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詳細(xì)介紹
小鼠胚胎成纖維細(xì)胞；3T3-L1價格懸浮細(xì)胞: 一般傳代可直接將細(xì)胞原液分置其它培養(yǎng)瓶內(nèi)，加入*培養(yǎng)基繼續(xù)培養(yǎng)，如要高濃度可先離心1000rpm，5min后加入*培養(yǎng)基，輕輕吹勻后，分置其它培養(yǎng)瓶內(nèi)加入*培養(yǎng)基繼續(xù)培養(yǎng)。需要指出的是，在不同的科研小組中這些術(shù)語的定義會有所不同。許多研究員不用細(xì)胞系這個詞表示細(xì)胞群除非細(xì)胞經(jīng)過了遺傳改造。
細(xì)胞名稱 小鼠胚胎成纖維細(xì)胞；3T3-L1價格
形態(tài)特性 成纖維細(xì)胞樣
品牌 貼壁生長
特征特性 3T3-L1是從3T3細(xì)胞（Swiss albino）中經(jīng)克隆分離得到的連續(xù)傳代的亞系。該細(xì)胞從快速分裂到匯合和接觸性抑制狀態(tài)經(jīng)歷了前脂肪細(xì)胞到脂肪樣細(xì)胞的轉(zhuǎn)變。該細(xì)胞鼠痘病毒陰性；可產(chǎn)生甘油三酯，高濃度血清可增強(qiáng)細(xì)胞內(nèi)脂肪堆積。
培養(yǎng)條件 DMEM-H：
Dulbecco's Modified Eagle's Medium (DME H-21 4.5g/Liter Glucose) 15%NBS
傳代方法 1：
3傳代；3-4天一次
傳代情況
貼壁細(xì)胞: 對于貼壁細(xì)胞應(yīng)先吸(倒)盡培養(yǎng)基，吸的越干凈越好，以免中和后加入的消化液，使強(qiáng)度減弱（或PBS洗1－3次）。50ml培養(yǎng)瓶加入消化液約1-3ml，按此比例進(jìn)行消化，(根據(jù)經(jīng)驗)，晃動使消化液鋪均勻置37度培養(yǎng)箱約2-5分鐘，鏡下見細(xì)胞收縮變圓或少數(shù)脫落后，輕輕振動瓶底使細(xì)胞全部脫落，加入2-3ml*培養(yǎng)基后，輕輕吹打，使細(xì)胞基本成單個懸浮，然后分置其它無菌培養(yǎng)瓶內(nèi)，加入*培養(yǎng)基后繼續(xù)培養(yǎng)或?qū)嶒灐?/span>
操作流程：
1.1 主要試劑與儀器：倒置相差顯微鏡（日本 olympus imt-413），co2孵箱（日本yamato it-61）。
1.2 hek-293細(xì)胞的復(fù)蘇培養(yǎng)傳代及凍存：
1.2.1 細(xì)胞的復(fù)蘇培養(yǎng) 從液氮罐中取出凍存管,立即投入37℃水浴,并不斷的搖動,使之迅速融化。 將溶解的細(xì)胞凍存管取出,用酒精消毒后打開,吸出溶有細(xì)胞的凍存液,加入事先裝好培養(yǎng)液（37℃預(yù)熱，8～10倍體積）離心管內(nèi),稍微吹打混勻,然后1000rpm 5min,去除上清,加入適量培養(yǎng)液,吹打成細(xì)胞懸液, 以1×105/ml密度接種于25cm2培養(yǎng)瓶內(nèi)，在37℃、5％co2及飽和濕度下培養(yǎng)。
1.2.2 細(xì)胞傳代 原代培養(yǎng)的hek－293細(xì)胞48h換液1次，細(xì)胞長至60%～70%融合時，用0.25%胰酶消化1～2min，將培養(yǎng)瓶再用手掌輕輕敲打使細(xì)胞脫壁、懸浮、分散，為使細(xì)胞進(jìn)一步分散可用吹打管輕輕吹打幾次，獲得細(xì)胞懸液，然后加入倍量的培養(yǎng)基，溫和混勻，吸管分裝混合液，傳代擴(kuò)增細(xì)胞。
1.3 細(xì)胞形態(tài)的觀察 在倒置顯微鏡下觀察并記錄細(xì)胞的生長情況及形態(tài)特征。
1.4 細(xì)胞的計數(shù) 常規(guī)消化細(xì)胞，待細(xì)胞變圓、脫壁并浮起，加入少量培養(yǎng)基離心，再用pbs重懸并吹打制成細(xì)胞懸液。在細(xì)胞計數(shù)板蓋玻片的一側(cè)加微量細(xì)胞懸液，用10×物鏡觀察計數(shù)板四角大方格細(xì)胞數(shù)，按公式計算出細(xì)胞數(shù)。細(xì)胞數(shù)/ml原液＝(四方格細(xì)胞數(shù)之和/4) ×104。
1.5 細(xì)胞的貼壁率 指數(shù)生長期的細(xì)胞，以0.25％胰酶消化成單細(xì)胞懸液，計數(shù)后分別接種于12個25cm2培養(yǎng)瓶中，每兩小時隨機(jī)取出3瓶細(xì)胞，吸除培養(yǎng)基及未貼壁細(xì)胞，加入胰消化酶消化、計數(shù)已貼壁細(xì)胞，取其平均值，按照公式：貼壁率(%)=(已貼壁細(xì)胞數(shù)/接種細(xì)胞數(shù)) ×100％，計算貼壁率。
