詳細介紹
細胞名稱 家貓腎細胞;CATK1培養(yǎng)
形態(tài)特性 上皮樣,多角形
品牌 貼壁生長
特征特性 該細胞來源于一雄性家貓的腎組織。2000年由中國科學院昆明細胞庫建立。
培養(yǎng)條件 M-199:
with Earle's Balanced Salts Solution (EBSS) 15%NBS
傳代方法 1:
2傳代;3-4天一次
傳代情況 P4
凍存條件 基礎培養(yǎng)基+5%DMSO+20%FBS
支原體檢測 熒光法(-)
STR -
同工酶
染色體
使用權限 A類
家貓腎細胞;CATK1培養(yǎng)貼壁細胞: 對于貼壁細胞應先吸(倒)盡培養(yǎng)基,吸的越干凈越好,以免中和后加入的消化液,使強度減弱(或PBS洗1-3次)。50ml培養(yǎng)瓶加入消化液約1-3ml,按此比例進行消化,(根據(jù)經(jīng)驗),晃動使消化液鋪均勻置37度培養(yǎng)箱約2-5分鐘,鏡下見細胞收縮變圓或少數(shù)脫落后,輕輕振動瓶底使細胞全部脫落,加入2-3ml*培養(yǎng)基后,輕輕吹打,使細胞基本成單個懸浮,然后分置其它無菌培養(yǎng)瓶內,加入*培養(yǎng)基后繼續(xù)培養(yǎng)或實驗。
操作流程:
1.1 主要試劑與儀器:倒置相差顯微鏡(日本 olympus imt-413),co2孵箱(日本yamato it-61)。
1.2 hek-293細胞的復蘇培養(yǎng)傳代及凍存:
1.2.1 細胞的復蘇培養(yǎng) 從液氮罐中取出凍存管,立即投入37℃水浴,并不斷的搖動,使之迅速融化。 將溶解的細胞凍存管取出,用酒精消毒后打開,吸出溶有細胞的凍存液,加入事先裝好培養(yǎng)液(37℃預熱,8~10倍體積)離心管內,稍微吹打混勻,然后1000rpm 5min,去除上清,加入適量培養(yǎng)液,吹打成細胞懸液, 以1×105/ml密度接種于25cm2培養(yǎng)瓶內,在37℃、5%co2及飽和濕度下培養(yǎng)。
1.2.2 細胞傳代 原代培養(yǎng)的hek-293細胞48h換液1次,細胞長至60%~70%融合時,用0.25%胰酶消化1~2min,將培養(yǎng)瓶再用手掌輕輕敲打使細胞脫壁、懸浮、分散,為使細胞進一步分散可用吹打管輕輕吹打幾次,獲得細胞懸液,然后加入倍量的培養(yǎng)基,溫和混勻,吸管分裝混合液,傳代擴增細胞。
1.3 細胞形態(tài)的觀察 在倒置顯微鏡下觀察并記錄細胞的生長情況及形態(tài)特征。
1.4 細胞的計數(shù) 常規(guī)消化細胞,待細胞變圓、脫壁并浮起,加入少量培養(yǎng)基離心,再用pbs重懸并吹打制成細胞懸液。在細胞計數(shù)板蓋玻片的一側加微量細胞懸液,用10×物鏡觀察計數(shù)板四角大方格細胞數(shù),按公式計算出細胞數(shù)。細胞數(shù)/ml原液=(四方格細胞數(shù)之和/4) ×104。
1.5 細胞的貼壁率 指數(shù)生長期的細胞,以0.25%胰酶消化成單細胞懸液,計數(shù)后分別接種于12個25cm2培養(yǎng)瓶中,每兩小時隨機取出3瓶細胞,吸除培養(yǎng)基及未貼壁細胞,加入胰消化酶消化、計數(shù)已貼壁細胞,取其平均值,按照公式:貼壁率(%)=(已貼壁細胞數(shù)/接種細胞數(shù)) ×100%,計算貼壁率。
1.6 生長曲線 取指數(shù)生長期的細胞用胰酶消化制成單細胞懸液,以1×104/孔接種于24孔板,每孔加入1ml培養(yǎng)基。每天隨機取3孔,計數(shù)每孔細胞的數(shù)目并計算平均值。連續(xù)計數(shù)10d,繪制細胞生長曲線
Anti-CLCA4/FITC 熒光素標記鈣激活氯離子通道4抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格: 0.2ml
Anti-phospho-IRS1(Tyr1222)/FITC 熒光素標記磷酸化胰島素受體底物-1抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格: 0.2ml
Rhesus antibody Rh CCL13/MCP-4 單核細胞趨化蛋白4抗體 規(guī)格 0.2ml
