詳細(xì)介紹
細(xì)胞名稱 人腎透明細(xì)胞癌細(xì)胞;LoMet-ccRCC培養(yǎng)
形態(tài)特性 上皮細(xì)胞樣
品牌 貼壁生長
特征特性 該細(xì)胞屬專利保藏,其特征特性尚未公開。
培養(yǎng)條件 MEM-EBSS:
Minimum Essential Medium (MEM Eagles with Earle's Balanced Salts) 10%FBS
傳代方法 1:
3傳代,3-4天傳1次
傳代情況 C2
凍存條件 基礎(chǔ)培養(yǎng)基+5%DMSO+20%FBS
支原體檢測 陰性
STR
同工酶
染色體
使用權(quán)限 未定
人腎透明細(xì)胞癌細(xì)胞;LoMet-ccRCC培養(yǎng)貼壁細(xì)胞: 對于貼壁細(xì)胞應(yīng)先吸(倒)盡培養(yǎng)基,吸的越干凈越好,以免中和后加入的消化液,使強度減弱(或PBS洗1-3次)。50ml培養(yǎng)瓶加入消化液約1-3ml,按此比例進行消化,(根據(jù)經(jīng)驗),晃動使消化液鋪均勻置37度培養(yǎng)箱約2-5分鐘,鏡下見細(xì)胞收縮變圓或少數(shù)脫落后,輕輕振動瓶底使細(xì)胞全部脫落,加入2-3ml*培養(yǎng)基后,輕輕吹打,使細(xì)胞基本成單個懸浮,然后分置其它無菌培養(yǎng)瓶內(nèi),加入*培養(yǎng)基后繼續(xù)培養(yǎng)或?qū)嶒灐?/span>
操作流程:
1.1 主要試劑與儀器:倒置相差顯微鏡(日本 olympus imt-413),co2孵箱(日本yamato it-61)。
1.2 hek-293細(xì)胞的復(fù)蘇培養(yǎng)傳代及凍存:
1.2.1 細(xì)胞的復(fù)蘇培養(yǎng) 從液氮罐中取出凍存管,立即投入37℃水浴,并不斷的搖動,使之迅速融化。 將溶解的細(xì)胞凍存管取出,用酒精消毒后打開,吸出溶有細(xì)胞的凍存液,加入事先裝好培養(yǎng)液(37℃預(yù)熱,8~10倍體積)離心管內(nèi),稍微吹打混勻,然后1000rpm 5min,去除上清,加入適量培養(yǎng)液,吹打成細(xì)胞懸液, 以1×105/ml密度接種于25cm2培養(yǎng)瓶內(nèi),在37℃、5%co2及飽和濕度下培養(yǎng)。
1.2.2 細(xì)胞傳代 原代培養(yǎng)的hek-293細(xì)胞48h換液1次,細(xì)胞長至60%~70%融合時,用0.25%胰酶消化1~2min,將培養(yǎng)瓶再用手掌輕輕敲打使細(xì)胞脫壁、懸浮、分散,為使細(xì)胞進一步分散可用吹打管輕輕吹打幾次,獲得細(xì)胞懸液,然后加入倍量的培養(yǎng)基,溫和混勻,吸管分裝混合液,傳代擴增細(xì)胞。
1.3 細(xì)胞形態(tài)的觀察 在倒置顯微鏡下觀察并記錄細(xì)胞的生長情況及形態(tài)特征。
1.4 細(xì)胞的計數(shù) 常規(guī)消化細(xì)胞,待細(xì)胞變圓、脫壁并浮起,加入少量培養(yǎng)基離心,再用pbs重懸并吹打制成細(xì)胞懸液。在細(xì)胞計數(shù)板蓋玻片的一側(cè)加微量細(xì)胞懸液,用10×物鏡觀察計數(shù)板四角大方格細(xì)胞數(shù),按公式計算出細(xì)胞數(shù)。細(xì)胞數(shù)/ml原液=(四方格細(xì)胞數(shù)之和/4) ×104。
1.5 細(xì)胞的貼壁率 指數(shù)生長期的細(xì)胞,以0.25%胰酶消化成單細(xì)胞懸液,計數(shù)后分別接種于12個25cm2培養(yǎng)瓶中,每兩小時隨機取出3瓶細(xì)胞,吸除培養(yǎng)基及未貼壁細(xì)胞,加入胰消化酶消化、計數(shù)已貼壁細(xì)胞,取其平均值,按照公式:貼壁率(%)=(已貼壁細(xì)胞數(shù)/接種細(xì)胞數(shù)) ×100%,計算貼壁率。
1.6 生長曲線 取指數(shù)生長期的細(xì)胞用胰酶消化制成單細(xì)胞懸液,以1×104/孔接種于24孔板,每孔加入1ml培養(yǎng)基。每天隨機取3孔,計數(shù)每孔細(xì)胞的數(shù)目并計算平均值。連續(xù)計數(shù)10d,繪制細(xì)胞生長曲線
Anti-NK-2R/FITC 熒光素標(biāo)記神經(jīng)激肽A受體/K物質(zhì)受體抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格: 0.2ml
