詳細(xì)介紹
細(xì)胞名稱 人前列腺癌細(xì)胞;2B4培養(yǎng)
形態(tài)特性 上皮細(xì)胞樣
品牌 貼壁生長
特征特性 該細(xì)胞是一株人前列腺癌細(xì)胞系,可用于人前列腺癌細(xì)的基礎(chǔ)和臨床研究。
培養(yǎng)條件 DMEM-H:
Dulbecco's Modified Eagle's Medium (DME H-21 4.5g/Liter Glucose) 10%FBS
傳代方法 1:
3傳代,2-3天傳一代
傳代情況 C6
凍存條件 基礎(chǔ)培養(yǎng)基+5%DMSO+20%FBS
支原體檢測 陰性
STR
同工酶 同工酶鑒定
染色體
使用權(quán)限 A類
人前列腺癌細(xì)胞;2B4培養(yǎng)操作流程:
1.1 主要試劑與儀器:倒置相差顯微鏡(日本 olympus imt-413),co2孵箱(日本yamato it-61)。
1.2 hek-293細(xì)胞的復(fù)蘇培養(yǎng)傳代及凍存:
1.2.1 細(xì)胞的復(fù)蘇培養(yǎng) 從液氮罐中取出凍存管,立即投入37℃水浴,并不斷的搖動,使之迅速融化。 將溶解的細(xì)胞凍存管取出,用酒精消毒后打開,吸出溶有細(xì)胞的凍存液,加入事先裝好培養(yǎng)液(37℃預(yù)熱,8~10倍體積)離心管內(nèi),稍微吹打混勻,然后1000rpm 5min,去除上清,加入適量培養(yǎng)液,吹打成細(xì)胞懸液, 以1×105/ml密度接種于25cm2培養(yǎng)瓶內(nèi),在37℃、5%co2及飽和濕度下培養(yǎng)。
1.2.2 細(xì)胞傳代 原代培養(yǎng)的hek-293細(xì)胞48h換液1次,細(xì)胞長至60%~70%融合時,用0.25%胰酶消化1~2min,將培養(yǎng)瓶再用手掌輕輕敲打使細(xì)胞脫壁、懸浮、分散,為使細(xì)胞進(jìn)一步分散可用吹打管輕輕吹打幾次,獲得細(xì)胞懸液,然后加入倍量的培養(yǎng)基,溫和混勻,吸管分裝混合液,傳代擴(kuò)增細(xì)胞。
1.3 細(xì)胞形態(tài)的觀察 在倒置顯微鏡下觀察并記錄細(xì)胞的生長情況及形態(tài)特征。
1.4 細(xì)胞的計數(shù) 常規(guī)消化細(xì)胞,待細(xì)胞變圓、脫壁并浮起,加入少量培養(yǎng)基離心,再用pbs重懸并吹打制成細(xì)胞懸液。在細(xì)胞計數(shù)板蓋玻片的一側(cè)加微量細(xì)胞懸液,用10×物鏡觀察計數(shù)板四角大方格細(xì)胞數(shù),按公式計算出細(xì)胞數(shù)。細(xì)胞數(shù)/ml原液=(四方格細(xì)胞數(shù)之和/4) ×104。
1.5 細(xì)胞的貼壁率 指數(shù)生長期的細(xì)胞,以0.25%胰酶消化成單細(xì)胞懸液,計數(shù)后分別接種于12個25cm2培養(yǎng)瓶中,每兩小時隨機(jī)取出3瓶細(xì)胞,吸除培養(yǎng)基及未貼壁細(xì)胞,加入胰消化酶消化、計數(shù)已貼壁細(xì)胞,取其平均值,按照公式:貼壁率(%)=(已貼壁細(xì)胞數(shù)/接種細(xì)胞數(shù)) ×100%,計算貼壁率。
1.6 生長曲線 取指數(shù)生長期的細(xì)胞用胰酶消化制成單細(xì)胞懸液,以1×104/孔接種于24孔板,每孔加入1ml培養(yǎng)基。每天隨機(jī)取3孔,計數(shù)每孔細(xì)胞的數(shù)目并計算平均值。連續(xù)計數(shù)10d,繪制細(xì)胞生長曲線
貼壁細(xì)胞: 對于貼壁細(xì)胞應(yīng)先吸(倒)盡培養(yǎng)基,吸的越干凈越好,以免中和后加入的消化液,使強(qiáng)度減弱(或PBS洗1-3次)。50ml培養(yǎng)瓶加入消化液約1-3ml,按此比例進(jìn)行消化,(根據(jù)經(jīng)驗),晃動使消化液鋪均勻置37度培養(yǎng)箱約2-5分鐘,鏡下見細(xì)胞收縮變圓或少數(shù)脫落后,輕輕振動瓶底使細(xì)胞全部脫落,加入2-3ml*培養(yǎng)基后,輕輕吹打,使細(xì)胞基本成單個懸浮,然后分置其它無菌培養(yǎng)瓶內(nèi),加入*培養(yǎng)基后繼續(xù)培養(yǎng)或?qū)嶒灐?/span>
