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詳細(xì)介紹
細(xì)胞名稱 人神經(jīng)膠質(zhì)瘤細(xì)胞；H4培養(yǎng)
形態(tài)特性 上皮細(xì)胞樣
品牌 貼壁生長
特征特性 H4細(xì)胞系建系于1973年。它衍生于一個(gè)患神經(jīng)膠質(zhì)瘤的37歲病人的腦組織。該細(xì)胞的致瘤特性己經(jīng)被屏蔽，細(xì)胞接種動(dòng)物一般不產(chǎn)生腫瘤結(jié)節(jié)。該細(xì)胞具有修復(fù)MNNG損傷5型腺病毒的能力。
培養(yǎng)條件 DMEM-H：
Dulbecco's Modified Eagle's Medium (DME H-21 4.5g/Liter Glucose) 10%FBS
傳代方法 1：
3傳代,2-3天傳一代
傳代情況 C228
凍存條件 基礎(chǔ)培養(yǎng)基+5%DMSO+20%FBS
支原體檢測 陰性
STR
同工酶 同工酶鑒定
染色體
使用權(quán)限 A類
人神經(jīng)膠質(zhì)瘤細(xì)胞；H4培養(yǎng)貼壁細(xì)胞: 對(duì)于貼壁細(xì)胞應(yīng)先吸(倒)盡培養(yǎng)基，吸的越干凈越好，以免中和后加入的消化液，使強(qiáng)度減弱（或PBS洗1－3次）。50ml培養(yǎng)瓶加入消化液約1-3ml，按此比例進(jìn)行消化，(根據(jù)經(jīng)驗(yàn))，晃動(dòng)使消化液鋪均勻置37度培養(yǎng)箱約2-5分鐘，鏡下見細(xì)胞收縮變圓或少數(shù)脫落后，輕輕振動(dòng)瓶底使細(xì)胞全部脫落，加入2-3ml*培養(yǎng)基后，輕輕吹打，使細(xì)胞基本成單個(gè)懸浮，然后分置其它無菌培養(yǎng)瓶內(nèi)，加入*培養(yǎng)基后繼續(xù)培養(yǎng)或?qū)嶒?yàn)。
操作流程：
1.1 主要試劑與儀器：倒置相差顯微鏡（日本 olympus imt-413），co2孵箱（日本yamato it-61）。
1.2 hek-293細(xì)胞的復(fù)蘇培養(yǎng)傳代及凍存：
1.2.1 細(xì)胞的復(fù)蘇培養(yǎng) 從液氮罐中取出凍存管,立即投入37℃水浴,并不斷的搖動(dòng),使之迅速融化。 將溶解的細(xì)胞凍存管取出,用酒精消毒后打開,吸出溶有細(xì)胞的凍存液,加入事先裝好培養(yǎng)液（37℃預(yù)熱，8～10倍體積）離心管內(nèi),稍微吹打混勻,然后1000rpm 5min,去除上清,加入適量培養(yǎng)液,吹打成細(xì)胞懸液, 以1×105/ml密度接種于25cm2培養(yǎng)瓶內(nèi)，在37℃、5％co2及飽和濕度下培養(yǎng)。
1.2.2 細(xì)胞傳代 原代培養(yǎng)的hek－293細(xì)胞48h換液1次，細(xì)胞長至60%～70%融合時(shí)，用0.25%胰酶消化1～2min，將培養(yǎng)瓶再用手掌輕輕敲打使細(xì)胞脫壁、懸浮、分散，為使細(xì)胞進(jìn)一步分散可用吹打管輕輕吹打幾次，獲得細(xì)胞懸液，然后加入倍量的培養(yǎng)基，溫和混勻，吸管分裝混合液，傳代擴(kuò)增細(xì)胞。
1.3 細(xì)胞形態(tài)的觀察 在倒置顯微鏡下觀察并記錄細(xì)胞的生長情況及形態(tài)特征。
1.4 細(xì)胞的計(jì)數(shù) 常規(guī)消化細(xì)胞，待細(xì)胞變圓、脫壁并浮起，加入少量培養(yǎng)基離心，再用pbs重懸并吹打制成細(xì)胞懸液。在細(xì)胞計(jì)數(shù)板蓋玻片的一側(cè)加微量細(xì)胞懸液，用10×物鏡觀察計(jì)數(shù)板四角大方格細(xì)胞數(shù)，按公式計(jì)算出細(xì)胞數(shù)。細(xì)胞數(shù)/ml原液＝(四方格細(xì)胞數(shù)之和/4) ×104。
1.5 細(xì)胞的貼壁率 指數(shù)生長期的細(xì)胞，以0.25％胰酶消化成單細(xì)胞懸液，計(jì)數(shù)后分別接種于12個(gè)25cm2培養(yǎng)瓶中，每兩小時(shí)隨機(jī)取出3瓶細(xì)胞，吸除培養(yǎng)基及未貼壁細(xì)胞，加入胰消化酶消化、計(jì)數(shù)已貼壁細(xì)胞，取其平均值，按照公式：貼壁率(%)=(已貼壁細(xì)胞數(shù)/接種細(xì)胞數(shù)) ×100％，計(jì)算貼壁率。
1.6 生長曲線 取指數(shù)生長期的細(xì)胞用胰酶消化制成單細(xì)胞懸液，以1×104/孔接種于24孔板，每孔加入1ml培養(yǎng)基。每天隨機(jī)取3孔，計(jì)數(shù)每孔細(xì)胞的數(shù)目并計(jì)算平均值。連續(xù)計(jì)數(shù)10d，繪制細(xì)胞生長曲線
