詳細(xì)介紹
產(chǎn)品名稱:人成骨細(xì)胞組織處理緩沖液
規(guī)格:100ml
操作流程:
1.1 主要試劑與儀器:倒置相差顯微鏡(日本 olympus imt-413),co2孵箱(日本yamato it-61)。
1.2 hek-293細(xì)胞的復(fù)蘇培養(yǎng)傳代及凍存:
1.2.1 細(xì)胞的復(fù)蘇培養(yǎng) 從液氮罐中取出凍存管,立即投入37℃水浴,并不斷的搖動(dòng),使之迅速融化。 將溶解的細(xì)胞凍存管取出,用酒精消毒后打開(kāi),吸出溶有細(xì)胞的凍存液,加入事先裝好培養(yǎng)液(37℃預(yù)熱,8~10倍體積)離心管內(nèi),稍微吹打混勻,然后1000rpm 5min,去除上清,加入適量培養(yǎng)液,吹打成細(xì)胞懸液, 以1×105/ml密度接種于25cm2培養(yǎng)瓶?jī)?nèi),在37℃、5%co2及飽和濕度下培養(yǎng)。
1.2.2 細(xì)胞傳代 原代培養(yǎng)的hek-293細(xì)胞48h換液1次,細(xì)胞長(zhǎng)至60%~70%融合時(shí),用0.25%胰酶消化1~2min,將培養(yǎng)瓶再用手掌輕輕敲打使細(xì)胞脫壁、懸浮、分散,為使細(xì)胞進(jìn)一步分散可用吹打管輕輕吹打幾次,獲得細(xì)胞懸液,然后加入倍量的培養(yǎng)基,溫和混勻,吸管分裝混合液,傳代擴(kuò)增細(xì)胞。
1.3 細(xì)胞形態(tài)的觀察 在倒置顯微鏡下觀察并記錄細(xì)胞的生長(zhǎng)情況及形態(tài)特征。
1.4 細(xì)胞的計(jì)數(shù) 常規(guī)消化細(xì)胞,待細(xì)胞變圓、脫壁并浮起,加入少量培養(yǎng)基離心,再用pbs重懸并吹打制成細(xì)胞懸液。在細(xì)胞計(jì)數(shù)板蓋玻片的一側(cè)加微量細(xì)胞懸液,用10×物鏡觀察計(jì)數(shù)板四角大方格細(xì)胞數(shù),按公式計(jì)算出細(xì)胞數(shù)。細(xì)胞數(shù)/ml原液=(四方格細(xì)胞數(shù)之和/4) ×104。
1.5 細(xì)胞的貼壁率 指數(shù)生長(zhǎng)期的細(xì)胞,以0.25%胰酶消化成單細(xì)胞懸液,計(jì)數(shù)后分別接種于12個(gè)25cm2培養(yǎng)瓶中,每?jī)尚r(shí)隨機(jī)取出3瓶細(xì)胞,吸除培養(yǎng)基及未貼壁細(xì)胞,加入胰消化酶消化、計(jì)數(shù)已貼壁細(xì)胞,取其平均值,按照公式:貼壁率(%)=(已貼壁細(xì)胞數(shù)/接種細(xì)胞數(shù)) ×100%,計(jì)算貼壁率。
1.6 生長(zhǎng)曲線 取指數(shù)生長(zhǎng)期的細(xì)胞用胰酶消化制成單細(xì)胞懸液,以1×104/孔接種于24孔板,每孔加入1ml培養(yǎng)基。每天隨機(jī)取3孔,計(jì)數(shù)每孔細(xì)胞的數(shù)目并計(jì)算平均值。連續(xù)計(jì)數(shù)10d,繪制細(xì)胞生長(zhǎng)曲線
Anti-phospho-Syndecan 4/FITC 熒光素標(biāo)記抗磷酸化多配體聚糖4抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格: 0.2ml
Anti-Phospho-RIP2 (Ser176) /FITC 熒光素標(biāo)記磷酸化受體結(jié)合絲氨酸蘇氨酸激酶2抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格: 0.2ml
Rhesus antibody Rh ALT1 谷丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶1抗體 規(guī)格 0.1ml
Rabbit Anti-human sIgA/Alexa Fluor 647 Alexa Fluor 647標(biāo)記的兔抗人分泌型IgA 0.1ml
GPRC5C 英文名稱: G蛋白偶聯(lián)受體GPRC5C蛋白抗體 0.2ml
