詳細(xì)介紹
細(xì)胞名稱 EB病毒轉(zhuǎn)化的人B淋巴細(xì)胞;KMY0928培養(yǎng)
形態(tài)特性 淋巴母細(xì)胞樣
品牌 懸浮生長
特征特性 該細(xì)胞系來源于一成年男性的外周血。2009年由中科院昆明細(xì)胞庫通過EB病毒轉(zhuǎn)化的方法建立。
培養(yǎng)條件 RPMI 1640 (w/o Hepes) 15%NBS
傳代方法 1:
2傳代;5-6天一次
傳代情況 P2
凍存條件 基礎(chǔ)培養(yǎng)基+5%DMSO+20%FBS
支原體檢測 熒光法(-)
STR -
同工酶
染色體
使用權(quán)限 A類
EB病毒轉(zhuǎn)化的人B淋巴細(xì)胞;KMY0928培養(yǎng)操作流程:
1.1 主要試劑與儀器:倒置相差顯微鏡(日本 olympus imt-413),co2孵箱(日本yamato it-61)。
1.2 hek-293細(xì)胞的復(fù)蘇培養(yǎng)傳代及凍存:
1.2.1 細(xì)胞的復(fù)蘇培養(yǎng) 從液氮罐中取出凍存管,立即投入37℃水浴,并不斷的搖動,使之迅速融化。 將溶解的細(xì)胞凍存管取出,用酒精消毒后打開,吸出溶有細(xì)胞的凍存液,加入事先裝好培養(yǎng)液(37℃預(yù)熱,8~10倍體積)離心管內(nèi),稍微吹打混勻,然后1000rpm 5min,去除上清,加入適量培養(yǎng)液,吹打成細(xì)胞懸液, 以1×105/ml密度接種于25cm2培養(yǎng)瓶內(nèi),在37℃、5%co2及飽和濕度下培養(yǎng)。
1.2.2 細(xì)胞傳代 原代培養(yǎng)的hek-293細(xì)胞48h換液1次,細(xì)胞長至60%~70%融合時,用0.25%胰酶消化1~2min,將培養(yǎng)瓶再用手掌輕輕敲打使細(xì)胞脫壁、懸浮、分散,為使細(xì)胞進(jìn)一步分散可用吹打管輕輕吹打幾次,獲得細(xì)胞懸液,然后加入倍量的培養(yǎng)基,溫和混勻,吸管分裝混合液,傳代擴(kuò)增細(xì)胞。
1.3 細(xì)胞形態(tài)的觀察 在倒置顯微鏡下觀察并記錄細(xì)胞的生長情況及形態(tài)特征。
1.4 細(xì)胞的計數(shù) 常規(guī)消化細(xì)胞,待細(xì)胞變圓、脫壁并浮起,加入少量培養(yǎng)基離心,再用pbs重懸并吹打制成細(xì)胞懸液。在細(xì)胞計數(shù)板蓋玻片的一側(cè)加微量細(xì)胞懸液,用10×物鏡觀察計數(shù)板四角大方格細(xì)胞數(shù),按公式計算出細(xì)胞數(shù)。細(xì)胞數(shù)/ml原液=(四方格細(xì)胞數(shù)之和/4) ×104。
1.5 細(xì)胞的貼壁率 指數(shù)生長期的細(xì)胞,以0.25%胰酶消化成單細(xì)胞懸液,計數(shù)后分別接種于12個25cm2培養(yǎng)瓶中,每兩小時隨機(jī)取出3瓶細(xì)胞,吸除培養(yǎng)基及未貼壁細(xì)胞,加入胰消化酶消化、計數(shù)已貼壁細(xì)胞,取其平均值,按照公式:貼壁率(%)=(已貼壁細(xì)胞數(shù)/接種細(xì)胞數(shù)) ×100%,計算貼壁率。
1.6 生長曲線 取指數(shù)生長期的細(xì)胞用胰酶消化制成單細(xì)胞懸液,以1×104/孔接種于24孔板,每孔加入1ml培養(yǎng)基。每天隨機(jī)取3孔,計數(shù)每孔細(xì)胞的數(shù)目并計算平均值。連續(xù)計數(shù)10d,繪制細(xì)胞生長曲線
貼壁細(xì)胞: 對于貼壁細(xì)胞應(yīng)先吸(倒)盡培養(yǎng)基,吸的越干凈越好,以免中和后加入的消化液,使強(qiáng)度減弱(或PBS洗1-3次)。50ml培養(yǎng)瓶加入消化液約1-3ml,按此比例進(jìn)行消化,(根據(jù)經(jīng)驗),晃動使消化液鋪均勻置37度培養(yǎng)箱約2-5分鐘,鏡下見細(xì)胞收縮變圓或少數(shù)脫落后,輕輕振動瓶底使細(xì)胞全部脫落,加入2-3ml*培養(yǎng)基后,輕輕吹打,使細(xì)胞基本成單個懸浮,然后分置其它無菌培養(yǎng)瓶內(nèi),加入*培養(yǎng)基后繼續(xù)培養(yǎng)或?qū)嶒灐?/span>
