詳細(xì)介紹
細(xì)胞名稱(chēng) 人淋巴細(xì)胞;1301培養(yǎng)
形態(tài)特性 淋巴母細(xì)胞樣
品牌 懸浮生長(zhǎng)
特征特性
培養(yǎng)條件 RPMI 1640 (w/o Hepes) 10%FBS
傳代方法
傳代情況 Unknown
凍存條件 基礎(chǔ)培養(yǎng)基+5%DMSO+20%FBS
支原體檢測(cè) 陰性
STR
同工酶
染色體
使用權(quán)限 B類(lèi)
人淋巴細(xì)胞;1301培養(yǎng)貼壁細(xì)胞: 對(duì)于貼壁細(xì)胞應(yīng)先吸(倒)盡培養(yǎng)基,吸的越干凈越好,以免中和后加入的消化液,使強(qiáng)度減弱(或PBS洗1-3次)。50ml培養(yǎng)瓶加入消化液約1-3ml,按此比例進(jìn)行消化,(根據(jù)經(jīng)驗(yàn)),晃動(dòng)使消化液鋪均勻置37度培養(yǎng)箱約2-5分鐘,鏡下見(jiàn)細(xì)胞收縮變圓或少數(shù)脫落后,輕輕振動(dòng)瓶底使細(xì)胞全部脫落,加入2-3ml*培養(yǎng)基后,輕輕吹打,使細(xì)胞基本成單個(gè)懸浮,然后分置其它無(wú)菌培養(yǎng)瓶?jī)?nèi),加入*培養(yǎng)基后繼續(xù)培養(yǎng)或?qū)嶒?yàn)。
操作流程:
1.1 主要試劑與儀器:倒置相差顯微鏡(日本 olympus imt-413),co2孵箱(日本yamato it-61)。
1.2 hek-293細(xì)胞的復(fù)蘇培養(yǎng)傳代及凍存:
1.2.1 細(xì)胞的復(fù)蘇培養(yǎng) 從液氮罐中取出凍存管,立即投入37℃水浴,并不斷的搖動(dòng),使之迅速融化。 將溶解的細(xì)胞凍存管取出,用酒精消毒后打開(kāi),吸出溶有細(xì)胞的凍存液,加入事先裝好培養(yǎng)液(37℃預(yù)熱,8~10倍體積)離心管內(nèi),稍微吹打混勻,然后1000rpm 5min,去除上清,加入適量培養(yǎng)液,吹打成細(xì)胞懸液, 以1×105/ml密度接種于25cm2培養(yǎng)瓶?jī)?nèi),在37℃、5%co2及飽和濕度下培養(yǎng)。
1.2.2 細(xì)胞傳代 原代培養(yǎng)的hek-293細(xì)胞48h換液1次,細(xì)胞長(zhǎng)至60%~70%融合時(shí),用0.25%胰酶消化1~2min,將培養(yǎng)瓶再用手掌輕輕敲打使細(xì)胞脫壁、懸浮、分散,為使細(xì)胞進(jìn)一步分散可用吹打管輕輕吹打幾次,獲得細(xì)胞懸液,然后加入倍量的培養(yǎng)基,溫和混勻,吸管分裝混合液,傳代擴(kuò)增細(xì)胞。
1.3 細(xì)胞形態(tài)的觀察 在倒置顯微鏡下觀察并記錄細(xì)胞的生長(zhǎng)情況及形態(tài)特征。
1.4 細(xì)胞的計(jì)數(shù) 常規(guī)消化細(xì)胞,待細(xì)胞變圓、脫壁并浮起,加入少量培養(yǎng)基離心,再用pbs重懸并吹打制成細(xì)胞懸液。在細(xì)胞計(jì)數(shù)板蓋玻片的一側(cè)加微量細(xì)胞懸液,用10×物鏡觀察計(jì)數(shù)板四角大方格細(xì)胞數(shù),按公式計(jì)算出細(xì)胞數(shù)。細(xì)胞數(shù)/ml原液=(四方格細(xì)胞數(shù)之和/4) ×104。
1.5 細(xì)胞的貼壁率 指數(shù)生長(zhǎng)期的細(xì)胞,以0.25%胰酶消化成單細(xì)胞懸液,計(jì)數(shù)后分別接種于12個(gè)25cm2培養(yǎng)瓶中,每?jī)尚r(shí)隨機(jī)取出3瓶細(xì)胞,吸除培養(yǎng)基及未貼壁細(xì)胞,加入胰消化酶消化、計(jì)數(shù)已貼壁細(xì)胞,取其平均值,按照公式:貼壁率(%)=(已貼壁細(xì)胞數(shù)/接種細(xì)胞數(shù)) ×100%,計(jì)算貼壁率。