Anti-SP-B/FITC 熒光素標(biāo)記肺表面活性蛋白B抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格： 0.2ml
Endothelin-1 (ET-1) 內(nèi)皮素-1(抗原)Multi-class antibodies規(guī)格： 0.5mg
腺苷酸環(huán)化酶激活肽受體-I/血管活性腸肽-I抗體 Anti-PACAP/VIP receptor-I 0.2ml
SLFN14 英文名稱： Schlafen家族14抗體 0.2ml
ETBR 英文名稱： 內(nèi)皮素B受體抗體 0.1ml
Rhesus antibody Rh Phospho-NFKB1(Ser933) 磷酸化細(xì)胞核因子p50/k基因結(jié)合核因子抗體 規(guī)格 0.1ml
Endothelin-1 (ET-1) 內(nèi)皮素-1(抗原)Multi-class antibodies規(guī)格： 0.5mg
SP-A(Mouse Pulmonary surfatcant-associated protein A) ELISA Kit 小鼠肺表面活性物質(zhì)相關(guān)蛋白AMulti-class antibodies規(guī)格： 48T
Anti-CGP-39/YKL-40/FITC 熒光素標(biāo)記軟骨糖蛋白39抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格： 0.2ml
Rhesus antibody Rh Dog IgM/PE-CY5 PE-CY5標(biāo)記的兔抗犬IgM抗體 規(guī)格 0.1ml
Insulin Protein/FITC 熒光素標(biāo)記人胰島素蛋白 0.5ml
LI-cadherin 英文名稱： 肝腸鈣粘連蛋白抗體 0.1ml
青霉素快速檢測試紙卡 50T/盒 谷物、奶、奶粉
Anti-CGP-39/YKL-40/FITC 熒光素標(biāo)記軟骨糖蛋白39抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格： 0.2ml
TSTA(Human tumor specific transplantation antigen) ELISA Kit 人特異性移植抗原 96T
NPAP1 英文名稱： 核孔蛋白1抗體 0.2ml
Rhesus antibody Rh GNPAT 磷酸二羥丙酮?；D(zhuǎn)移酶抗體 規(guī)格 0.2ml
A Beta1-42 ELISA Kit 大鼠β淀粉樣蛋白1-42Multi-class antibodies規(guī)格： 48T
BTBD1 英文名稱： BTB/POZ結(jié)構(gòu)域蛋白1(丙型肝炎病毒的NS5A反轉(zhuǎn)錄蛋白8)抗體 0.2ml
Anti-TGF-alpha 轉(zhuǎn)移生長因子–α抗體Multi-class antibodies規(guī)格： 0.1ml
GABA/KLH γ1氨基丁酸偶聯(lián)血藍(lán)蛋白Multi-class antibodies規(guī)格： 1mg
Anti-HER2/C-erbB-2 HER2抗體Multi-class antibodies規(guī)格： 0.1ml
Rhesus antibody Rh OAT-1/SLC22A6 陰離子轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白-1抗體 規(guī)格 0.1ml
Antibody Diluent 抗體稀釋液 30ml
TWIST protein 英文名稱： TWIST蛋白抗體 0.1ml
C18orf56 英文名稱： 18號(hào)染色體開放閱讀框56抗體 0.1ml
Anti-HER2/C-erbB-2 HER2抗體Multi-class antibodies規(guī)格： 0.1ml
懸浮細(xì)胞: 一般傳代可直接將細(xì)胞原液分置其它培養(yǎng)瓶內(nèi)，加入*培養(yǎng)基繼續(xù)培養(yǎng)，如要高濃度可先離心1000rpm，5min后加入*培養(yǎng)基，輕輕吹勻后，分置其它培養(yǎng)瓶內(nèi)加入*培養(yǎng)基繼續(xù)培養(yǎng)。需要指出的是，在不同的科研小組中這些術(shù)語的定義會(huì)有所不同。許多研究員不用細(xì)胞系這個(gè)詞表示細(xì)胞群除非細(xì)胞經(jīng)過了遺傳改造。
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