詳細(xì)介紹
人羊膜細(xì)胞;WISH價格懸浮細(xì)胞: 一般傳代可直接將細(xì)胞原液分置其它培養(yǎng)瓶內(nèi),加入*培養(yǎng)基繼續(xù)培養(yǎng),如要高濃度可先離心1000rpm,5min后加入*培養(yǎng)基,輕輕吹勻后,分置其它培養(yǎng)瓶內(nèi)加入*培養(yǎng)基繼續(xù)培養(yǎng)。需要指出的是,在不同的科研小組中這些術(shù)語的定義會有所不同。許多研究員不用細(xì)胞系這個詞表示細(xì)胞群除非細(xì)胞經(jīng)過了遺傳改造。
細(xì)胞名稱 人羊膜細(xì)胞;WISH價格
形態(tài)特性 上皮細(xì)胞樣
品牌 貼壁生長
特征特性 zui初以為這株細(xì)胞的起源是正常羊膜,但隨后通過同工酶分析、HeLa標(biāo)記染色體和DNA指紋法分析,證實該細(xì)胞是HeLa細(xì)胞污染的;角蛋白陽性。
培養(yǎng)條件 DMEM-H:
Dulbecco's Modified Eagle's Medium (DME H-21 4.5g/Liter Glucose) 10%FBS
傳代方法 1:
3傳代,2-3天傳一代
傳代情況 C187
凍存條件 基礎(chǔ)培養(yǎng)基+5%DMSO+20%FBS
支原體檢測 陰性
STR
同工酶 同工酶鑒定
染色體
使用權(quán)限 A類
貼壁細(xì)胞: 對于貼壁細(xì)胞應(yīng)先吸(倒)盡培養(yǎng)基,吸的越干凈越好,以免中和后加入的消化液,使強度減弱(或PBS洗1-3次)。50ml培養(yǎng)瓶加入消化液約1-3ml,按此比例進行消化,(根據(jù)經(jīng)驗),晃動使消化液鋪均勻置37度培養(yǎng)箱約2-5分鐘,鏡下見細(xì)胞收縮變圓或少數(shù)脫落后,輕輕振動瓶底使細(xì)胞全部脫落,加入2-3ml*培養(yǎng)基后,輕輕吹打,使細(xì)胞基本成單個懸浮,然后分置其它無菌培養(yǎng)瓶內(nèi),加入*培養(yǎng)基后繼續(xù)培養(yǎng)或?qū)嶒灐?/span>
操作流程:
1.1 主要試劑與儀器:倒置相差顯微鏡(日本 olympus imt-413),co2孵箱(日本yamato it-61)。
1.2 hek-293細(xì)胞的復(fù)蘇培養(yǎng)傳代及凍存:
1.2.1 細(xì)胞的復(fù)蘇培養(yǎng) 從液氮罐中取出凍存管,立即投入37℃水浴,并不斷的搖動,使之迅速融化。 將溶解的細(xì)胞凍存管取出,用酒精消毒后打開,吸出溶有細(xì)胞的凍存液,加入事先裝好培養(yǎng)液(37℃預(yù)熱,8~10倍體積)離心管內(nèi),稍微吹打混勻,然后1000rpm 5min,去除上清,加入適量培養(yǎng)液,吹打成細(xì)胞懸液, 以1×105/ml密度接種于25cm2培養(yǎng)瓶內(nèi),在37℃、5%co2及飽和濕度下培養(yǎng)。
1.2.2 細(xì)胞傳代 原代培養(yǎng)的hek-293細(xì)胞48h換液1次,細(xì)胞長至60%~70%融合時,用0.25%胰酶消化1~2min,將培養(yǎng)瓶再用手掌輕輕敲打使細(xì)胞脫壁、懸浮、分散,為使細(xì)胞進一步分散可用吹打管輕輕吹打幾次,獲得細(xì)胞懸液,然后加入倍量的培養(yǎng)基,溫和混勻,吸管分裝混合液,傳代擴增細(xì)胞。
1.3 細(xì)胞形態(tài)的觀察 在倒置顯微鏡下觀察并記錄細(xì)胞的生長情況及形態(tài)特征。