1.6 生長曲線 取指數(shù)生長期的細(xì)胞用胰酶消化制成單細(xì)胞懸液，以1×104/孔接種于24孔板，每孔加入1ml培養(yǎng)基。每天隨機(jī)取3孔，計數(shù)每孔細(xì)胞的數(shù)目并計算平均值。連續(xù)計數(shù)10d，繪制細(xì)胞生長曲線
Anti-p-NFATc2/FITC 熒光素標(biāo)記磷酸化NFATc2抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格： 0.2ml
Anti-Visfatin-2(CT)/FITC 熒光素標(biāo)記內(nèi)脂素/內(nèi)臟脂肪素(C端抗體)IgGMulti-class antibodies規(guī)格： 0.2ml
激活素受體2B/激活素受體相互作用蛋白2b抗體 anti-ARIP2B 0.2ml
Goat Anti-human IgM/Alexa Fluor 350 Alexa Fluor 350標(biāo)記的羊抗人IgM 0.1ml
GPR110 protein 英文名稱： G蛋白偶聯(lián)受體GPR110蛋白抗體 0.2ml
Rhesus antibody Rh presenilin 1/PS-1 (CT) 早老素蛋白-1抗體 規(guī)格 0.1ml
Anti-Visfatin-2(CT)/FITC 熒光素標(biāo)記內(nèi)脂素/內(nèi)臟脂肪素(C端抗體)IgGMulti-class antibodies規(guī)格： 0.2ml
mIgA(Human membrane IgA) ELISA Kit 人表面膜免疫球蛋白AMulti-class antibodies規(guī)格： 48T
Anti-phospho-c-Raf (Ser338) 磷酸化原癌基因c-Raf抗體Multi-class antibodies規(guī)格： 0.1ml
Rhesus antibody Rh HA tag(12CA5) HA tag標(biāo)簽單克隆抗體 規(guī)格 0.1ml
ALT/GPT(Human Alanine Aminotransferase) ELISA Kit 人丙酸轉(zhuǎn)酶/谷丙轉(zhuǎn)酶 96T
protein C Activation peptide 英文名稱： 0.2ml
BTBD7 英文名稱： BTB/POZ結(jié)構(gòu)域蛋白7抗體 0.2ml
Anti-phospho-c-Raf (Ser338) 磷酸化原癌基因c-Raf抗體Multi-class antibodies規(guī)格： 0.1ml
rec Protein G/HRP 辣根過氧化物酶標(biāo)記的重組蛋白G 0.1ml
phospho-LATS1+LATS2 (Thr1079 +Thr1041) 英文名稱： 磷酸化抑制基因LATS1/LATS2抗體 0.1ml
Rhesus antibody Rh DIAPH1 耳聾常染色體顯性遺傳相關(guān)蛋白1抗體 規(guī)格 0.2ml
Amylin(Mouse Amylin) ELISA Kit 小鼠胰淀素Multi-class antibodies規(guī)格： 48T
新霉素檢測試劑盒 96孔/盒 動物組織/水產(chǎn)/蜂蜜/奶
Anti-C-Met/HGFR /FITC 熒光素標(biāo)記肝細(xì)胞生長因子受體(原癌基因蛋白)抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格： 0.2ml
C3bR(Human Complement fragment 3b rccptor) ELISA Kit 人補(bǔ)體片段3b受體Multi-class antibodies規(guī)格： 48T
Anti-Phospho-Rad17 (Ser645) 磷酸化細(xì)胞周期檢控Rad17蛋白抗體Multi-class antibodies規(guī)格： 0.1ml
Rhesus antibody Rh HARS 組氨酸t(yī)RNA連接酶抗體 規(guī)格 0.2ml
Cyclin-D3 ELISA Kit 大鼠細(xì)胞周期素D3 96T
phospho-p38 MAPK (Thr180 + Tyr182) 英文名稱： 磷酸化原活化蛋白激酶p38抗體 0.1ml
BNIP3 英文名稱： 促凋亡調(diào)節(jié)蛋白BNIP3抗體 0.1ml
Anti-Phospho-Rad17 (Ser645) 磷酸化細(xì)胞周期檢控Rad17蛋白抗體Multi-class antibodies規(guī)格： 0.1ml
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