詳細(xì)介紹
細(xì)胞名稱 大鼠肌肉成纖維樣細(xì)胞;RM1培養(yǎng)
形態(tài)特性 成纖維細(xì)胞樣
品牌 貼壁生長
特征特性 該細(xì)胞系來源于一大鼠的肌肉組織。2007年由中國科學(xué)院昆明細(xì)胞庫建立。
培養(yǎng)條件 RPMI 1640 (w/o Hepes) 15%FBS
傳代方法 1:
2傳代;3-4天一次
傳代情況 P4
凍存條件 基礎(chǔ)培養(yǎng)基+5%DMSO+20%FBS
支原體檢測 熒光法(-)
STR -
同工酶
染色體
使用權(quán)限 A類
大鼠肌肉成纖維樣細(xì)胞;RM1培養(yǎng)貼壁細(xì)胞: 對于貼壁細(xì)胞應(yīng)先吸(倒)盡培養(yǎng)基,吸的越干凈越好,以免中和后加入的消化液,使強度減弱(或PBS洗1-3次)。50ml培養(yǎng)瓶加入消化液約1-3ml,按此比例進行消化,(根據(jù)經(jīng)驗),晃動使消化液鋪均勻置37度培養(yǎng)箱約2-5分鐘,鏡下見細(xì)胞收縮變圓或少數(shù)脫落后,輕輕振動瓶底使細(xì)胞全部脫落,加入2-3ml*培養(yǎng)基后,輕輕吹打,使細(xì)胞基本成單個懸浮,然后分置其它無菌培養(yǎng)瓶內(nèi),加入*培養(yǎng)基后繼續(xù)培養(yǎng)或?qū)嶒灐?/span>
操作流程:
1.1 主要試劑與儀器:倒置相差顯微鏡(日本 olympus imt-413),co2孵箱(日本yamato it-61)。
1.2 hek-293細(xì)胞的復(fù)蘇培養(yǎng)傳代及凍存:
1.2.1 細(xì)胞的復(fù)蘇培養(yǎng) 從液氮罐中取出凍存管,立即投入37℃水浴,并不斷的搖動,使之迅速融化。 將溶解的細(xì)胞凍存管取出,用酒精消毒后打開,吸出溶有細(xì)胞的凍存液,加入事先裝好培養(yǎng)液(37℃預(yù)熱,8~10倍體積)離心管內(nèi),稍微吹打混勻,然后1000rpm 5min,去除上清,加入適量培養(yǎng)液,吹打成細(xì)胞懸液, 以1×105/ml密度接種于25cm2培養(yǎng)瓶內(nèi),在37℃、5%co2及飽和濕度下培養(yǎng)。
1.2.2 細(xì)胞傳代 原代培養(yǎng)的hek-293細(xì)胞48h換液1次,細(xì)胞長至60%~70%融合時,用0.25%胰酶消化1~2min,將培養(yǎng)瓶再用手掌輕輕敲打使細(xì)胞脫壁、懸浮、分散,為使細(xì)胞進一步分散可用吹打管輕輕吹打幾次,獲得細(xì)胞懸液,然后加入倍量的培養(yǎng)基,溫和混勻,吸管分裝混合液,傳代擴增細(xì)胞。
1.3 細(xì)胞形態(tài)的觀察 在倒置顯微鏡下觀察并記錄細(xì)胞的生長情況及形態(tài)特征。
1.4 細(xì)胞的計數(shù) 常規(guī)消化細(xì)胞,待細(xì)胞變圓、脫壁并浮起,加入少量培養(yǎng)基離心,再用pbs重懸并吹打制成細(xì)胞懸液。在細(xì)胞計數(shù)板蓋玻片的一側(cè)加微量細(xì)胞懸液,用10×物鏡觀察計數(shù)板四角大方格細(xì)胞數(shù),按公式計算出細(xì)胞數(shù)。細(xì)胞數(shù)/ml原液=(四方格細(xì)胞數(shù)之和/4) ×104。
1.5 細(xì)胞的貼壁率 指數(shù)生長期的細(xì)胞,以0.25%胰酶消化成單細(xì)胞懸液,計數(shù)后分別接種于12個25cm2培養(yǎng)瓶中,每兩小時隨機取出3瓶細(xì)胞,吸除培養(yǎng)基及未貼壁細(xì)胞,加入胰消化酶消化、計數(shù)已貼壁細(xì)胞,取其平均值,按照公式:貼壁率(%)=(已貼壁細(xì)胞數(shù)/接種細(xì)胞數(shù)) ×100%,計算貼壁率。
1.6 生長曲線 取指數(shù)生長期的細(xì)胞用胰酶消化制成單細(xì)胞懸液,以1×104/孔接種于24孔板,每孔加入1ml培養(yǎng)基。每天隨機取3孔,計數(shù)每孔細(xì)胞的數(shù)目并計算平均值。連續(xù)計數(shù)10d,繪制細(xì)胞生長曲線
Anti-Lectin/FITC 熒光素標(biāo)記抗凝集素抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格: 0.2ml
Anti-Snail/FITC 熒光素標(biāo)記抗Snail蛋白抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格: 0.2ml
Rhesus antibody Rh ALAD δ氨基乙酰丙酸脫水酶抗體 規(guī)格 0.2ml