1.6 生長(zhǎng)曲線 取指數(shù)生長(zhǎng)期的細(xì)胞用胰酶消化制成單細(xì)胞懸液,以1×104/孔接種于24孔板,每孔加入1ml培養(yǎng)基。每天隨機(jī)取3孔,計(jì)數(shù)每孔細(xì)胞的數(shù)目并計(jì)算平均值。連續(xù)計(jì)數(shù)10d,繪制細(xì)胞生長(zhǎng)曲線
PCNA 大鼠增殖細(xì)胞核抗原Multi-class antibodies規(guī)格: 48T
Anti-EGFR 表皮生長(zhǎng)因子受體抗體Multi-class antibodies規(guī)格: 0.1ml
Rhesus antibody Rh Myf6 生肌調(diào)節(jié)因子6抗體 規(guī)格 0.2ml
C3bR(Human Complement fragment 3b rccptor) ELISA Kit 人補(bǔ)體片段3b受體 96T
Alpha SNAP 英文名稱(chēng): 可溶性附著蛋白α-SNAP抗體 0.2ml
CCN1 英文名稱(chēng): 富半胱酸肝素結(jié)合蛋白61抗體 0.1ml
Anti-EGFR 表皮生長(zhǎng)因子受體抗體Multi-class antibodies規(guī)格: 0.1ml
VLDLR(Human very low density lipoprotein receptor) ELISA Kit 人極低密度脂蛋白受體Multi-class antibodies規(guī)格: 48T
Anti-LAMR1 層粘連蛋白受體1抗體(N端)Multi-class antibodies規(guī)格: 0.1ml
Rhesus antibody Rh ITGB4 整合素β4抗體 規(guī)格 0.1ml
EPO ELISA Kit 大鼠紅細(xì)胞生成素 96T
Piccolo 英文名稱(chēng): 神經(jīng)細(xì)胞突觸蛋白PCLO抗體 0.2ml
C20orf4 英文名稱(chēng): 20號(hào)染色體開(kāi)放閱讀框4抗體 0.2ml
Anti-LAMR1 層粘連蛋白受體1抗體(N端)Multi-class antibodies規(guī)格: 0.1ml
人硒蛋白P1(SEPP1)ELISA試劑盒人96T0.156-10 ng/mL大鼠碳酸酐酶Ⅱ(CA2)ELISA試劑盒,英文名:CA2 ELISA KiISA Kit for Hyaluronic acid小鼠胱天蛋白酶14(CASP14)ELISA試劑盒,英文名:CASP14 ELISA Kit人高密度脂蛋白膽固醇(HDL-C)ELISA試劑盒人96T12.5-800 ng/mL小鼠對(duì)氧磷酶1(PON1)ELISA試劑盒,英文名:PON1 ELISA KiISA Kit for Human Acetolactate synthase-like protein小鼠半胱氨酸蛋白酶抑制劑3(CST3)ELISA試劑盒,英文名:CST3 ELISA Kit人胰島素受體(ISR)ELISA試劑盒人96T1.56-100 ng/mL小鼠Slit同源物3(Slit3)ELISA試劑盒,英文名:Slit3 ELISA KiISA Kit for Human Insulin-like growth factor-binding protein 1小鼠Ⅳ型膠原(COL4)ELISA試劑盒,英文名:COL4 ELISA Kit人亮氨酰/半胱氨酰氨肽酶(Cystinyl aminopeptidase)ELISA試劑盒人96T0.78-50 ng/mL大鼠脂多糖(LPS)ELISA試劑盒,英文名:LPS ELISA Kit
