詳細(xì)介紹
細(xì)胞名稱 正常大鼠腎細(xì)胞;NRK-52E培養(yǎng)
形態(tài)特性 上皮細(xì)胞
品牌 貼壁生長
特征特性
培養(yǎng)條件 DMEM-H:
Dulbecco's Modified Eagle's Medium (DME H-21 4.5g/Liter Glucose) 優(yōu)質(zhì)胎牛血清,5%
傳代方法 消化3-5分鐘。1:
2。3天內(nèi)可長滿。
傳代情況 P(16+5)
凍存條件 *培養(yǎng)基+8%DMSO
支原體檢測 陰性
STR
同工酶
染色體
使用權(quán)限 A類
正常大鼠腎細(xì)胞;NRK-52E培養(yǎng)貼壁細(xì)胞: 對于貼壁細(xì)胞應(yīng)先吸(倒)盡培養(yǎng)基,吸的越干凈越好,以免中和后加入的消化液,使強(qiáng)度減弱(或PBS洗1-3次)。50ml培養(yǎng)瓶加入消化液約1-3ml,按此比例進(jìn)行消化,(根據(jù)經(jīng)驗(yàn)),晃動使消化液鋪均勻置37度培養(yǎng)箱約2-5分鐘,鏡下見細(xì)胞收縮變圓或少數(shù)脫落后,輕輕振動瓶底使細(xì)胞全部脫落,加入2-3ml*培養(yǎng)基后,輕輕吹打,使細(xì)胞基本成單個(gè)懸浮,然后分置其它無菌培養(yǎng)瓶內(nèi),加入*培養(yǎng)基后繼續(xù)培養(yǎng)或?qū)嶒?yàn)。
操作流程:
1.1 主要試劑與儀器:倒置相差顯微鏡(日本 olympus imt-413),co2孵箱(日本yamato it-61)。
1.2 hek-293細(xì)胞的復(fù)蘇培養(yǎng)傳代及凍存:
1.2.1 細(xì)胞的復(fù)蘇培養(yǎng) 從液氮罐中取出凍存管,立即投入37℃水浴,并不斷的搖動,使之迅速融化。 將溶解的細(xì)胞凍存管取出,用酒精消毒后打開,吸出溶有細(xì)胞的凍存液,加入事先裝好培養(yǎng)液(37℃預(yù)熱,8~10倍體積)離心管內(nèi),稍微吹打混勻,然后1000rpm 5min,去除上清,加入適量培養(yǎng)液,吹打成細(xì)胞懸液, 以1×105/ml密度接種于25cm2培養(yǎng)瓶內(nèi),在37℃、5%co2及飽和濕度下培養(yǎng)。
1.2.2 細(xì)胞傳代 原代培養(yǎng)的hek-293細(xì)胞48h換液1次,細(xì)胞長至60%~70%融合時(shí),用0.25%胰酶消化1~2min,將培養(yǎng)瓶再用手掌輕輕敲打使細(xì)胞脫壁、懸浮、分散,為使細(xì)胞進(jìn)一步分散可用吹打管輕輕吹打幾次,獲得細(xì)胞懸液,然后加入倍量的培養(yǎng)基,溫和混勻,吸管分裝混合液,傳代擴(kuò)增細(xì)胞。
1.3 細(xì)胞形態(tài)的觀察 在倒置顯微鏡下觀察并記錄細(xì)胞的生長情況及形態(tài)特征。
1.4 細(xì)胞的計(jì)數(shù) 常規(guī)消化細(xì)胞,待細(xì)胞變圓、脫壁并浮起,加入少量培養(yǎng)基離心,再用pbs重懸并吹打制成細(xì)胞懸液。在細(xì)胞計(jì)數(shù)板蓋玻片的一側(cè)加微量細(xì)胞懸液,用10×物鏡觀察計(jì)數(shù)板四角大方格細(xì)胞數(shù),按公式計(jì)算出細(xì)胞數(shù)。細(xì)胞數(shù)/ml原液=(四方格細(xì)胞數(shù)之和/4) ×104。
1.5 細(xì)胞的貼壁率 指數(shù)生長期的細(xì)胞,以0.25%胰酶消化成單細(xì)胞懸液,計(jì)數(shù)后分別接種于12個(gè)25cm2培養(yǎng)瓶中,每兩小時(shí)隨機(jī)取出3瓶細(xì)胞,吸除培養(yǎng)基及未貼壁細(xì)胞,加入胰消化酶消化、計(jì)數(shù)已貼壁細(xì)胞,取其平均值,按照公式:貼壁率(%)=(已貼壁細(xì)胞數(shù)/接種細(xì)胞數(shù)) ×100%,計(jì)算貼壁率。
1.6 生長曲線 取指數(shù)生長期的細(xì)胞用胰酶消化制成單細(xì)胞懸液,以1×104/孔接種于24孔板,每孔加入1ml培養(yǎng)基。每天隨機(jī)取3孔,計(jì)數(shù)每孔細(xì)胞的數(shù)目并計(jì)算平均值。連續(xù)計(jì)數(shù)10d,繪制細(xì)胞生長曲線