IGF-IIBP3(Insulin like growth factor 2 mRNA binding protein 3) 胰島素樣生長因子2 mRNA 結合蛋白3抗原 0.5mg
H5N1 Hemagglutinin 英文名稱: A型流感病毒H5N1凝集素 1ml
Rhesus antibody Rh SOX22 核轉錄因子SOX22抗體 規(guī)格 0.2ml
Anti-phospho-IRS1(Tyr1222)/FITC 熒光素標記磷酸化胰島素受體底物-1抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格: 0.2ml
LH(Mouse luteotropic hormone)ELISA Kit 小鼠促黃體激素Multi-class antibodies規(guī)格: 48T
Anti-CLEC2D/OCIL/FITC 熒光素標記CLEC2D蛋白抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格: 0.2ml
Rhesus antibody Rh Dishevelled 3/DVL3 DVL3蛋白抗體 規(guī)格 0.2ml
Streptavidin/HRP 辣根過氧化物酶標記鏈霉親和素 0.1ml
LZIC 英文名稱: LZIC蛋白抗體 0.2ml
青霉素G檢測試劑盒 96孔/盒 動物組織/水產(chǎn)/蜂蜜/奶
Anti-CLEC2D/OCIL/FITC 熒光素標記CLEC2D蛋白抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格: 0.2ml
Rabbit Anti-mouse IgG/PE-Cy7 PE-Cy7標記的兔抗小鼠IgG 0.1ml
GLP 2 英文名稱: 腸高血糖素相關肽抗體 0.2ml
Rhesus antibody Rh Ankyrin erythroid 紅細胞蛋白Ank1抗體 規(guī)格 0.2ml
Anti-ILTV/FITC 熒光素標記抗雞傳染性喉氣管炎病毒抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格: 0.2ml
Rhesus antibody Rh Rabbit Anti-human IgG/AP 堿性磷酸酶(AP)標記的兔抗人IgG 規(guī)格 0.1ml
Anti-RNF126/FITC 熒光素標記環(huán)指蛋白126抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格: 0.2ml
Anti-phospho-Src(pTyr529)/FITC 熒光素標記抗磷酸化Src原癌基因抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格: 0.2ml
Mouse Anti-rat IgM 小鼠抗大鼠IgM (親和層析純化)Multi-class antibodies規(guī)格: 1mg
膠質細胞源性神經(jīng)營養(yǎng)因子抗體 Anti-GDNF 0.1ml
Donkey Anti-rabbit IgG/AP 堿性磷酸酶(AP)標記的驢抗兔IgG 0.1ml
Phospho-FAK (Tyr925) 英文名稱: 磷酸化粘著斑激酶抗體 0.1ml
Rhesus antibody Rh Phospho-Smad2(Thr220) 磷酸化細胞信號轉導分子SMAD2抗體 規(guī)格 0.1ml
Mouse Anti-rat IgM 小鼠抗大鼠IgM (親和層析純化)Multi-class antibodies規(guī)格: 1mg
懸浮細胞: 一般傳代可直接將細胞原液分置其它培養(yǎng)瓶內,加入*培養(yǎng)基繼續(xù)培養(yǎng),如要高濃度可先離心1000rpm,5min后加入*培養(yǎng)基,輕輕吹勻后,分置其它培養(yǎng)瓶內加入*培養(yǎng)基繼續(xù)培養(yǎng)。需要指出的是,在不同的科研小組中這些術語的定義會有所不同。許多研究員不用細胞系這個詞表示細胞群除非細胞經(jīng)過了遺傳改造。