1.4 細(xì)胞的計數(shù) 常規(guī)消化細(xì)胞,待細(xì)胞變圓、脫壁并浮起,加入少量培養(yǎng)基離心,再用pbs重懸并吹打制成細(xì)胞懸液。在細(xì)胞計數(shù)板蓋玻片的一側(cè)加微量細(xì)胞懸液,用10×物鏡觀察計數(shù)板四角大方格細(xì)胞數(shù),按公式計算出細(xì)胞數(shù)。細(xì)胞數(shù)/ml原液=(四方格細(xì)胞數(shù)之和/4) ×104。
1.5 細(xì)胞的貼壁率 指數(shù)生長期的細(xì)胞,以0.25%胰酶消化成單細(xì)胞懸液,計數(shù)后分別接種于12個25cm2培養(yǎng)瓶中,每兩小時隨機取出3瓶細(xì)胞,吸除培養(yǎng)基及未貼壁細(xì)胞,加入胰消化酶消化、計數(shù)已貼壁細(xì)胞,取其平均值,按照公式:貼壁率(%)=(已貼壁細(xì)胞數(shù)/接種細(xì)胞數(shù)) ×100%,計算貼壁率。
1.6 生長曲線 取指數(shù)生長期的細(xì)胞用胰酶消化制成單細(xì)胞懸液,以1×104/孔接種于24孔板,每孔加入1ml培養(yǎng)基。每天隨機取3孔,計數(shù)每孔細(xì)胞的數(shù)目并計算平均值。連續(xù)計數(shù)10d,繪制細(xì)胞生長曲線
C I CP ELISA Kit 大鼠Ⅰ型前膠原C末端肽Multi-class antibodies規(guī)格: 48T
Anti-Phospho-YAP1 (Ser127) 磷酸化原癌基因Yes相關(guān)蛋白1抗體Multi-class antibodies規(guī)格: 0.1ml
Rhesus antibody Rh G protein beta subunit GI G蛋白/鳥苷酸結(jié)合蛋白抗體 規(guī)格 0.2ml
mALB ELISA Kit 大鼠微量蛋白 96T
Alpha-synuclein (nitro-Tyr39) 英文名稱: 硝基化α-突觸核蛋白 0.1ml
ARFGAP3 英文名稱: ADP核糖基化因子GTP酶激活蛋白1抗體 0.2ml
Anti-Phospho-YAP1 (Ser127) 磷酸化原癌基因Yes相關(guān)蛋白1抗體Multi-class antibodies規(guī)格: 0.1ml
VLA ELISA Kit 大鼠遲現(xiàn)抗原Multi-class antibodies規(guī)格: 48T
Anti-phospho-ATF2(Thr69/71) /FITC 熒光素標(biāo)記兔抗人、大、小鼠、猴磷酸化活化復(fù)制因子2(phospho ATF 2)抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格: 0.2ml
Rhesus antibody Rh FADS1 脂肪酸去飽和酶1抗體 規(guī)格 0.2ml
KGF(Human Keratinocyte Growth Factor) ELISA Kit 人角化細(xì)胞生長因子 96T
2-Mar 英文名稱: 膜相關(guān)環(huán)指蛋白2抗體 0.2ml
ATM 英文名稱: 毛細(xì)血管擴張性共濟失調(diào)癥突變蛋白抗體 0.1ml
Anti-phospho-ATF2(Thr69/71) /FITC 熒光素標(biāo)記兔抗人、大、小鼠、猴磷酸化活化復(fù)制因子2(phospho ATF 2)抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格: 0.2ml