Anti- Alpha-MSH/POMC /FITC 熒光素標(biāo)記α黑素細(xì)胞刺激素/阿黑皮素原抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格: 0.2ml
Anti-Tumstatin/Col4a3/FITC 熒光素標(biāo)記抑素抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格: 0.2ml
Rhesus antibody Rh 14-3-3(Alpha/Beta/Gamma/Delta/Epsilon) 14-3-3蛋白抗體 規(guī)格 0.1ml
Mouse Anti-rat IgG/Cy5 Cy5標(biāo)記的小鼠抗大鼠IgG 0.1ml
GRIK3 英文名稱: 谷酸受體紅藻酸離子3/谷酸受體7抗體 0.2ml
Rhesus antibody Rh PSMD10/Proteasome 26S S10 蛋白酶調(diào)解因子10抗體 規(guī)格 0.2ml
Anti-Tumstatin/Col4a3/FITC 熒光素標(biāo)記抑素抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格: 0.2ml
Lumbrokinase 蚯蚓纖溶酶(蚓激酶抗原)Multi-class antibodies規(guī)格: 0.5mg
Anti-SLAMF9 CD2F-10抗體Multi-class antibodies規(guī)格: 0.2ml
Rhesus antibody Rh PAI-1 纖溶酶原激活物抑制因子抗體 規(guī)格 0.1ml
CST7 Kit Human 人 Cystatin F / CST7 ELISA配對抗體 ELISA
Thymidylate synthase 英文名稱: 胸苷酸合成酶抗體 0.1ml
Cadherin 8 英文名稱: 鈣粘附蛋白8抗體 0.2ml
Anti-SLAMF9 CD2F-10抗體Multi-class antibodies規(guī)格: 0.2ml
Rabbit Anti-pig IgG/Gold 膠體金標(biāo)記的兔抗豬IgG 0.5ml
phospho-FANCD2(Ser1404) 英文名稱: 磷酸化FANCD2抗體 0.1ml
鼠抗人C-反應(yīng)蛋白單克隆抗體 Anti-C-CRP 0.2ml
Anti-phospho-P53 (Ser46) /FITC 熒光素標(biāo)記磷酸化抑制基因P53抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格: 0.2ml
Rhesus antibody Rh phospho-β catenin(Tyr142) 磷酸化β 連環(huán)素蛋白抗體 規(guī)格 0.1ml
Rabbit Anti-bov IgG/Biotin 生物素化兔抗IgGMulti-class antibodies規(guī)格: 0.1ml
Anti-phospho-PKC delta (Tyr52)/FITC 熒光素標(biāo)記磷酸化蛋白激酶C亞性D型抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格: 0.2ml
Donkey Anti-Goat IgG 驢抗羊IgG (親和層析純化)Multi-class antibodies規(guī)格: 1mg
鼠抗人乙型肝炎表面抗原抗體 Anti-HRCAg/HBV 0.1ml
Dog IgM/HRP 辣根過氧化物酶標(biāo)記的兔抗犬IgM抗體 0.1ml
FGFR1OP 英文名稱: FGFR1癌基因伴侶蛋白抗體 0.2ml
Rhesus antibody Rh Phospho-RSK2(Ser369) 磷酸化核糖體S6激酶RSK2抗體 規(guī)格 0.1ml
Donkey Anti-Goat IgG 驢抗羊IgG (親和層析純化)Multi-class antibodies規(guī)格: 1mg
懸浮細(xì)胞: 一般傳代可直接將細(xì)胞原液分置其它培養(yǎng)瓶內(nèi),加入*培養(yǎng)基繼續(xù)培養(yǎng),如要高濃度可先離心1000rpm,5min后加入*培養(yǎng)基,輕輕吹勻后,分置其它培養(yǎng)瓶內(nèi)加入*培養(yǎng)基繼續(xù)培養(yǎng)。需要指出的是,在不同的科研小組中這些術(shù)語的定義會有所不同。許多研究員不用細(xì)胞系這個(gè)詞表示細(xì)胞群除非細(xì)胞經(jīng)過了遺傳改造。