懸浮細(xì)胞: 一般傳代可直接將細(xì)胞原液分置其它培養(yǎng)瓶內(nèi),加入*培養(yǎng)基繼續(xù)培養(yǎng),如要高濃度可先離心1000rpm,5min后加入*培養(yǎng)基,輕輕吹勻后,分置其它培養(yǎng)瓶內(nèi)加入*培養(yǎng)基繼續(xù)培養(yǎng)。需要指出的是,在不同的科研小組中這些術(shù)語的定義會有所不同。許多研究員不用細(xì)胞系這個詞表示細(xì)胞群除非細(xì)胞經(jīng)過了遺傳改造。
Anti-Z-DEVD-FMK/FITC 熒光素標(biāo)記CASPASE3凋亡抑制劑IgGMulti-class antibodies規(guī)格: 0.2ml
Cyclin D2 周期素D2抗原Multi-class antibodies規(guī)格: 0.5mg
β淀粉樣肽β-Amyloid 1-40/Aβ1-40 C端抗體 Anti-β-Amyloid 1-40/Aβ1-40 0.1ml
ZNF379 英文名稱: 鋅指蛋白379抗體 0.2ml
Desmoglein 3 英文名稱: 橋粒芯蛋白3抗體 0.1ml
Rhesus antibody Rh Phospho-Ezrin (Tyr353) 磷酸化埃茲蛋白抗體 規(guī)格 0.1ml
Cyclin D2 周期素D2抗原Multi-class antibodies規(guī)格: 0.5mg
UK(Human urokinase) ELISA Kit 人尿激酶Multi-class antibodies規(guī)格: 48T
Anti-Nebulin 伴肌動蛋白抗體Multi-class antibodies規(guī)格: 0.2ml
Rhesus antibody Rh IL-3(human) 白介素3抗體(人) 規(guī)格 0.2ml
TXB2(Mouse Thromboxane B2) ELISA Kit 小鼠血栓素B2 96T
plant lectin B4 英文名稱: 植物凝集素IB4 0.2ml
Complement C3 英文名稱: 過敏毒素C3(補(bǔ)體C3)抗體 0.1ml
Anti-Nebulin 伴肌動蛋白抗體Multi-class antibodies規(guī)格: 0.2ml
人成纖維細(xì)胞生長因子9(FGF-9)ELISA試劑盒人96T78-5000 pg/mL小鼠尿激酶型纖溶酶原激活因子(uPA)ELISA試劑盒,英文名:uPA ELISA KiISA Kit for Human Prostate androgen-regulated mucin-like protein 1大鼠促性腺激素抑制激素(GnIH)ELISA試劑盒,英文名:GnIH ELISA KiISA Kit for Human N-terminal propeptide of Collagen alpha-1(I) chain大鼠α干擾素(IFNα)ELISA試劑盒,英文名:IFNα ELISA KiISA Kit for Human Reversion-inducing cysteine-rich protein with Kazal motifs大鼠CXC趨化因子配體1(CXCL1)ELISA試劑盒,英文名:CXCL1 ELISA KiISA Kit for Human Signal peptide, CUB and EGF-like domain-containing protein 1大鼠硝基酪氨酸(NT)ELISA試劑盒,英文名:NT ELISA KiISA Kit for Human Secretin大鼠乳酸脫氫酶A(LDHA)ELISA試劑盒,英文名:LDHA ELISA KiISA Kit for Human Tribbles homolog 3大鼠激肽釋放酶5(KLK5)ELISA試劑盒,英文名:KLK5 ELISA Kit
