詳細介紹
細胞名稱 小鼠雜交瘤細胞株;JF-IgD培養(yǎng)
形態(tài)特性 淋巴母細胞樣
品牌 懸浮生長
特征特性 該細胞屬專利保藏,其特征特性尚未公開。
培養(yǎng)條件 MEM-EBSS:
Minimum Essential Medium (MEM Eagles with Earle's Balanced Salts) 10%FBS
傳代方法 1:
3傳代,3-4天傳1次
傳代情況 C5
凍存條件 基礎培養(yǎng)基+5%DMSO+20%FBS
支原體檢測 陰性
STR
同工酶
染色體
使用權限 未定
小鼠雜交瘤細胞株;JF-IgD培養(yǎng)操作流程:
1.1 主要試劑與儀器:倒置相差顯微鏡(日本 olympus imt-413),co2孵箱(日本yamato it-61)。
1.2 hek-293細胞的復蘇培養(yǎng)傳代及凍存:
1.2.1 細胞的復蘇培養(yǎng) 從液氮罐中取出凍存管,立即投入37℃水浴,并不斷的搖動,使之迅速融化。 將溶解的細胞凍存管取出,用酒精消毒后打開,吸出溶有細胞的凍存液,加入事先裝好培養(yǎng)液(37℃預熱,8~10倍體積)離心管內,稍微吹打混勻,然后1000rpm 5min,去除上清,加入適量培養(yǎng)液,吹打成細胞懸液, 以1×105/ml密度接種于25cm2培養(yǎng)瓶內,在37℃、5%co2及飽和濕度下培養(yǎng)。
1.2.2 細胞傳代 原代培養(yǎng)的hek-293細胞48h換液1次,細胞長至60%~70%融合時,用0.25%胰酶消化1~2min,將培養(yǎng)瓶再用手掌輕輕敲打使細胞脫壁、懸浮、分散,為使細胞進一步分散可用吹打管輕輕吹打幾次,獲得細胞懸液,然后加入倍量的培養(yǎng)基,溫和混勻,吸管分裝混合液,傳代擴增細胞。
1.3 細胞形態(tài)的觀察 在倒置顯微鏡下觀察并記錄細胞的生長情況及形態(tài)特征。
1.4 細胞的計數 常規(guī)消化細胞,待細胞變圓、脫壁并浮起,加入少量培養(yǎng)基離心,再用pbs重懸并吹打制成細胞懸液。在細胞計數板蓋玻片的一側加微量細胞懸液,用10×物鏡觀察計數板四角大方格細胞數,按公式計算出細胞數。細胞數/ml原液=(四方格細胞數之和/4) ×104。
1.5 細胞的貼壁率 指數生長期的細胞,以0.25%胰酶消化成單細胞懸液,計數后分別接種于12個25cm2培養(yǎng)瓶中,每兩小時隨機取出3瓶細胞,吸除培養(yǎng)基及未貼壁細胞,加入胰消化酶消化、計數已貼壁細胞,取其平均值,按照公式:貼壁率(%)=(已貼壁細胞數/接種細胞數) ×100%,計算貼壁率。
1.6 生長曲線 取指數生長期的細胞用胰酶消化制成單細胞懸液,以1×104/孔接種于24孔板,每孔加入1ml培養(yǎng)基。每天隨機取3孔,計數每孔細胞的數目并計算平均值。連續(xù)計數10d,繪制細胞生長曲線
貼壁細胞: 對于貼壁細胞應先吸(倒)盡培養(yǎng)基,吸的越干凈越好,以免中和后加入的消化液,使強度減弱(或PBS洗1-3次)。50ml培養(yǎng)瓶加入消化液約1-3ml,按此比例進行消化,(根據經驗),晃動使消化液鋪均勻置37度培養(yǎng)箱約2-5分鐘,鏡下見細胞收縮變圓或少數脫落后,輕輕振動瓶底使細胞全部脫落,加入2-3ml*培養(yǎng)基后,輕輕吹打,使細胞基本成單個懸浮,然后分置其它無菌培養(yǎng)瓶內,加入*培養(yǎng)基后繼續(xù)培養(yǎng)或實驗。
懸浮細胞: 一般傳代可直接將細胞原液分置其它培養(yǎng)瓶內,加入*培養(yǎng)基繼續(xù)培養(yǎng),如要高濃度可先離心1000rpm,5min后加入*培養(yǎng)基,輕輕吹勻后,分置其它培養(yǎng)瓶內加入*培養(yǎng)基繼續(xù)培養(yǎng)。需要指出的是,在不同的科研小組中這些術語的定義會有所不同。許多研究員不用細胞系這個詞表示細胞群除非細胞經過了遺傳改造。
Anti-Phospho-HER2(Tyr1221/1222)/FITC 熒光素標記磷酸化HER2受體抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格: 0.2ml
