詳細(xì)介紹
細(xì)胞名稱 犬胸腺細(xì)胞;cf2Th培養(yǎng)
形態(tài)特性
品牌 貼壁
特征特性 該細(xì)胞為幾種逆轉(zhuǎn)錄病毒的敏感株,可用于擴(kuò)增逆轉(zhuǎn)錄病毒。
培養(yǎng)條件 DMEM-H:
Dulbecco's Modified Eagle's Medium (DME H-21 4.5g/Liter Glucose) 20%FBS
傳代方法 1:2-1:6,每周換液2-3次
傳代情況
凍存條件 90%FBS+10%DMSO
支原體檢測(cè) 培養(yǎng)法(-)
STR
同工酶
染色體
使用權(quán)限 A類
犬胸腺細(xì)胞;cf2Th培養(yǎng)貼壁細(xì)胞: 對(duì)于貼壁細(xì)胞應(yīng)先吸(倒)盡培養(yǎng)基,吸的越干凈越好,以免中和后加入的消化液,使強(qiáng)度減弱(或PBS洗1-3次)。50ml培養(yǎng)瓶加入消化液約1-3ml,按此比例進(jìn)行消化,(根據(jù)經(jīng)驗(yàn)),晃動(dòng)使消化液鋪均勻置37度培養(yǎng)箱約2-5分鐘,鏡下見細(xì)胞收縮變圓或少數(shù)脫落后,輕輕振動(dòng)瓶底使細(xì)胞全部脫落,加入2-3ml*培養(yǎng)基后,輕輕吹打,使細(xì)胞基本成單個(gè)懸浮,然后分置其它無菌培養(yǎng)瓶?jī)?nèi),加入*培養(yǎng)基后繼續(xù)培養(yǎng)或?qū)嶒?yàn)。
操作流程:
1.1 主要試劑與儀器:倒置相差顯微鏡(日本 olympus imt-413),co2孵箱(日本yamato it-61)。
1.2 hek-293細(xì)胞的復(fù)蘇培養(yǎng)傳代及凍存:
1.2.1 細(xì)胞的復(fù)蘇培養(yǎng) 從液氮罐中取出凍存管,立即投入37℃水浴,并不斷的搖動(dòng),使之迅速融化。 將溶解的細(xì)胞凍存管取出,用酒精消毒后打開,吸出溶有細(xì)胞的凍存液,加入事先裝好培養(yǎng)液(37℃預(yù)熱,8~10倍體積)離心管內(nèi),稍微吹打混勻,然后1000rpm 5min,去除上清,加入適量培養(yǎng)液,吹打成細(xì)胞懸液, 以1×105/ml密度接種于25cm2培養(yǎng)瓶?jī)?nèi),在37℃、5%co2及飽和濕度下培養(yǎng)。
1.2.2 細(xì)胞傳代 原代培養(yǎng)的hek-293細(xì)胞48h換液1次,細(xì)胞長(zhǎng)至60%~70%融合時(shí),用0.25%胰酶消化1~2min,將培養(yǎng)瓶再用手掌輕輕敲打使細(xì)胞脫壁、懸浮、分散,為使細(xì)胞進(jìn)一步分散可用吹打管輕輕吹打幾次,獲得細(xì)胞懸液,然后加入倍量的培養(yǎng)基,溫和混勻,吸管分裝混合液,傳代擴(kuò)增細(xì)胞。
1.3 細(xì)胞形態(tài)的觀察 在倒置顯微鏡下觀察并記錄細(xì)胞的生長(zhǎng)情況及形態(tài)特征。
1.4 細(xì)胞的計(jì)數(shù) 常規(guī)消化細(xì)胞,待細(xì)胞變圓、脫壁并浮起,加入少量培養(yǎng)基離心,再用pbs重懸并吹打制成細(xì)胞懸液。在細(xì)胞計(jì)數(shù)板蓋玻片的一側(cè)加微量細(xì)胞懸液,用10×物鏡觀察計(jì)數(shù)板四角大方格細(xì)胞數(shù),按公式計(jì)算出細(xì)胞數(shù)。細(xì)胞數(shù)/ml原液=(四方格細(xì)胞數(shù)之和/4) ×104。
1.5 細(xì)胞的貼壁率 指數(shù)生長(zhǎng)期的細(xì)胞,以0.25%胰酶消化成單細(xì)胞懸液,計(jì)數(shù)后分別接種于12個(gè)25cm2培養(yǎng)瓶中,每?jī)尚r(shí)隨機(jī)取出3瓶細(xì)胞,吸除培養(yǎng)基及未貼壁細(xì)胞,加入胰消化酶消化、計(jì)數(shù)已貼壁細(xì)胞,取其平均值,按照公式:貼壁率(%)=(已貼壁細(xì)胞數(shù)/接種細(xì)胞數(shù)) ×100%,計(jì)算貼壁率。
1.6 生長(zhǎng)曲線 取指數(shù)生長(zhǎng)期的細(xì)胞用胰酶消化制成單細(xì)胞懸液,以1×104/孔接種于24孔板,每孔加入1ml培養(yǎng)基。每天隨機(jī)取3孔,計(jì)數(shù)每孔細(xì)胞的數(shù)目并計(jì)算平均值。連續(xù)計(jì)數(shù)10d,繪制細(xì)胞生長(zhǎng)曲線
Anti-CT/FITC 熒光素標(biāo)記降鈣素抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格: 0.2ml
Anti-Laminin Beta1/FITC 熒光素標(biāo)記層粘連蛋白β1抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格: 0.2ml