Anti-WNK4/FITC 熒光素標(biāo)記一種新的絲氨酸/蘇氨酸激酶家族成員的基因WNK4抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格: 0.2ml
BH3結(jié)構(gòu)域凋亡誘導(dǎo)蛋白抗體 Anti-Bid 0.1ml
Goat Anti-Chicken IgG/Gold 膠體金標(biāo)記的羊抗雞IgG 0.5ml
FABP12 英文名稱: 脂肪酸結(jié)合蛋白12抗體 0.2ml
Rhesus antibody Rh PPIL1 親環(huán)素相關(guān)蛋白1抗體 規(guī)格 0.2ml
Anti-WNK4/FITC 熒光素標(biāo)記一種新的絲氨酸/蘇氨酸激酶家族成員的基因WNK4抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格: 0.2ml
SLC4A4(solute carrier family 4:sodium bicaonate cotransporter NBC1) 碳酸氫鈉協(xié)同轉(zhuǎn)運蛋白4-A4Multi-class antibodies規(guī)格: 0.5mg
Anti-phospho-Bim(Ser69) 磷酸化細(xì)胞死亡調(diào)解子抗體Multi-class antibodies規(guī)格: 0.1ml
Rhesus antibody Rh PGCP 血漿谷氨酸羧肽酶抗體 規(guī)格 0.2ml
F.VIII/ VWF 濃縮液 0.1ml 進口分裝
TNFRSF13B 英文名稱: 壞死因子受體超家族成員13B抗體 0.2ml
C1orf157 英文名稱: 1號染色體開放閱讀框57抗體 0.2ml
Anti-phospho-Bim(Ser69) 磷酸化細(xì)胞死亡調(diào)解子抗體Multi-class antibodies規(guī)格: 0.1ml
Tris- HCl-TWEEN 20緩沖液 100ml 0.5mol/L pH7.6
VEGF-B 英文名稱: 血管內(nèi)皮生長因子B抗體 0.1ml
Rhesus antibody Rh phospho-B-Raf (Ser444) 磷酸化B-Raf抗體 規(guī)格 0.1ml
Mcl-1(myeloid cell leukemia 1) peptide 髓樣細(xì)胞白血病-1抗原Multi-class antibodies規(guī)格: 0.5mg
DUOX2 英文名稱: 雙氧化酶2/甲狀腺氧化酶2抗體 0.2ml
Anti-phospho-AMPK beta 1(Ser182) 磷酸化腺苷單磷酸活化蛋白激酶β1抗體Multi-class antibodies規(guī)格: 0.1ml
LAM(Human Lipoarabinomannan) ELISA Kit 人脂阿拉伯甘露聚糖Multi-class antibodies規(guī)格: 48T
Anti-PDGF Receptor alpha/PDGF-R-A 血小板源性生長因子受體-A抗體Multi-class antibodies規(guī)格: 0.1ml
Rhesus antibody Rh HMGA1/HMG-I/HMG-Y 高遷移率族蛋白A1抗體 規(guī)格 0.2ml
Apo A1(Human anti-apolipoprotein A1 antibody) ELISA Kit 人抗載脂蛋白抗體A1 96T
PDHX 英文名稱: 酸脫氫酶復(fù)合物X蛋白抗體 0.2ml
C1orf2 英文名稱: 1號染色體開放閱讀框2抗體 0.2ml
Anti-PDGF Receptor alpha/PDGF-R-A 血小板源性生長因子受體-A抗體Multi-class antibodies規(guī)格: 0.1ml
懸浮細(xì)胞: 一般傳代可直接將細(xì)胞原液分置其它培養(yǎng)瓶內(nèi),加入*培養(yǎng)基繼續(xù)培養(yǎng),如要高濃度可先離心1000rpm,5min后加入*培養(yǎng)基,輕輕吹勻后,分置其它培養(yǎng)瓶內(nèi)加入*培養(yǎng)基繼續(xù)培養(yǎng)。需要指出的是,在不同的科研小組中這些術(shù)語的定義會有所不同。許多研究員不用細(xì)胞系這個詞表示細(xì)胞群除非細(xì)胞經(jīng)過了遺傳改造。
3傳代,3-4天傳1次
傳代情況 C4
