Rabbit Anti-Mink IgG/Cy5.5 Cy5.5標(biāo)記的兔抗水貂IgG 0.1ml
GFPT2 英文名稱： D-果糖6磷酸轉(zhuǎn)移酶2抗體 0.2ml
Rhesus antibody Rh Arfaptin 2 ADP核糖基化因子結(jié)合蛋白2抗體 規(guī)格 0.2ml
Anti-IL-1 Beta/FITC 熒光素標(biāo)記白介素1β抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格： 0.2ml
Rhesus antibody Rh Rabbit Anti-Mink IgG/PE-Cy3 PE-Cy3標(biāo)記的兔抗水貂IgG 規(guī)格 0.1ml
Anti-Polycystin 2/FITC 熒光素標(biāo)記多囊腎蛋白2抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格： 0.2ml
sCKR(Human soluble cytokine receptor) ELISA Kit 人可溶性細(xì)胞因子受體Multi-class antibodies規(guī)格： 48T
Anti-Galectin 3 半乳糖凝集素3抗體Multi-class antibodies規(guī)格： 0.2ml
Rhesus antibody Rh Mouse Anti-human IgG/Alexa Fluor 488 Alexa Fluor 488標(biāo)記的小鼠抗人IgG 規(guī)格 0.1ml
EAR1(Human eosinophil-associated ribonuclease A family member 1) ELISA KIT 人嗜酸性白血球相關(guān)之RNA水解酵素家族成員1 96T
phospho-RelB(Ser551) 英文名稱： 磷酸化轉(zhuǎn)錄因子RelB蛋白抗體 0.1ml
CCDC139 英文名稱： 卷曲螺旋結(jié)構(gòu)域蛋白139抗體 0.2ml
Anti-Galectin 3 半乳糖凝集素3抗體Multi-class antibodies規(guī)格： 0.2ml
懸浮細(xì)胞: 一般傳代可直接將細(xì)胞原液分置其它培養(yǎng)瓶內(nèi)，加入*培養(yǎng)基繼續(xù)培養(yǎng)，如要高濃度可先離心1000rpm，5min后加入*培養(yǎng)基，輕輕吹勻后，分置其它培養(yǎng)瓶內(nèi)加入*培養(yǎng)基繼續(xù)培養(yǎng)。需要指出的是，在不同的科研小組中這些術(shù)語的定義會(huì)有所不同。許多研究員不用細(xì)胞系這個(gè)詞表示細(xì)胞群除非細(xì)胞經(jīng)過了遺傳改造。
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