Rhesus antibody Rh CCDC114 卷曲螺旋結(jié)構(gòu)域蛋白114抗體 規(guī)格 0.2ml
Gelsolin 凝溶膠蛋白抗原 0.5mg
HA tag(12CA5) 英文名稱: HA tag標(biāo)簽單克隆抗體 0.1ml
Rhesus antibody Rh SLC7A9 離子轉(zhuǎn)運(yùn)相關(guān)蛋白SLC7A9抗體 規(guī)格 0.2ml
Anti-Laminin Beta1/FITC 熒光素標(biāo)記層粘連蛋白β1抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格: 0.2ml
LFA-3/CD58 ELISA Kit 大鼠淋巴細(xì)胞功能相關(guān)抗原3Multi-class antibodies規(guī)格: 48T
Anti-AARS2 /FITC 熒光素標(biāo)記丙氨酰tRNA合成酶2抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格: 0.2ml
Rhesus antibody Rh FLT3L FMS樣酪氨酸激酶3配體抗體 規(guī)格 0.2ml
ALT/GPT(Mouse Alanine Aminotransferase) ELISA Kit 小鼠丙酸轉(zhuǎn)酶/谷丙轉(zhuǎn)酶 96T
Motilin 英文名稱: 胃動(dòng)素抗體 0.1ml
AIF 英文名稱: 調(diào)亡誘導(dǎo)因子抗體 0.1ml
Anti-AARS2 /FITC 熒光素標(biāo)記丙氨酰tRNA合成酶2抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格: 0.2ml
Rabbit Anti-mouse IgG/APC APC標(biāo)記的兔抗小鼠IgG 0.1ml
phospho-GSK3 Beta (Tyr216) 英文名稱: 磷酸化糖原合酶激酶3β抗體 0.1ml
Rhesus antibody Rh ANKS1B/AIDA1 β淀粉樣蛋白胞內(nèi)結(jié)構(gòu)域相關(guān)蛋白1抗體 規(guī)格 0.2ml
Anti-Inhibin BetaA/FITC 熒光素標(biāo)記抑制素βA抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格: 0.2ml
Rhesus antibody Rh Rabbit Anti-human IgG/Alexa Fluor 350 Alexa Fluor 350標(biāo)記的兔抗人IgG 規(guī)格 0.1ml
Anti-ROS/FITC 熒光素標(biāo)記活性氧簇ROS抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格: 0.2ml
Anti-IAA/FITC 熒光素標(biāo)記吲哚-3-乙酸抗體/植物生長(zhǎng)素單克隆抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格: 0.2ml
Anti-P-AKT1/PKB1/2/3(pSer473) /FITC 熒光素標(biāo)記磷酸化蛋白激酶B(pSer473)抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格: 0.2ml
Rhesus antibody Rh ASAM/ACAM 脂肪細(xì)胞特異性粘附分子抗體 規(guī)格 0.1ml
Donkey Anti-rabbit IgG/PE-CY5 PE-CY5標(biāo)記的驢抗兔IgG 0.1ml
GIT2 英文名稱: G蛋白偶聯(lián)受體激酶相互作用蛋白2抗體 0.2ml
Rhesus antibody Rh Rabbit Anti-Monkey IgM/Cy3 Cy3標(biāo)記的兔抗猴IgM 規(guī)格 0.1ml
Anti-P-AKT1/PKB1/2/3(pSer473) /FITC 熒光素標(biāo)記磷酸化蛋白激酶B(pSer473)抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格: 0.2ml
懸浮細(xì)胞: 一般傳代可直接將細(xì)胞原液分置其它培養(yǎng)瓶?jī)?nèi),加入*培養(yǎng)基繼續(xù)培養(yǎng),如要高濃度可先離心1000rpm,5min后加入*培養(yǎng)基,輕輕吹勻后,分置其它培養(yǎng)瓶?jī)?nèi)加入*培養(yǎng)基繼續(xù)培養(yǎng)。需要指出的是,在不同的科研小組中這些術(shù)語(yǔ)的定義會(huì)有所不同。許多研究員不用細(xì)胞系這個(gè)詞表示細(xì)胞群除非細(xì)胞經(jīng)過了遺傳改造。