凍存條件 基礎(chǔ)培養(yǎng)基+5%DMSO+20%FBS
支原體檢測 陰性
STR
同工酶
染色體
使用權(quán)限 未定
人膀胱癌細(xì)胞;H/RB-CL2培養(yǎng)操作流程:
1.1 主要試劑與儀器:倒置相差顯微鏡(日本 olympus imt-413),co2孵箱(日本yamato it-61)。
1.2 hek-293細(xì)胞的復(fù)蘇培養(yǎng)傳代及凍存:
1.2.1 細(xì)胞的復(fù)蘇培養(yǎng) 從液氮罐中取出凍存管,立即投入37℃水浴,并不斷的搖動,使之迅速融化。 將溶解的細(xì)胞凍存管取出,用酒精消毒后打開,吸出溶有細(xì)胞的凍存液,加入事先裝好培養(yǎng)液(37℃預(yù)熱,8~10倍體積)離心管內(nèi),稍微吹打混勻,然后1000rpm 5min,去除上清,加入適量培養(yǎng)液,吹打成細(xì)胞懸液, 以1×105/ml密度接種于25cm2培養(yǎng)瓶內(nèi),在37℃、5%co2及飽和濕度下培養(yǎng)。
1.2.2 細(xì)胞傳代 原代培養(yǎng)的hek-293細(xì)胞48h換液1次,細(xì)胞長至60%~70%融合時,用0.25%胰酶消化1~2min,將培養(yǎng)瓶再用手掌輕輕敲打使細(xì)胞脫壁、懸浮、分散,為使細(xì)胞進一步分散可用吹打管輕輕吹打幾次,獲得細(xì)胞懸液,然后加入倍量的培養(yǎng)基,溫和混勻,吸管分裝混合液,傳代擴增細(xì)胞。
1.3 細(xì)胞形態(tài)的觀察 在倒置顯微鏡下觀察并記錄細(xì)胞的生長情況及形態(tài)特征。
1.4 細(xì)胞的計數(shù) 常規(guī)消化細(xì)胞,待細(xì)胞變圓、脫壁并浮起,加入少量培養(yǎng)基離心,再用pbs重懸并吹打制成細(xì)胞懸液。在細(xì)胞計數(shù)板蓋玻片的一側(cè)加微量細(xì)胞懸液,用10×物鏡觀察計數(shù)板四角大方格細(xì)胞數(shù),按公式計算出細(xì)胞數(shù)。細(xì)胞數(shù)/ml原液=(四方格細(xì)胞數(shù)之和/4) ×104。
1.5 細(xì)胞的貼壁率 指數(shù)生長期的細(xì)胞,以0.25%胰酶消化成單細(xì)胞懸液,計數(shù)后分別接種于12個25cm2培養(yǎng)瓶中,每兩小時隨機取出3瓶細(xì)胞,吸除培養(yǎng)基及未貼壁細(xì)胞,加入胰消化酶消化、計數(shù)已貼壁細(xì)胞,取其平均值,按照公式:貼壁率(%)=(已貼壁細(xì)胞數(shù)/接種細(xì)胞數(shù)) ×100%,計算貼壁率。
1.6 生長曲線 取指數(shù)生長期的細(xì)胞用胰酶消化制成單細(xì)胞懸液,以1×104/孔接種于24孔板,每孔加入1ml培養(yǎng)基。每天隨機取3孔,計數(shù)每孔細(xì)胞的數(shù)目并計算平均值。連續(xù)計數(shù)10d,繪制細(xì)胞生長曲線
人膀胱癌細(xì)胞;H/RB-CL2培養(yǎng)貼壁細(xì)胞: 對于貼壁細(xì)胞應(yīng)先吸(倒)盡培養(yǎng)基,吸的越干凈越好,以免中和后加入的消化液,使強度減弱(或PBS洗1-3次)。50ml培養(yǎng)瓶加入消化液約1-3ml,按此比例進行消化,(根據(jù)經(jīng)驗),晃動使消化液鋪均勻置37度培養(yǎng)箱約2-5分鐘,鏡下見細(xì)胞收縮變圓或少數(shù)脫落后,輕輕振動瓶底使細(xì)胞全部脫落,加入2-3ml*培養(yǎng)基后,輕輕吹打,使細(xì)胞基本成單個懸浮,然后分置其它無菌培養(yǎng)瓶內(nèi),加入*培養(yǎng)基后繼續(xù)培養(yǎng)或?qū)嶒灐?/span>
人膀胱癌細(xì)胞;H/RB-CL2培養(yǎng)懸浮細(xì)胞: 一般傳代可直接將細(xì)胞原液分置其它培養(yǎng)瓶內(nèi),加入*培養(yǎng)基繼續(xù)培養(yǎng),如要高濃度可先離心1000rpm,5min后加入*培養(yǎng)基,輕輕吹勻后,分置其它培養(yǎng)瓶內(nèi)加入*培養(yǎng)基繼續(xù)培養(yǎng)。需要指出的是,在不同的科研小組中這些術(shù)語的定義會有所不同。許多研究員不用細(xì)胞系這個詞表示細(xì)胞群除非細(xì)胞經(jīng)過了遺傳改造。