ELISA Kit for Human Glutamate--cysteine ligase catalytic subunit小鼠甲狀腺結(jié)合球蛋白(TBG)ELISA試劑盒,英文名:TBG ELISA KiISA Kit for Human Metalloproteinase inhibitor 2大鼠兒茶酚-O-甲基轉(zhuǎn)移酶(COMT)ELISA試劑盒,英文名:COMT ELISA KiISA Kit for Human Protein Wnt-5a大鼠白介素12A(IL12A)ELISA試劑盒,英文名:IL12A ELISA Kit豚鼠血清淀粉樣蛋白A(SAA)ELISA試劑盒,英文名:SAA ELISA KiISA Kit for Human Apolipoprotein L1小鼠乙酰膽堿受體抗體(AChRab)ELISA試劑盒,英文名:AChRab ELISA KiISA Kit for Human Arachidonate 15-lipoxygenase B小鼠碳酸酐酶2(CA-2)ELISA試劑盒,英文名:CA-2 ELISA KiISA Kit for Human Beta-1, 3-galactosyltransferase 2小鼠輪狀病毒(RV)抗原(Ag)ELISA試劑盒,英文名:Ag ELISA Kit
切片盒 100片
WSTF 英文名稱: 轉(zhuǎn)錄因子WSTF抗體 0.2ml
Rhesus antibody Rh Phospho-CDC42 (Ser71) 磷酸化細(xì)胞分化周期CDC42蛋白抗體 規(guī)格 0.1ml
IL-4(Interleukin-4)human peptide 白介素4抗原Multi-class antibodies規(guī)格: 0.5mg
Dymeclin 英文名稱: 迪格弗-梅爾基奧爾-克勞森綜合征相關(guān)蛋白抗體 0.2ml
Anti-ADAMTS7 整合素樣金屬蛋白酶與凝血酶1型-7抗體Multi-class antibodies規(guī)格: 0.2ml
Anti-HIF-1 Beta/ARNT1/FITC 熒光素標(biāo)記缺氧誘導(dǎo)因子1β 抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格: 0.2ml
Anti-phospho-ERK1(pThr202/pThr204)+phospho ERK2(pThr183/pTyr185)/FITC 熒光素標(biāo)記抗人、大、小鼠磷酸化原活化蛋白激酶1/2抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格: 0.2ml
Rhesus antibody Rh ATXN1/Ataxin-1 脊髓小腦失調(diào)癥蛋白1抗體 規(guī)格 0.2ml
AACT(Alpha-1-Anti-chymotrypsin) α-1抗胰糜蛋白酶 10mg
GPR39 英文名稱: G蛋白偶聯(lián)受體39抗體 0.1ml
Rhesus antibody Rh Rabbit anti-mouse Kappa light chain/Alexa Fluor 488 Alexa Fluor 488標(biāo)記的兔抗小鼠k鏈 規(guī)格 0.1ml
Anti-phospho-ERK1(pThr202/pThr204)+phospho ERK2(pThr183/pTyr185)/FITC 熒光素標(biāo)記抗人、大、小鼠磷酸化原活化蛋白激酶1/2抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格: 0.2ml