詳細(xì)介紹
細(xì)胞名稱(chēng) 永生化人肝癌血管內(nèi)皮細(xì)胞系;ECDHCC-1培養(yǎng)
形態(tài)特性 上皮樣
品牌 貼壁生長(zhǎng)
特征特性 該細(xì)胞屬專(zhuān)利保藏,其特征特性尚未公開(kāi)。
培養(yǎng)條件 10%FBS
傳代方法 無(wú)
傳代情況 1:
3傳代,3-4天傳1次
凍存條件 C5
支原體檢測(cè) 基礎(chǔ)培養(yǎng)基+5%DMSO+20%FBS
STR 陰性
同工酶
染色體 未做
永生化人肝癌血管內(nèi)皮細(xì)胞系;ECDHCC-1培養(yǎng)操作流程:
1.1 主要試劑與儀器:倒置相差顯微鏡(日本 olympus imt-413),co2孵箱(日本yamato it-61)。
1.2 hek-293細(xì)胞的復(fù)蘇培養(yǎng)傳代及凍存:
1.2.1 細(xì)胞的復(fù)蘇培養(yǎng) 從液氮罐中取出凍存管,立即投入37℃水浴,并不斷的搖動(dòng),使之迅速融化。 將溶解的細(xì)胞凍存管取出,用酒精消毒后打開(kāi),吸出溶有細(xì)胞的凍存液,加入事先裝好培養(yǎng)液(37℃預(yù)熱,8~10倍體積)離心管內(nèi),稍微吹打混勻,然后1000rpm 5min,去除上清,加入適量培養(yǎng)液,吹打成細(xì)胞懸液, 以1×105/ml密度接種于25cm2培養(yǎng)瓶?jī)?nèi),在37℃、5%co2及飽和濕度下培養(yǎng)。
1.2.2 細(xì)胞傳代 原代培養(yǎng)的hek-293細(xì)胞48h換液1次,細(xì)胞長(zhǎng)至60%~70%融合時(shí),用0.25%胰酶消化1~2min,將培養(yǎng)瓶再用手掌輕輕敲打使細(xì)胞脫壁、懸浮、分散,為使細(xì)胞進(jìn)一步分散可用吹打管輕輕吹打幾次,獲得細(xì)胞懸液,然后加入倍量的培養(yǎng)基,溫和混勻,吸管分裝混合液,傳代擴(kuò)增細(xì)胞。
1.3 細(xì)胞形態(tài)的觀察 在倒置顯微鏡下觀察并記錄細(xì)胞的生長(zhǎng)情況及形態(tài)特征。
1.4 細(xì)胞的計(jì)數(shù) 常規(guī)消化細(xì)胞,待細(xì)胞變圓、脫壁并浮起,加入少量培養(yǎng)基離心,再用pbs重懸并吹打制成細(xì)胞懸液。在細(xì)胞計(jì)數(shù)板蓋玻片的一側(cè)加微量細(xì)胞懸液,用10×物鏡觀察計(jì)數(shù)板四角大方格細(xì)胞數(shù),按公式計(jì)算出細(xì)胞數(shù)。細(xì)胞數(shù)/ml原液=(四方格細(xì)胞數(shù)之和/4) ×104。
1.5 細(xì)胞的貼壁率 指數(shù)生長(zhǎng)期的細(xì)胞,以0.25%胰酶消化成單細(xì)胞懸液,計(jì)數(shù)后分別接種于12個(gè)25cm2培養(yǎng)瓶中,每?jī)尚r(shí)隨機(jī)取出3瓶細(xì)胞,吸除培養(yǎng)基及未貼壁細(xì)胞,加入胰消化酶消化、計(jì)數(shù)已貼壁細(xì)胞,取其平均值,按照公式:貼壁率(%)=(已貼壁細(xì)胞數(shù)/接種細(xì)胞數(shù)) ×100%,計(jì)算貼壁率。
1.6 生長(zhǎng)曲線(xiàn) 取指數(shù)生長(zhǎng)期的細(xì)胞用胰酶消化制成單細(xì)胞懸液,以1×104/孔接種于24孔板,每孔加入1ml培養(yǎng)基。每天隨機(jī)取3孔,計(jì)數(shù)每孔細(xì)胞的數(shù)目并計(jì)算平均值。連續(xù)計(jì)數(shù)10d,繪制細(xì)胞生長(zhǎng)曲線(xiàn)