人質(zhì)子肌醇轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白ELISA試劑盒人96T0.47-30 ng/mL大鼠膜聯(lián)蛋白A5(ANXA5)ELISA試劑盒,英文名:ANXA5 ELISA KiISA Kit for Human Lysozyme C大鼠血小板反應(yīng)蛋白/凝血酶敏感蛋白1(TSP-1)ELISA試劑盒,英文名:TSP-1 ELISA Kit人細(xì)胞色素c氧化酶(Cytochrome c oxidase subunit 3)ELISA試劑盒人96T0.156-10 ng/mL大鼠胃動(dòng)素(MTL)ELISA試劑盒,英文名:MTL ELISA KiISA Kit for Human Microtubule-associated protein 2大鼠神經(jīng)絲蛋白(NF)ELISA試劑盒,英文名:NF ELISA Kit人基質(zhì)金屬蛋白酶7(MMP-7/MAT)ELISA試劑盒人96T0.156-10 ng/mL大鼠內(nèi)毒素(ET)ELISA試劑盒,英文名:ET ELISA KiISA Kit for Human NADH dehydrogenase [ubiquinone] iron-sulfur protein 7, mitochondrial大鼠抗甲狀腺球蛋白抗體(ATGA/TGAB)ELISA試劑盒,英文名:ATGA/TGAB ELISA Kit人氧化低密度脂蛋白受體1(Ox-LDL receptor 1)ELISA試劑盒人96T9.375-600 pg/mL大鼠環(huán)加氧酶1(COX-1)ELISA試劑盒,英文名:COX-1 ELISA Kit
小鼠IgG干粉 10mg/50mg/100mg 國(guó)產(chǎn)
WDR19 英文名稱(chēng): WD重復(fù)膜蛋白19抗體 0.2ml
Rhesus antibody Rh phospho-CDKN1A/P21 (Ser130) 磷酸化p21蛋白抗體 規(guī)格 0.1ml
IL-16/LCF(interleukin-16)(Lymphocyte Chemotactic Factor) 白細(xì)胞介素-16抗原Multi-class antibodies規(guī)格: 0.5mg
DOK7 英文名稱(chēng): 接頭蛋白DOK7抗體 0.1ml
Anti-Phospho-Ack1(Tyr326) 磷酸化Ack1抗體Multi-class antibodies規(guī)格: 0.1ml
Human Beta-glucosidase ELISA Kit 人β葡糖苷酶Multi-class antibodies規(guī)格: 48T
Anti-NIT2 NIT2蛋白抗體Multi-class antibodies規(guī)格: 0.2ml
Rhesus antibody Rh IL-15 白介素15抗體 規(guī)格 0.1ml
17-KS ELISA Kit 大鼠17-酮類(lèi)固醇 96T
Phospho-PDGF Receptor beta (Tyr716) 英文名稱(chēng): 磷酸化血小板源性生長(zhǎng)因子受體B抗體 0.1ml
C8orf30A 英文名稱(chēng): 8號(hào)染色體開(kāi)放閱讀框30a抗體 0.2ml
Anti-NIT2 NIT2蛋白抗體Multi-class antibodies規(guī)格: 0.2ml
懸浮細(xì)胞: 一般傳代可直接將細(xì)胞原液分置其它培養(yǎng)瓶?jī)?nèi),加入*培養(yǎng)基繼續(xù)培養(yǎng),如要高濃度可先離心1000rpm,5min后加入*培養(yǎng)基,輕輕吹勻后,分置其它培養(yǎng)瓶?jī)?nèi)加入*培養(yǎng)基繼續(xù)培養(yǎng)。需要指出的是,在不同的科研小組中這些術(shù)語(yǔ)的定義會(huì)有所不同。許多研究員不用細(xì)胞系這個(gè)詞表示細(xì)胞群除非細(xì)胞經(jīng)過(guò)了遺傳改造。