人無孢蛋白(ASPN)ELISA試劑盒人96T0.156-10 ng/mL小鼠神經(jīng)調(diào)節(jié)蛋白2(NRG2)ELISA試劑盒,英文名:NRG2 ELISA KiISA Kit for Human Sialin大鼠血管內(nèi)皮生長因子D(VEGFD)ELISA試劑盒,英文名:VEGFD ELISA Kit人S100鈣結(jié)合蛋白A6(S100A6)ELISA試劑盒人96T7.8-500 ng/mL大鼠髓細(xì)胞觸發(fā)受體1(TREM1)ELISA試劑盒,英文名:TREM1 ELISA KiISA Kit for Human Metalloreductase STEAP1大鼠平足蛋白(PDPN)ELISA試劑盒,英文名:PDPN ELISA Kit人轉(zhuǎn)錄因子21(TCF-21)ELISA試劑盒人96T0.78-50 ng/mL大鼠結(jié)合珠蛋白(Hpt)ELISA試劑盒,英文名:Hpt ELISA KiISA Kit for Human Toll-like receptor 5大鼠骨骼肌肌動蛋白α1(ACTα1)ELISA試劑盒,英文名:ACTα1 ELISA Kit人紡錘蛋白受體UNC5C(Netrin receptor UNC5C)ELISA試劑盒人96T0.156-10 ng/mL大鼠蛋白激酶Cε(PKCε)ELISA試劑盒,英文名:PKCε ELISA Kit
人B細(xì)胞淋巴瘤因子2(Bcl-2)ELISA試劑盒人96T78-5000 pg/mL小鼠抗中性粒細(xì)胞核周抗體(pANCA)ELISA試劑盒,英文名:pANCA ELISA KiISA Kit for Human Protein Wnt-2b大鼠白介素21(IL21)ELISA試劑盒,英文名:IL21 ELISA Kit大鼠CD83分子(CD83)ELISA試劑盒,英文名:CD83 ELISA Kit豚鼠促腎上腺皮質(zhì)激素(ACTH)ELISA試劑盒,英文名:ACTH ELISA KiISA Kit for Arachidonic acid小鼠轉(zhuǎn)化生長因子β1(TGF-β1)ELISA試劑盒,英文名:TGF-β1 ELISA Kit人環(huán)AMP依賴性轉(zhuǎn)錄因子(ATF-2)ELISA試劑盒人96T0.312-20ng/mL小鼠血小板因子4(PF-4/CXCL4)ELISA試劑盒,英文名:PF-4/CXCL4 ELISA KiISA Kit for Human Serum amyloid P-component小鼠同型半胱氨酸(Hcy)ELISA試劑盒,英文名:Hcy ELISA Kit
纖維素膜(30cm×3m 0.45um) 1卷 Whatman
ZNF281 英文名稱: 鋅指蛋白281抗體 0.2ml
Rhesus antibody Rh phospho-E2F1 (Ser332) 磷酸化轉(zhuǎn)錄因子E2F-1抗體 規(guī)格 0.1ml
FGF4/HSTF1/HBGF-4(Fibroblast Growth Factor4) 纖維母細(xì)胞生長因子4抗原Multi-class antibodies規(guī)格: 0.5mg
DEF6/IBP 英文名稱: 干擾素調(diào)節(jié)因子4結(jié)合蛋白抗體 0.2ml
腦鈉素/利鈉肽抗體 Anti-BNP 0.1ml
IDUA(Human Alpha-L-iduronidase) ELISA Kit 人αL艾杜糖苷酸酶Multi-class antibodies規(guī)格: 48T
Anti-NKB 神經(jīng)激肽B抗體Multi-class antibodies規(guī)格: 0.2ml
Rhesus antibody Rh IL-13 白介素13抗體 規(guī)格 0.1ml
17-OHCS ELISA Kit 大鼠17羥皮質(zhì)類固醇 96T
phospho-PIK3R1(Tyr368) 英文名稱: 磷酸化磷脂酰肌醇激酶抗體 0.1ml
CCL27/CTACK 英文名稱: 皮膚T細(xì)胞虜獲趨化因子抗體 0.1ml
Anti-NKB 神經(jīng)激肽B抗體Multi-class antibodies規(guī)格: 0.2ml