Rhesus antibody Rh Rabbit Anti-Guinea pig IgM/RBITC 羅丹明標(biāo)記的兔抗豚鼠IgM 規(guī)格 0.3ml
Anti-Phospho-RIP2 (Ser176) /FITC 熒光素標(biāo)記磷酸化受體結(jié)合絲氨酸蘇氨酸激酶2抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格: 0.2ml
MAPKK1 (MAP kinase kinase 1) 原活化蛋白激酶激酶1抗原Multi-class antibodies規(guī)格: 0.5mg
人成骨細(xì)胞組織處理緩沖液Anti-Amphiphysin 神經(jīng)元突觸前膜蛋白抗體Multi-class antibodies規(guī)格: 0.2ml
Rhesus antibody Rh Phospho-BRCA1(Ser1423) 磷酸化癌易感基因1抗體 規(guī)格 0.1ml
Tris緩沖液 50ml 10mM pH 10.0
Phospho-VASP(Ser157) 英文名稱: 磷酸化血管擴(kuò)張刺激磷蛋白抗體 0.1ml
DBF4B 英文名稱: S期激酶活化蛋白DBF4B抗體 0.2ml
Anti-Amphiphysin 神經(jīng)元突觸前膜蛋白抗體Multi-class antibodies規(guī)格: 0.2ml
Rabbit Anti-rat IgM/Cy3 Cy3標(biāo)記的兔抗大鼠IgM 0.1ml
GADD34 英文名稱: 生長(zhǎng)抑制DNA損傷基因34抗體 0.1ml
Rhesus antibody Rh APOC4/Apolipoprotein CIV 載脂蛋白C4抗體 規(guī)格 0.2ml
Anti-IL-6/FITC 熒光素標(biāo)記白介素6抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格: 0.2ml
Rhesus antibody Rh Rabbit anti-MG IgG/Alexa Fluor 488 Alexa Fluor 488標(biāo)記的兔抗長(zhǎng)爪沙鼠IgG 規(guī)格 0.1ml
Anti-PSAP/PAP/FITC 熒光素標(biāo)記前列腺酸性磷酸酶抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格: 0.2ml
FGF-8/HBGF-8 (Fibroblast growth factor 8) 成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子-8/纖維母細(xì)胞生長(zhǎng)因子-8 (抗原)Multi-class antibodies規(guī)格: 0.5mg
Anti-Phospho-c-Kit (Tyr703) 磷酸化原癌基因c-kit抗體Multi-class antibodies規(guī)格: 0.1ml
Rhesus antibody Rh PASK/STK39 絲氨酸/蘇氨酸蛋白激酶39抗體 規(guī)格 0.2ml
DLL4 Kit Human 人 DLL4 ELISA配對(duì)抗體 ELISA
TLE4 英文名稱: B淋巴細(xì)胞基因1抗體 0.2ml
CK2 英文名稱: 細(xì)胞角蛋白2抗體 0.1ml
Anti-Phospho-c-Kit (Tyr703) 磷酸化原癌基因c-kit抗體Multi-class antibodies規(guī)格: 0.1ml
懸浮細(xì)胞: 一般傳代可直接將細(xì)胞原液分置其它培養(yǎng)瓶?jī)?nèi),加入*培養(yǎng)基繼續(xù)培養(yǎng),如要高濃度可先離心1000rpm,5min后加入*培養(yǎng)基,輕輕吹勻后,分置其它培養(yǎng)瓶?jī)?nèi)加入*培養(yǎng)基繼續(xù)培養(yǎng)。需要指出的是,在不同的科研小組中這些術(shù)語(yǔ)的定義會(huì)有所不同。許多研究員不用細(xì)胞系這個(gè)詞表示細(xì)胞群除非細(xì)胞經(jīng)過(guò)了遺傳改造。