Anti-Tbx21/T-bet/FITC 熒光素標(biāo)記T細(xì)胞介導(dǎo)的轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)因子Tbx21抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格: 0.2ml
M2-PK ( pyruvate Kinase M2 ) 丙酮酸激酶-M2(抗原)Multi-class antibodies規(guī)格: 0.5mg
造血細(xì)胞磷酸酶抗體 Anti-SHP-1 0.2ml
phospho-STAT3 (Tyr705) 英文名稱: 磷酸化信號轉(zhuǎn)導(dǎo)和轉(zhuǎn)錄激活因子3抗體 0.1ml
EYA2 英文名稱: 眼睛發(fā)育缺失蛋白EYA2抗體 0.2ml
Rhesus antibody Rh phospho-M-CSF Receptor(Tyr708) 磷酸化巨噬細(xì)胞集落刺激因子受體抗體 規(guī)格 0.1ml
M2-PK ( pyruvate Kinase M2 ) 丙酮酸激酶-M2(抗原)Multi-class antibodies規(guī)格: 0.5mg
sm Actinin- Alpha(Mouse skeletal muscle Actinin- Alpha) ELISA Kit 小鼠橫紋肌輔肌動蛋白αMulti-class antibodies規(guī)格: 48T
Anti-Phospho-cdc25C (Ser216) /FITC 熒光素標(biāo)記兔抗人、大、小鼠磷酸化細(xì)胞分裂周期蛋白25抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格: 0.2ml
Rhesus antibody Rh Donkey Anti-Guinea pig IgG/PE PE標(biāo)記的驢抗豚鼠IgG 規(guī)格 0.1ml
Mouse Beta-Defensins, Beta-DF ELISA Kit 小鼠β-防御素 96T
MrpL39 英文名稱: 線粒體核糖體蛋白L39 0.1ml
AKAP5 英文名稱: A激酶錨定蛋白5抗體 0.2ml
Anti-Phospho-cdc25C (Ser216) /FITC 熒光素標(biāo)記兔抗人、大、小鼠磷酸化細(xì)胞分裂周期蛋白25抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格: 0.2ml
Trk B 神經(jīng)生長因子受體的一種(抗原) 0.5mg
phospho-HMGCR(Ser872) 英文名稱: 磷酸化三羥基*基輔酶A還原酶抗體 0.1ml
Rhesus antibody Rh C20orf160 20號染色體開放閱讀框160抗體 規(guī)格 0.2ml
Anti-EP3/FITC 熒光素標(biāo)記前列腺素E受體3抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格: 0.2ml
Rhesus antibody Rh S100A13 S100A13抗體 規(guī)格 0.1ml
Anti-HSD11B2/HSD2 /FITC 熒光素標(biāo)記羥基類固醇脫氫酶11β2抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格: 0.2ml
人膀胱癌細(xì)胞;H/RB-CL2培養(yǎng)OxLDL ELISA Kit 大鼠氧化低密度脂蛋白Multi-class antibodies規(guī)格: 48T
Anti-Adipo R1/FITC 熒光素標(biāo)記脂聯(lián)素受體-1蛋白抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格: 0.2ml
Rhesus antibody Rh FEZ1 腦胚胎鋅指樣蛋白1抗體 規(guī)格 0.2ml
APC ELISA Kit 大鼠活化蛋白C 96T
Phospho-Met (c-Met) (Tyr1003) 英文名稱: 磷酸化肝細(xì)胞生長因子受體(原癌基因)抗體 0.1ml
ARRDC2 英文名稱: 抑制蛋白結(jié)構(gòu)域蛋白2抗體 0.2ml
Anti-Adipo R1/FITC 熒光素標(biāo)記脂聯(lián)素受體-1蛋白抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格: 0.2ml