貼壁細(xì)胞: 對(duì)于貼壁細(xì)胞應(yīng)先吸(倒)盡培養(yǎng)基,吸的越干凈越好,以免中和后加入的消化液,使強(qiáng)度減弱(或PBS洗1-3次)。50ml培養(yǎng)瓶加入消化液約1-3ml,按此比例進(jìn)行消化,(根據(jù)經(jīng)驗(yàn)),晃動(dòng)使消化液鋪均勻置37度培養(yǎng)箱約2-5分鐘,鏡下見(jiàn)細(xì)胞收縮變圓或少數(shù)脫落后,輕輕振動(dòng)瓶底使細(xì)胞全部脫落,加入2-3ml*培養(yǎng)基后,輕輕吹打,使細(xì)胞基本成單個(gè)懸浮,然后分置其它無(wú)菌培養(yǎng)瓶?jī)?nèi),加入*培養(yǎng)基后繼續(xù)培養(yǎng)或?qū)嶒?yàn)。
懸浮細(xì)胞: 一般傳代可直接將細(xì)胞原液分置其它培養(yǎng)瓶?jī)?nèi),加入*培養(yǎng)基繼續(xù)培養(yǎng),如要高濃度可先離心1000rpm,5min后加入*培養(yǎng)基,輕輕吹勻后,分置其它培養(yǎng)瓶?jī)?nèi)加入*培養(yǎng)基繼續(xù)培養(yǎng)。需要指出的是,在不同的科研小組中這些術(shù)語(yǔ)的定義會(huì)有所不同。許多研究員不用細(xì)胞系這個(gè)詞表示細(xì)胞群除非細(xì)胞經(jīng)過(guò)了遺傳改造。
Anti-MRP2/FITC 熒光素標(biāo)記多藥耐藥相關(guān)蛋白2抗體Multi-class antibodies規(guī)格: 0.2ml
Anti-Phospho-Tuberin/TSC2 (Ser1387)/FITC 熒光素標(biāo)記磷酸化馬鈴薯球蛋白(結(jié)節(jié)性硬化)抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格: 0.2ml
Rhesus antibody Rh 4EBP2 eIF4E結(jié)合蛋白2抗體 規(guī)格 0.1ml
Mouse Anti-rat IgG/PE-CY5 PE-CY5標(biāo)記的小鼠抗大鼠IgG 0.1ml
CKS2 英文名稱(chēng): 細(xì)胞周期蛋白依賴(lài)性激酶調(diào)節(jié)亞基2抗體 0.2ml
Rhesus antibody Rh PSME3/PA28 gamma 蛋白酶體激活因子PA28γ抗體 規(guī)格 0.2ml
Anti-Phospho-Tuberin/TSC2 (Ser1387)/FITC 熒光素標(biāo)記磷酸化馬鈴薯球蛋白(結(jié)節(jié)性硬化)抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格: 0.2ml
vaspin ELASA Kit 大鼠內(nèi)臟脂肪特異性絲氨酸蛋白酶抑制劑Multi-class antibodies規(guī)格: 48T
Anti-TIMP-4 金屬蛋白酶組織抑制因子-4抗體Multi-class antibodies規(guī)格: 0.1ml
Rhesus antibody Rh Glutamine PRPP amidotransferase 谷氨酰胺磷酸核糖基焦磷酸酰胺基轉(zhuǎn)移酶 規(guī)格 0.2ml
MPO ELISA Kit 大鼠髓過(guò)氧化物酶 96T
Nephrin 英文名稱(chēng): 腎小球細(xì)胞粘附分子受體抗體 0.1ml
APG5L 英文名稱(chēng): 自噬蛋白5/細(xì)胞凋亡的特異性蛋白抗體 0.1ml
Anti-TIMP-4 金屬蛋白酶組織抑制因子-4抗體Multi-class antibodies規(guī)格: 0.1ml
人谷氨酸-半胱氨酸連接酶催化亞基 (GCLC) ELISA試劑盒人96T0.156-10 nmol/L小鼠間皮素(MSLN)ELISA試劑盒,英文名:MSLN ELISA KiISA Kit for Human Synaptopodin大鼠三磷酸肌醇(IP3)ELISA試劑盒,英文名:IP3 ELISA KiISA Kit for Human TGF-beta receptor type-2大鼠極低密度脂蛋白受體(VLDLR)ELISA試劑盒,英文名:VLDLR ELISA KiISA Kit for Human Thrombopoietin大鼠二肽基肽酶Ⅳ(DPP4)ELISA試劑盒,英文名:DPP4 ELISA KiISA Kit for Human Proto-oncogene Wnt-1大鼠白介素16(IL16)ELISA試劑盒,英文名:IL16 ELISA Kit豚鼠乙型肝炎病毒表面抗原(HBsAg)ELISA試劑盒,英文名:HBsAg ELISA KiISA Kit for Human A-kinase anchor protein 17A小鼠乙型肝炎e抗體(HBeAb)ELISA試劑盒,英文名:HBeAb ELISA Kit