懸浮細(xì)胞: 一般傳代可直接將細(xì)胞原液分置其它培養(yǎng)瓶內(nèi),加入*培養(yǎng)基繼續(xù)培養(yǎng),如要高濃度可先離心1000rpm,5min后加入*培養(yǎng)基,輕輕吹勻后,分置其它培養(yǎng)瓶內(nèi)加入*培養(yǎng)基繼續(xù)培養(yǎng)。需要指出的是,在不同的科研小組中這些術(shù)語的定義會有所不同。許多研究員不用細(xì)胞系這個詞表示細(xì)胞群除非細(xì)胞經(jīng)過了遺傳改造。
Anti-Phospho-SRC-3 (Thr24)/FITC 熒光素標(biāo)記磷酸化類固醇受體輔助活化因子-3抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格: 0.2ml
Ah Receptor(Aryl Hydrocarbon Receptor) 芳香烴受體抗原Multi-class antibodies規(guī)格: 0.5mg
配對盒基因3抗體 Anti-PAX3 1ml
SERPINB4 英文名稱: 絲酸蛋白酶抑制劑B4抗體(鱗狀細(xì)胞癌抗原) 0.1ml
Exonuclease 1 英文名稱: 核酸外切酶1抗體 0.2ml
Rhesus antibody Rh phospho-NFATc2(Ser326) 磷酸化核因子活化T細(xì)胞胞漿蛋白2抗體 規(guī)格 0.1ml
Ah Receptor(Aryl Hydrocarbon Receptor) 芳香烴受體抗原Multi-class antibodies規(guī)格: 0.5mg
sMHC-2(Mouse soluble myosin heavy chain 2) ELISA Kit 小鼠可溶性肌球蛋白重鏈Multi-class antibodies規(guī)格: 48T
Anti-phospho-c-Abl(Tyr89) /FITC 熒光素標(biāo)記兔抗人、小鼠磷酸化非受體酪氨酸激酶c-Abl抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格: 0.2ml
Rhesus antibody Rh ENPP7 堿性鞘磷脂酶7抗體 規(guī)格 0.1ml
IFN- Alpha/ BetaR(Human Interferon Alpha/ BetaReceptor) ELISA Kit 人α/β干擾素受體 96T
MAGEB1 英文名稱: 黑色素瘤相關(guān)抗原B1抗體 0.2ml
Alpha B Crystallin 英文名稱: α晶狀體球蛋白B/αB-crystallin抗體 0.1ml
Anti-phospho-c-Abl(Tyr89) /FITC 熒光素標(biāo)記兔抗人、小鼠磷酸化非受體酪氨酸激酶c-Abl抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格: 0.2ml
Try- II (Human Trypsinogen-2) ELISA Kit 人胰蛋白酶原Ⅱ 96T
Rab3A+Rab3B+Rab3C+Rab3D 英文名稱: ras癌基因家族Rab3A--Rab3D抗體 0.2ml
Rhesus antibody Rh MK1/2(MAPKK1) 原活化蛋白激酶激酶1抗體 規(guī)格 0.1ml
PHC(Human primary hepatic carcinoma) ELISA Kit 人肝癌抗原Multi-class antibodies規(guī)格: 48T
C1orf194 英文名稱: 1號染色體開放閱讀框194抗體 0.2ml
Anti-HDAC9 組蛋白去乙酰化酶9抗體Multi-class antibodies規(guī)格: 0.2ml
GCA(Human gastrin cell antibody) ELISA Kit 人胃泌素細(xì)胞抗體Multi-class antibodies規(guī)格: 48T
Anti-HSP27 熱休克蛋白-27抗體Multi-class antibodies規(guī)格: 0.1ml
Rhesus antibody Rh MAS1L G蛋白偶聯(lián)受體MAS相關(guān)蛋白抗體 規(guī)格 0.2ml
AP(Human Aprotinin) ELISA Kit 人抑肽酶 96T
RILPL2 英文名稱: Rab溶酶體相互作用蛋白樣2抗體 0.2ml
C2a 英文名稱: 補(bǔ)體C2a鏈多肽抗體 0.1ml
Anti-HSP27 熱休克蛋白-27抗體Multi-class antibodies規(guī)格: 0.1ml