Rabbit Anti-horse IgG/Cy5.5 Cy5.5標(biāo)記的兔抗馬IgG 0.1ml
GSK-3 Beta (CT) 英文名稱: 糖原合酶激酶-3β抗體 0.1ml
Rhesus antibody Rh Rabbit Anti-Guinea pig IgG/Alexa Fluor 647 Alexa Fluor 647標(biāo)記的兔抗豚鼠IgG 規(guī)格 0.1ml
Anti-Snail/FITC 熒光素標(biāo)記抗Snail蛋白抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格: 0.2ml
Lptn/LTN/XCL1 ELISA Kit 大鼠淋巴細(xì)胞趨化因子Multi-class antibodies規(guī)格: 48T
Anti-Phospho-Tyrosine Hydroxylase (Ser40) 磷酸化酪氨酸羥化酶抗體Multi-class antibodies規(guī)格: 0.1ml
Rhesus antibody Rh GDF8 生長分化因子8/肌肉抑制素抗體 規(guī)格 0.2ml
INH(Human Inhibin) ELISA Kit 人抑制素 96T
NIT1 英文名稱: 水解酶1抗體 0.2ml
Adenylate cyclase 1 英文名稱: 腺苷酸環(huán)化酶1抗體 0.2ml
Anti-Phospho-Tyrosine Hydroxylase (Ser40) 磷酸化酪氨酸羥化酶抗體Multi-class antibodies規(guī)格: 0.1ml
Rabbit anti-mouse Kappa light chain/Cy3 Cy3標(biāo)記的兔抗小鼠k鏈 0.1ml
GCDFP15 英文名稱: 特異性囊腫病液體蛋白15 0.2ml
Rhesus antibody Rh Anthrax 抗體(采用活疫苗制備) 規(guī)格 0.2ml
Anti-IL-20/FITC 熒光素標(biāo)記白細(xì)胞介素-20抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格: 0.2ml
Rhesus antibody Rh Rabbit Anti-human IgM/Alexa Fluor 488 Alexa Fluor 488標(biāo)記的兔抗人IgM 規(guī)格 0.1ml
Anti-RCC1/FITC 熒光素標(biāo)記染色體濃縮調(diào)控蛋白1抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格: 0.2ml
Anti-OMPC/OMPA/FITC 熒光素標(biāo)記抗大腸桿菌外膜孔道蛋白C抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格: 0.2ml
Anti-SIAH1/FITC 熒光素標(biāo)記泛素連接酶Siah1抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格: 0.2ml
Rhesus antibody Rh ASB8 含錨蛋白重復(fù)序列-細(xì)胞因子信號抑制物盒蛋白家族8抗體 規(guī)格 0.2ml
Donkey Anti-Goat IgG/PE-Cy3 PE-Cy3標(biāo)記的驢抗羊IgG 0.1ml
GLIPR1L1 英文名稱: 膠質(zhì)瘤發(fā)病相關(guān)蛋白1抗體 0.2ml
Rhesus antibody Rh Rabbit Anti-mouse IgG/Alexa Fluor 647 Alexa Fluor 647標(biāo)記的兔抗小鼠IgG 規(guī)格 0.1ml
Anti-SIAH1/FITC 熒光素標(biāo)記泛素連接酶Siah1抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格: 0.2ml
懸浮細(xì)胞: 一般傳代可直接將細(xì)胞原液分置其它培養(yǎng)瓶內(nèi),加入*培養(yǎng)基繼續(xù)培養(yǎng),如要高濃度可先離心1000rpm,5min后加入*培養(yǎng)基,輕輕吹勻后,分置其它培養(yǎng)瓶內(nèi)加入*培養(yǎng)基繼續(xù)培養(yǎng)。需要指出的是,在不同的科研小組中這些術(shù)語的定義會有所不同。許多研究員不用細(xì)胞系這個詞表示細(xì)胞群除非細(xì)胞經(jīng)過了遺傳改造。