Anti-P-fscn1/FITC 熒光素標記磷酸化纖維束蛋白同源物1/肌動蛋白集束蛋白/圓線蟲紫癜 抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格: 0.2ml
Rhesus antibody Rh AXUD1 轉化生長因子β誘導蛋白3抗體(半胱氨酸和絲氨酸富含核蛋白1) 規(guī)格 0.2ml
rDen-2(rh-Dengue Virus) 重組人登革熱病毒2型診斷抗原 100ug
Gli3 英文名稱: 轉錄因子Gli3抗體 0.2ml
Rhesus antibody Rh Rabbit Anti-pig IgG 兔抗豬IgG 規(guī)格 1mg
Anti-P-fscn1/FITC 熒光素標記磷酸化纖維束蛋白同源物1/肌動蛋白集束蛋白/圓線蟲紫癜 抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格: 0.2ml
NAIP(Human neuronal apoptosis inhibitory protein) ELISA Kit 人神經元凋亡抑制蛋白Multi-class antibodies規(guī)格: 48T
Anti-Influenza A Virus Hemagglutinin 甲型流感病毒血凝素抗體Multi-class antibodies規(guī)格: 0.1ml
Rhesus antibody Rh MMP-1 基質金屬蛋白酶-1抗體 規(guī)格 0.1ml
PKB(Human protein kinase B) ELISA Kit 人蛋白激酶B 96T
phospho-RGS19(Ser151) 英文名稱: 磷酸化G蛋白信號轉導調節(jié)因子19抗體 0.1ml
CXCL16 英文名稱: CXC趨化因子16抗體 0.1ml
Anti-Influenza A Virus Hemagglutinin 甲型流感病毒血凝素抗體Multi-class antibodies規(guī)格: 0.1ml
SEMA4B 英文名稱: 跨膜蛋白SEMA4B抗體 0.2ml
E2F1 英文名稱: 轉錄因子E2F-1抗體 0.1ml
碳酸酐酶2抗體 Anti-CA Ⅱ 0.1ml
Anti-TNK1/FITC 熒光素標記非受體型酪氨酸蛋白激酶Tnk1抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格: 0.2ml
Rhesus antibody Rh phospho-HSF1(Ser307) 磷酸化熱休克因子1抗體 規(guī)格 0.1ml
CCL4/MIP-1 Beta(Macrophage Inflammatory Protein 1 beta) 巨噬細胞炎性蛋白1β抗原Multi-class antibodies規(guī)格: 0.5mg
CNTF(Human Ciliary Neurotrophic Factor) ELISA Kit 人睫狀神經營養(yǎng)因子Multi-class antibodies規(guī)格: 48T
Anti-phospho-GSK3 Alpha/Beta(Tyr279+Tyr216) 磷酸化葡萄糖合成激酶3α/β抗體Multi-class antibodies規(guī)格: 0.1ml
Rhesus antibody Rh MMP20 基質金屬蛋白酶20 規(guī)格 0.2ml
CK-MB(Human Creatine Kinase MB isoenzyme) ELISA Kit 人肌酸激酶同工酶MB 96T
RAB23 英文名稱: G蛋白偶聯受體RAB23抗體 0.2ml
phospho-CDKN1B (Thr187) 英文名稱: 磷酸化P27抗體/周期素依賴激酶抑制劑抗體 0.1ml
Anti-phospho-GSK3 Alpha/Beta(Tyr279+Tyr216) 磷酸化葡萄糖合成激酶3α/β抗體Multi-class antibodies規(guī)格: 0.1ml