ELISA Kit for Human Heterogeneous nuclear ribonucleoprotein F小鼠骨成型蛋白4(BMP4)ELISA試劑盒,英文名:BMP4 ELISA KiISA Kit for Human Adenosine deaminase小鼠糖類(lèi)抗原199(CA199)ELISA試劑盒,英文名:CA199 ELISA KiISA Kit for Human Protein bassoon小鼠免疫球蛋白G(IgG)ELISA試劑盒,英文名:IgG ELISA KiISA Kit for Human Claudin-2小鼠環(huán)磷酸鳥(niǎo)苷(cGMP)ELISA試劑盒,英文名:cGMP ELISA KiISA Kit for Human Carbonic anhydrase 1小鼠草胺膦乙酰轉(zhuǎn)移酶(PAT)ELISA試劑盒,英文名:PAT ELISA KiISA Kit for Human C-X-C motif chemokine 5小鼠NADPH氧化酶1()ELISA試劑盒,英文名: ELISA KiISA Kit for Human Granulocyte-macrophage colony-stimulating factor小鼠白細(xì)胞介素10(IL-10)ELISA試劑盒,英文名:IL-10 ELISA Kit
山羊抗小鼠 IgG(H+L)/FITC 0.1ml 綠色熒光,Jackson公司分裝
VEGF-C 英文名稱(chēng): 血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子C型抗體 0.1ml
Rhesus antibody Rh Phospho-Bad(Ser118) 磷酸化相關(guān)死亡促進(jìn)因子抗體 規(guī)格 0.1ml
NAP1 (nucleosome assembly protein 1) 核小體組裝蛋白1(多肽)Multi-class antibodies規(guī)格: 0.5mg
DZIP1 英文名稱(chēng): 鋅指蛋白DZIP1抗體 0.1ml
Anti-Apelin 脂肪炎癥因子Apelin抗體Multi-class antibodies規(guī)格: 0.2ml
MHC- III /H-2 III (Mouse major histocompatibility complex- III ) ELISA Kit 小鼠主要組織相容性復(fù)合體Ⅲ類(lèi)Multi-class antibodies規(guī)格: 48T
Anti-Calponin 1/FITC 熒光素標(biāo)記鈣調(diào)節(jié)蛋白-1抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格: 0.2ml
Rhesus antibody Rh Endomucin 內(nèi)皮粘蛋白EMCN抗體 規(guī)格 0.2ml
6-keto-PGF1a (Rabbit 6-keto-prostaglandin F1a) ELISA Kit 兔6酮前列腺素F1a 96T
MPP2 英文名稱(chēng): MPP2蛋白抗體 0.1ml
Angiomotin 英文名稱(chēng): 血管動(dòng)蛋白抗體 0.2ml
Anti-Calponin 1/FITC 熒光素標(biāo)記鈣調(diào)節(jié)蛋白-1抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格: 0.2ml